Мікроскопія нативного препарату
Принцип методу - мікроскопічне дослідження нативних препаратів сечового осаду, отриманого при центрифугуванні сечі.
Необхідне обладнання
1. Центрифуга.
2. Мікроскоп.
3. Центрифужні пробірки.
4. Предметні і покривні скла.
хід дослідження
Приготування препаратів - в центрифужную пробірку поміщають 10 мл ранкової сечі після ретельного її перемішування. Центрифугують протягом 5 хв при швидкості 2 000 об. / Хв. Потім швидким нахилом пробірки зливають прозорий верхній шар, а залишився осад переносять піпеткою з тонко відтягнутим кінцем на середину предметного скла і покривають покривним. Треба намагатися перенести осад з мінімальною кількістю рідини, щоб покривне скло покривало його повністю. Велика крапля розпливається, коливається, препарат стає багатошаровим, і це ускладнює мікроскопічні дослідження. Вивчення препарату починають з малого збільшення (8 ґ 10) для загального огляду, а більш детальне вивчення препарату з кількісною оцінкою структур виробляють при великому збільшенні (10 ґ 40).
Якщо структури зустрічаються в кожному полі зору, то кількісну оцінку висловлюють їх числом в поле зору, при невеликій кількості структур, коли їх зустрічають далеко не в кожному полі зору, - числом в препараті.
Розрізняють організований і неорганізований осад.
організований осад
Еритроцити мають дискообразную форму, пофарбовані в характерний жовто-зелений колір. Включення в цитоплазмі відсутні. У концентрованої сечі кислої реакції еритроцити можуть набувати зірчасті форму. При тривалому перебуванні еритроцитів в сечі низької відносної щільності вони втрачають гемоглобін і мають вигляд одноконтурних або двоконтурних кілець. Розподіл еритроцитів на змінені і незмінені не має першорядного значення для вирішення питання про джерело гематурії.
Диференціювати еритроцити треба від дріжджових грибів і кристалів оксалатів округлої форми. Гриби, на відміну від еритроцитів, частіше овальної форми, більш різко заломлюють світло, мають блакитний відтінок і нирку. Оксалати зазвичай мають різну величину і різко заломлюють світло.
Додаток до препарату осаду краплі 5% -ної оцтової кислоти призводить до гемолізу еритроцитів, залишаючи гриби і оксалати без зміни.
У нормі еритроцити або не зустрічаються, або виявляються одиничні в препараті.
Гематурія може бути при ураженні паренхіми нирки (гломерулонефрит, пієлонефрит, пухлини та ін.), При важкому фізичному навантаженні і при ураженнях сечовивідних шляхів (ниркових мисок, сечоводів, сечового міхура, уретри).
Лейкоцити в сечі мають вигляд невеликих зернистих клітин округлої форми. При низькій відносній щільності сечі розмір їх збільшується і в деяких з них ( "активних") можна спостерігати броунівський рух гранул. При бактеріурії в лужній сечі лейкоцити досить швидко руйнуються. Лейкоцити в сечі представлені головним чином нейтрофілами, але іноді можна виявити лімфоцити і еозинофіли, які відрізняються багатою, рівномірної, великої, що переломлює світло зернистістю. Активні лейкоцити, так звані клітини Штернгеймера-Мальбина, можна виявити наступним чином.
I спосіб
Реактив Штернгеймера-Мальбина.
Розчин I. 3 г генціановий фіолетового, 20 мл етилового спирту, 0,8 г оксалату амонію, 80 мл дистильованої води.
Розчин II: 0,25 г сафраніну, 10 мл етилового спирту, 100 мл дистильованої води. Робочий розчин: 3 частини розчину I + 97 частин розчину II. Зберігається протягом 3 місяців.
хід дослідження
Центрифугують свіжу ранкову сечу. До осаду додають 1-2 краплі реактиву, розмішують, краплю беруть на скло, покривають покривним і проводять мікроскопію. При цьому розрізняють два види лейкоцитів: одні мають ядра пурпурно-червоного кольору і безбарвну або блідо-рожеву цитоплазму, інші блідо-синє, іноді блідо-фіолетове ядро і майже безбарвну цитоплазму. Блідо-сині клітини називаються клітинами Штернгеймера-Мальбина, в цитоплазмі деяких з них помітно активний рух гранул.
II спосіб
Реактив - 250 мг еозину; 10 мл гліцерину; 2 мл 1% -ного фенолу; 0,5 мл 40% -ного формаліну; 87,5 мл дистильованої води.
хід дослідження
Такий же, як попередній. Клітини Штернгеймера-Мальбина не фарбується або мають блідо-блакитний колір. Ядра всіх інших лейкоцитів забарвлюються в рожевий колір.
III спосіб
Реактив - 30 мл насиченого розчину метиленового синього в абсолютному алкоголі; 1,6 мл 1% -ного розчину КОН; 110 мл бі-дистильованої води.
хід дослідження
Краплю реактиву наносять на предметне скло поруч з краплею сечового осаду. Змішують і проводять мікроскопію в перші 5-10 хв. Клітини Штернгеймера-Мальбина безбарвні, ядра інших лейкоцитів - синього кольору.
У нормі в сечовому осаді у чоловіків від 0 до 3 лейкоцитів в полі зору, у жінок - від 0 до 5 лейкоцитів в полі зору.
Збільшення числа лейкоцитів в сечовому осаді свідчить про запальні процеси в нирках або сечовивідних шляхах. Наявність в сечі "активних" лейкоцитів свідчить про інтенсивність запального процесу незалежно від його локалізації.
епітеліальні клітини
Епітеліальні клітини в сечовому осаді мають різне походження, тобто десквамація їх відбувається з органів, покритих різними видами епітелію (багатошарового плоского, перехідного і кубічного призматичного).
Клітини плоского епітелію полігональної або округлої форми, великих розмірів, безбарвні, з невеликим ядром, розташовуються у вигляді окремих екземплярів або пластами.
Клітини перехідного епітелію різної форми (полігональні, "хвостаті", циліндричні, округлі) і величини мають жовтувате забарвлення, інтенсивність якої залежить від концентрації сечі і наявності пігментів, містять досить велике ядро. Серед клітин можна зустріти двоядерні. Іноді в клітках спостерігають дегенеративні зміни у вигляді грубої зернистості і вакуолізація цитоплазми.
Клітини ниркового епітелію неправильної круглої форми, незграбні або чотирикутні, невеликих розмірів (в 1,5-2 рази більше лейкоцита), злегка жовтуватого кольору. У цитоплазмі клітин зазвичай виражені дегенеративні зміни: зернистість, вакуолізація, жирова інфільтрація. В результаті цих змін ядра часто не виявляються. Клітини ниркового епітелію відносяться до кубічного і призматичним епітелію, вистилає ниркові канальці. Найчастіше вони розташовуються у вигляді груп, ланцюжків. У деяких випадках зустрічаються у вигляді комплексів округлої або фестончастої форми, що складаються з великої кількості клітин різної величини з явищами жирового переродження.
У сечовому осаді практично завжди зустрічають клітини плоского і перехідного епітелію від одиничних в препараті до одиничних в поле зору. Поодинокі в препараті клітини ниркового епітелію на тлі нормальної мікроскопічної картини сечового осаду не дають підстави говорити про патологію.
Особливої діагностичного значення клітини плоского епітелію, що потрапляють в сечу з піхви, зовнішніх статевих органів і сечовипускального каналу, не мають, але якщо їх виявляють розташованими шарами в сечі, взятої катетером, то це може вказувати на метаплазию слизової оболонки сечового міхура. Таку картину можна спостерігати при лейкоплакії сечового міхура і сечоводів, що є передпухлинним станом.
Перехідний епітелій вистилає слизову оболонку сечового міхура, сечоводів, ниркових мисок, великих проток передміхурової залози і простатичного відділу сечівника. Посилена ексфоліація клітин цього епітелію може бути при гострих запальних процесах сечового міхура і мисок, інтоксикаціях, а також при сечокам'яній хворобі і новоутвореннях сечовивідних шляхів.
Клітини ниркового епітелію можна виявити в сечовому осаді при ураженні паренхіми нирок (нефриті), інтоксикаціях, розладах кровообігу. Виявлення клітин ниркового епітелію в тісному зв'язку з циліндрами говорить про важке ураження нирок.
Циліндри - елементи осаду - являють собою білкові або клітинні освіти канальцевого походження, мають циліндричну форму і різну величину. У сечовому осаді розрізняють наступні види циліндрів: гіалінові, зернисті, воскоподібні, епітеліальні, еритроцитарні, пігментні, лейкоцитарні.
Гіалінові циліндри мають ніжні контури, прозорі, при яскравому освітленні погано помітні. На поверхні може бути легка зернистість за рахунок аморфних солей або клітинного детриту. Утворюються з згорнутого білка. Поява гіалінових циліндрів свідчить про розвиток протеїнурії, що є наслідком підвищеної проникності клубочкової капілярів. Вони являють собою колоїдну форму білка, що виникає при зміні рН.
• Зернисті циліндри мають більш різкі контури і складаються з щільної зернистої маси жовтуватого кольору.
• Фляки циліндри мають різко окреслені контури і гомогенну з блиском, злегка жовтувату структуру. Утворюються з ущільнених гіалінових і зернистих циліндрів у разі затримки їх в канальцях.
• Епітеліальні циліндри мають чіткі контури і складаються з клітин ниркового епітелію.
• еритроцитарні циліндри жовтуватого кольору, складаються з маси еритроцитів, утворюються при нирковій гематурії.
• Пігментні циліндри можуть бути виявлені при гемоглобинурии і миоглобинурии; вони коричневого кольору, мають схожість з зернистими.
• Лейкоцитарні циліндри утворюються з маси лейкоцитів, виявляються при гнійних процесах в нирках, пієлонефрити.
Крім циліндрів, утворених з білка і клітин, в сечовому осаді іноді зустрічаються освіти циліндричної форми з аморфних солей, які не мають практичного значення. Ці освіти розчиняються при підігріванні препарату або додаванні до нього краплі лугу або кислоти.
У нормальній сечі можна зустріти поодинокі гіалінові циліндри (1-2 в препараті).
Цилиндрурия є симптомом ураження паренхіми нирки; хоча і вважається, що вид циліндрів особливого діагностичного значення не має, гіалінові циліндри підтверджують ренальную протеинурию, а лейкоцитарні і еритроцитарні дають можливість припустити джерело лейкоцитурії і гематурії.