Проведення екстракорпорального запліднення, внутрішньоматкової інсемінації в певних випадках передбачає використання замороженого біологічного матеріалу - сперматозоїдів. Кріоконсервація сперми проводиться практично в будь-якому репродуктивному центрі.
Заморожений матеріал може зберігатися в банку сперми довго, але точний період, при якому зберігається життєздатність сперматозоїдів, поки не з'ясовано. На сьогоднішній день максимальний термін зберігання сперматозоїдів, при якому була отримана результативна вагітність, склав 21 рік.
Навіщо потрібна заморозка сперми - кріоконсервація?
Насправді заморозка сперми поза програмами ЕКО - досить часте явище. Це обумовлено підвищенням інформованості населення про можливості заморозити чоловічі статеві клітини на тривалий термін без збитку для їх якісних характеристик.
Необхідність кріоконсервації сперми виникає в таких випадках:
- Перед лікуванням онкологічних захворювань будь-якого органу, включаючи лімфатичну систему і органи кровотворення.
Терапія пухлин різних локалізацій передбачає використання хіміопрепаратів і променевої терапії. Механізм дії медикаментозних засобів, що використовуються для лікування новоутворень, розрахований на пошкодження або припинення росту швидко діляться клітин. А для клітин-попередників сперматозоїдів якраз характерно швидке розподіл. Радіотерапія також згубно впливає на чоловічі гамети. Хіміо- і радіотерапія різко знижує вироблення сперми. У 15-30% чоловіків після лікування хіміопрепаратами розвивається тимчасове або стійке безпліддя, а дисфункція гонад (статевих органів) - у 45-80%. Тому, якщо чоловікові або хлопцю належить лікування новоутворень, має сенс заморозити сперму.
- Деякі види спорту досить травматичні. Виключити пошкодження яєчок можна і в повсякденному житті. Тому до послуг зберігання замороженої сперми часто вдаються спортсмени і люди, діяльність яких пов'язана з ризиком.
- Хірургічні втручання на статевих органах чоловіка, наприклад, вазектомія. Ця операція досить часто призводить до стійкого безпліддя.
- Має сенс заморожувати сперму пацієнтів з пошкодженим спинним мозком, так як в 95% випадків втрачається здатність до еякуляції.
У програмах ЕКЗ, сурогатного материнства, внутрішньоматкової інсемінації та екстракорпорального запліднення для одиноких жінок за показаннями також може використовуватися сперма після кріоконсервації. Причому для процедур використовують попередньо заморожені сперматозоїди чоловіка або донора (після їх розморожування).
Показання для заморозки сперми партнера
Часто необхідність заморозити сперму чоловіка для ЕКО виникає при незадовільних характеристиках еякуляту і власне статевих клітин:
- при олігоспермії - недостатній кількості клітин в спермі;
- при астнозоосперміі - низьку активність і рухливості сперматозоїдів.
При перерахованих патологіях еякулят - сперму для заморозки здають кілька разів, з перервою в 2-3 доби, до накопичення достатньої кількості сперми або виробляється заморозка сперматозоїдів одиничних, які можуть бути виділені. Тоді методика ускладнюється - потрібне збільшення витрат часу і зусиль
Попередньо заморозити сперму чоловіка можна, якщо він не зможе перебувати в репродуктивному центрі під час проведення процедури екстракорпорального запліднення або інсемінації.
Навіщо заморожують сперму донорів?
Заморожування сперматозоїдів донора виробляють з двох причин. Перша - зразки завжди в наявності і зберігаються в банку сперми. Друга - найголовніша - запобігання передачі ВІЛ, вірусних гепатитів та сифілісу. Сперматозоїди донора до початку їх використання зберігаються в криохранилище мінімум 6 місяців. Це своєрідний карантин. За цей час проводиться повторне обстеження донора на предмет перерахованих вище захворювань. Таким чином, виключається ймовірність, що на момент здачі біологічного матеріалу донор був інфікований, але клінічно захворювання ще не проявилося (продромальний період хвороби).
Техніка заморожування сперми. Як це робиться?
Заморожування сперми без втрати якості клітин стало можливим після відкриття кріопротекторними властивостей гліцерину при заморожуванні клітин в 1949р. Більшість криопротекторов, використовуваних зараз, створені на основі гліцерину. Їхній головний недолік - токсичність, потенціал якої багато в чому залежить від дози, експозиції і типу впливу.
Захисний механізм кріопротектори на клітку заснований на таких ефектах:
- можливості проникати в клітку;
- здатності до дегідратації (витіснення молекул води, що призводить до зменшення утворень кристалів, які ушкоджують органели і клітинну стінку);
- здатності зменшувати концентрації електролітів дозволяє знижувати осмотичний тиск у клітині;
- взаємодія з фосфоліпідами клітинної стінки призводить до зниження точки замерзання, а це захищає мембрану клітини.
Методика кріоконсервації сперми
Методика кріоконсервації сперматозоїдів відбувається поетапно і в залежності від можливостей і обладнання лабораторії може відрізнятися.
Підготовка сперми до кріоконсервації:
- отриману пробу сперми поміщають в інкубатор на 30-35 хвилин для розрідження;
- центрифугируют в рідкому фільтрі з градієнтом щільності для отримання фракції рухливих сперматозоїдів;
- отриману фракцію відмивають і витримують 10 хв при кімнатній температурі з кріопротектор;
- в цей час соломини для кріоконсервації маркують і забезпечують необхідною інформацією: дата заморозки, прізвище та ініціали Номер картки;
- підготовлені сперматозоїди поміщають в соломини і запечатують.
- охолодження пробірок зі сперматозоїдами і кріопротекторів до температури 4 ° C в морозильній установці при -20 ° C;
- заморожування в рідкому азоті при температурі -79 ° C протягом 2 годин;
- депонування - пробірки переносяться в посудину Дьюара з температурою -196 ° C.
Обстеження перед заморожуванням сперми і підготовка
Стандартний перелік обстеження включає:
- Мазок на приховані інфекції.
- Аналізи на ВІЛ, вірусні гепатити і сифіліс.
- Кріотест - оцінка якості сперматозоїдів після розморожування, в середньому виживають 60-75% клітин. Результати повідомляються пацієнтові або донору.
- Тест на здатність до запліднення.
- Спермограма.
- Аналіз на наявність антитіл до вірусу простого герпесу.
Властивості замороженої сперми після кріоконсервації
Кріоконсервація сперми не впливає на генетичну інформацію і якісні характеристики сперміїв, успішно перенесли заморозку і розмороження. Але частина статевих клітин при розморожуванні гине. Виживає за різними даними від 60 до 75%, що досить для проведення екстракорпорального запліднення і штучної інсемінації. Відсутні дані про зниження частоти запліднення і успішного розвитку вагітності при використанні в програмах ЕКЗ сперматозоїдів, вдало перенесли розмороження.
Властивості замороженої сперми зберігаються протягом 3 років при правильному зберіганні. Після цього терміну вона починає втрачати свої якості. Але відомі випадки успішного застосування розмороженої сперми в програмах ЕКЗ після закінчення 13 і 21 року після кріоконсервації. Технології заморозки сперми дозволяють зберегти функції і морфологічну структуру чоловічих гамет. Є дані про отримання життєздатних гамет після розморожування сперми, замороженої 28 років тому.
Як відбувається розморожування сперми після кріоконсервації?
Як правило, «сильні» і генетично повноцінні сперматозоїди розмороження переносять добре.
Різні лабораторії репродуктивних центрів проводять розмороження сперми. використовуючи різні техніки відтавання:
- при кімнатній температурі;
- в морозильній камері зі зворотним програмою заморозки;
- на водяній бані, нагрітій до 37 ° C.
Всі перераховані методи розморожування спрямовані на те, щоб швидкість відтавання відповідала швидкості заморожування.
Кріосоломіну видаляють з посудини Дьюара, розморожують в штативі одним з перерахованих способів. Після чого відразу виробляють відмивання спеціальними розчинами для попередження токсичного впливу гліцерину і оцінюють якість розморожених сперматозоїдів.
Кріоконсервація сперми - метод гідний поваги, що дозволяє обходити багато підводні камені безпліддя. Але наукові роботи з удосконалення методу тривають. Крім того, ведуться роботи по визначенню та розробці альтернативних методів тривалого зберігання сперматозоїдів.