Гістологічні дослідження в гематології. Показання до трепанобиопсии
З гістологічних методів дослідження в гематології найбільш часто використовуються трепанобиопсия кісткового мозку і біопсія лімфатичних вузлів.
Основні показання до трепанобиопсии.
1) діагностика хронічних мієлопроліферативних захворювань (істинна поліцитемія, сублейкемічні мієлоз, есенціальна тромбоцитемія), крім хронічного мієлолейкозу;
2) діагностика апластичної анемії;
3) визначення стадії лімфогранулематозу і неходжкінських лімфом (ураження кісткового мозку - ознака IV стадії);
4) спленомегалія неясного генезу (для виключення хронічних мієлопроліферативних захворювань).
За свідченнями трепанобиопсия може використовуватися і в інших випадках (визначення повноти ремісії гострого лейкозу, діагностика множинної мієломи, виявлення характеру ураження кісткового мозку при хронічному лімфолейкозі та ін.).
Якщо більшу частину препарату займає окістя, кортикальна пластинка губчастої кістки і субкортикальні кістковомозкові осередки, трепанобіопсію необхідно повторити.
Кращі результати забезпечує фіксація стовпчика тканини, стане на місце, що містять сулему (ценкерформол, В5). Для декальцінаціі кісткової тканини застосовують насичений розчин хелатирующими з'єднання або кислоти. Можливе використання заливки недекальцінірованних трепанобіоптате в полимеризующиеся смоли.
Обов'язкова забарвлення зрізів гематоксилін-еозином, АЗУР II-еозином, по Перлсу; для диференціальної діагностики хронічних мієлопроліферативних захворювань необхідно виявлення ретикулінові волокон за допомогою імпрегнації зрізів сріблом (по Футу, Гордону-Світу і ін.).
Результати гістологічного дослідження кісткового мозку (трепанобіоптате) повинні характеризувати:
1) клітинної;
2) співвідношення мієлоїдного і еритроїдного паростків;
3) дозрівання клітин мієлоїдного ряду;
4) дозрівання клітин еритроїдного ряду;
5) стан еозинофілів і наявність огрядних клітин;
6) стан мегакариоцитарного паростка;
7) наявність інших клітин (лімфоцитів, плазмоцитів, гістіоцитів);
8) стромальні реакції (гранульоми, фіброз, некроз, серозна атрофія жиру, набряк);
9) наявність і кількість гемосидерину;
10) судинні порушення (амілоїдоз та ін.);
11) зміни кісткової тканини (остеопороз, хвороба Педжета і ін.);
12) наявність метастазів.
Біопсія. Для біопсії придатні практично всі органи і тканини. Проведення операційної біопсії лімфатичного вузла показано при будь-лимфоаденопатии (крім типових випадків реактивного лімфаденіту). У ряді випадків необхідне проведення пункції внутрішніх органів (зазвичай печінки, значно рідше - селезінки), яка найчастіше проводиться в умовах хірургічного стаціонару.
При дифузному процесі можлива неприцільно біопсія. при очаговом ураженні доцільно її проведення під контролем УЗД або комп'ютерної томографії. У деяких випадках (ізольоване збільшення вісцеральних лімфатичних вузлів, осередкове ураження ребер, хребта та ін.) Отримання матеріалу, необхідного для морфологічного дослідження, можливо тільки при хірургічному втручанні.
Найбільш часто застосовується біопсія лімфатичних вузлів з наступним цитологічним і гістологічним дослідженням. Аспіраційна біопсія дозволяє отримати матеріал, необхідний для діагностики інфекційних уражень лімфатичних вузлів (методами класичної бактеріології) і виявлення метастазів солідних пухлин.
Для діагностики лімфопроліферативних захворювань необхідна операційна біопсія лімфатичного вузла з наступним гістологічним і імуногістохімічним дослідженням. Часткове висічення лімфатичного вузла (інцизійна біопсія) використовується в ситуаціях, коли у пацієнта є конгломерат лімфатичних вузлів. У всіх інших випадках січуть лімфатичний вузол цілком (Ексцизійна біопсія).
Біопсію лімфатичних вузлів голови і шиї при відсутності протипоказань проводять під загальною анестезією. При генералізованої лімфаденопатії використовують біопсію шийних, надключичних, пахвових лімфатичних вузлів. Біопсія пахових лімфатичних вузлів є небажаною (вони нерідко несуть сліди масивної антигенної стимуляції, що ускладнює інтерпретацію гістологічних змін).
Для видалення вибирають найбільш змінений, великий, глибоко лежить лімфовузол. Під час операції намагаються браншамі пінцета захоплювати лімфатичний вузол тільки за капсулу.
До занурення лимфоузла в фіксуючу рідину його необхідно гострим лезом розсікти на дві частини через ворота по малому діаметру. Зі свіжою поверхні зрізу кожної частини роблять мазки-відбитки для цитологічного дослідження. Для проводки і заливки шматочки вирізують після того, як розсічений лімфатичний вузол профіксіруется протягом декількох годин. Погана фіксація сильно впливає на розміри ядер клітин і будова гетерохроматина (ядра клітин мають великі розміри).
Обов'язкова забарвлення зрізів гематоксилін-еозином, АЗУР II-еозином і застосування імуногістохімічних реакцій.