Крохмаль з розчином Люголя дає синє забарвлення (реакція з йодом). При кип'ятінні крохмалю в присутності соляної кислоти відбувається його послідовний гідроліз, що відзначається по реакції з йодом.
Приготувати штатив з рядом пробірок (5-8 шт.). Впервую пробірку ввести 2-3 мл розчину крохмалю, додати 1 краплю розчину Люголя, з'являється синє забарвлення.
У колбу налити 20 мл розчину крохмалю, додати 16-18 крапель концентрованої НCl і поставити на електроплитку (спиртівку) гріти. Після початку кипіння, обережно, не припиняючи кипіння суміші, через кожні хвилини, з колби піпеткою брати по 1 мл розчину і послідовно носити в пробірки з водою, додаючи по 1 краплі розчину Люголя. Спостерігати за зміною фарбування розчинів в пробірках. Фіолетове забарвлення вказує на наявність амілодекстрінов, червоно-буре - еритродекстрини, жовте - ахродекстрінов і мальтози. При появі жовтого кольору в пробірці кип'ятіння зупинити. З розчином в останній пробірці провести реакцію Троммера. За отриманими результатами зробити висновок.
Кислотний гідроліз клітковини.
Клітковина є полисахаридом, але на відміну від крохмалю з йодом синє забарвлення не дає, це пов'язано з її структурою.
В органах травлення у жуйних і моногастричних тварин клітковина розщеплюється до летких жирних кислот мікроорганізмами рубця і пих відростків кишечника.
В пробірку внести шматочок вати і розчин сірчаної кислоти в співвідношенні 3: 1. Після повного розчинення вати (через 15-20 хвилин) суміш перенести в колбу і поставити її кип'ятити. Періодично (в 5 хвилинні інтервали) відбирати пробу 1-2 мл в пробірку, нейтралізувати його 40% -ним розчином NaOH до вираженої лужної реакції (контроль за лакмусовим папері) і додавши 1-2 краплі CuSO4 (1% розчин) нагріти. Поява жовто-червоного або оранжево-червоного забарвлення свідчить про припинення гідролізу. За отриманими результатами зробити висновок.
- Особливості ферментативних реакцій.
- Механізм дії ферментів.
- Застосування в практиці ферментних препаратів.
Лабораторна робота №2.
«Якісні реакції на дегідрогенази»
1.1 Мета роботи: вивчити дію дегидрогеназ молока і м'язів.
1.2 Реактиви: молоко або кефір, м'язова кашка (0,5 гр. М'язів розтертих в ступці з 3 - 4 мл фізрозчину); 0,4% розчин формальдегіду, метиленовая синь, бурштинова кислота (3% розчин нейтралізований їдким натром до слабо лужної реакції на лакмус).
2.3 Обладнання - штатив із пробірками, водяна баня, термометри, електроплитки або спиртівки.
Досвід 1 - дія альдегідоксидази (ксантиноксидази) молока.
У молоці міститься фермент, що прискорює дегидрирование різних альдегідів (формальдегіду, ацетальдегіду і ін.). Якщо реакція дегідрування протікає в присутності газоподібного кисню, то водень переноситься на кисень з утворенням перекису водню. У присутності метиленової сині вона служить акцептором, на якій альдегідоксидазою переносить водень з окисляемого субстрату.
Налити в дві пробірки по 4 - 5 мл молока або кефіру, вміст однієї пробірки прокип'ятити і охолодити. Додати в обидві пробірки по 8 - 10 крапель розчину формальдегіду і по 1 - 2 краплі метиленової сині, перемішати і поставити в водяну баню при 37 - 40 ° С. Через деякий час спостерігається знебарвлення метиленової сині в одній пробірці і відсутність знебарвлення в інший (кип'яченою).
Записати схему досвіду результати і висновки занести в таблицю 2.
Досвід 2 - спостереження дії сукцінатдегірогенази м'язів.
Сукцінатдегідрогеіаза окисляє бурштинову кислоту (сукцинат) в фумаровую (фумарат). При наявності метиленової сині остання відновлюється в безбарвну лейкосполуку.
У дві пробірки внести по 3 - 4 мл. м'язової кашки і в одну з них додати 6-8 крапель нейтралізованого розчину янтарної кислоти. Потім в обидві пробірки долити по 2 краплі розчину метиленової сині, струсити і поставити в баню з температурою 37 - 40 ° С. Через деякий час відбувається знебарвлення метиленової сині в пробірці з бурштинової кислотою, У другій пробірці забарвлення зберігається. Написати схему досвіду, пояснити його результати і зробити висновки. Дані занести в таблицю 2.
Таблиця 2. Результати дії дегидрогеназ.