Сухі мазки • Приготування мазка • Висушування мазка при кімнатній температурі (1 година) • Фіксація в ацетоні (10 хв.)
Вологі мазки • Приготування мазка • Фіксація в етанолі (10-15 хв.) Висушування на повітрі
• Метод обробки тканини з метою закріплення її прижиттєвої структури
• Досягається шляхом впливу на тканину спеціальних розчинів (фіксаторів)
• Кількість фіксатора слід брати в 20-30 разів більше обсягу шматочка фіксованої матеріалу
• Прості фіксатори: 10-20% розчин формаліну, 96 º спирт, 100 (абсолютний) спирт, 1-2% розчин осмієвою кислоти і ін.
• Складні фіксатори: спирт - формол (спирт 70º - 100 мл. І формалін 2-5 мл.) Рідина Ценкера (сулема - 5 г, сірчанокислий натрій - 1 р двухромовокіолий калій - 2,5 г, дистильована вода - 100 мл. крижана оцтова кислота 5 мл.) і ін.
• Тривалість фіксації - від декількох годин до 1 доби і більше в залежності від властивостей фіксатора і характеру досліджуваного матеріалу.
Загальні правила фіксації матеріалу
• Матеріал фіксується безпосередньо і негайно після взяття.
• Для фіксації матеріалу вживається скляна або глиняний посуд (уникати металевої).
• Обсяг фіксує рідини повинен в 20-30 разів перевищувати обсяг фіксованої матеріалу.
• Фіксує рідина змінюється до тих пір, поки вона не стане прозорою (необхідно позбутися від домішок крові).
• Матеріал оформляється етикеткою з щільного паперу з написом графітним олівцем або тушшю.
• Фіксування проводиться без доступу світла.
• Підвищена температура прискорює фіксацію. Оптимальна температура фіксації 37 ° С.
• Найпоширенішим стандартним методом фіксації є формалін. Формаліном називається 40% водний розчин газу формальдегіду (НСОН).
Фіксація в формаліні
1. Дифузія формаліну в зразок (приблизно 1 мм / год)
2. Хімічна фіксаціяХіміческій компонент фіксації у формаліні
Метод екстреної фіксації:
• шматочок матеріалу товщиною менше 0,5 см поміщається в пробірку з 20% водний формаліном
• нагрівається протягом 3-5хв, до появи пухирців (не кип'ятити)
Формалінова фіксація не досягає мети при дослідженні:
• тонких цитологічних структур • речовин, розчинних у воді (глікоген, сечова кислота) • Переваги формалінової фіксації • Простота і дешевизна. • Хороша збереження структур.
• Недоліки фіксації у формаліні • Неможливість виявлення речовин, розчинних у воді (глікоген, сечова кислота). • Погане виявлення цитологічних структур (хондріосом, апарату Гольджі та ін.).
• Для виявлення речовин, розчинних у воді, користуються безводними фіксаторами (абсолютний спирт, 96% спирт).
Правила взяття зразків з фіксованих органів і тканин. З фіксованого об'єкта (тканина, орган або фрагмент органу) акуратно вирізати фрагмент з потрібного місця товщиною приблизно 3 мм, площею приблизно 0,5-2,5 см2
Селезінка -Вирезать фрагмент товщиною приблизно 3 мм з середньої частини у фронтальній площині
Кишечник -З кожного відділу кишечника вирізати фрагменти товщиною приблизно 3 мм у фронтальній площині
Нирка -З однієї нирки вирізати фрагмент товщиною приблизно 3 мм через весь орган із середньої частини в сагітальній площині З другої нирки вирізати фрагмент товщиною 2 мм із середньої частини, що включає ворота нирки у фронтальній площині.
Печінка - Вирізати фрагменти товщиною 3 мм з середньої частини каудальної, лівої латеральної, правої латеральної часткою у фронтальній площині
Серце - Вирізати фрагмент товщиною 2-3 мм з середньої частини органу, включаючи дугу аорти у фронтальній площині.
Легкі - Вирізати фрагменти товщиною приблизно 3 мм з середньої частини право краніальної і каудальної часткою і з середньої частини лівої частки.
• Зневоднення тканини виробляються поступово (щоб не відбулося сморщивания) шляхом проведення її через спирти зростаючої фортеці: 50º, 60º, 70º, 80º, 90º, 96º, 100º. У кожному спирті шматочки знаходяться від декількох годин до 1 доби в залежності від величини шматочка.
• Фіксація в забуференном формаліні (бл. 24 ч.)
• Промивання у проточній водопровідній воді (3 год.)
• 50% етанол (1 ч.) • 70% етанол (2 ч.) • 80% етанол (1 ч.) • 96% етанол (дві зміни по 30 хв.) • 96% етанол (залишаємо на ніч)
• Абсолютний спирт (2 зміни по 30 хв.) • Абсолютний етанол: ксилол (1: 1; 20 хв.)
• Ксилол (три зміни по 20 хв.) - 3 зміна при t = 56 # 8304; С • Суміш ксилол: парафін 1: 1 (20-25 хв. При температурі 56 # 8304; С)
• Парафін 1 при температурі 56 # 8304; С (1 ч.) • Парафін 2 при температурі 56 # 8304; С (1 ч.) • Парафін 3 охолодити
Заливальні станції • Модульні станції заливки • Станції для проводки і заливки