Державне санітарно-епідеміологічне нормування
Російської Федерації
4.2. Методи контролю. БІОЛОГІЧНІ
І МІКРОБІОЛОГІЧНІ ФАКТОРИ
Методи санітарно-бактеріологічних
досліджень об'єктів навколишнього
середовища, повітря і контролю стерильності
в лікувальних організаціях
1. Розроблено ФБУЗ «Федеральний центр гігієни та епідеміології» Росспоживнагляду (А.І. Верещагін, М.В. Зароченцев, І.В. Новокшонова, М.А. Ярославцева); ФГУН ЦНДІ епідеміології Росспоживнагляду (А.В. Тутельян, С.Ш. Рожнова); ФБУН НДІ дезинфектології Росспоживнагляду (І.М. Абрамова, Л.Г. Пантелєєва, Н.Ф. Соколова).
2. Рекомендовані до затвердження Комісією з державного санітарно-епідеміологічного нормування при Федеральній службі з нагляду у сфері захисту прав споживачів і благополуччя людини.
Керівник Федеральної служби
з нагляду в сфері захисту прав
споживачів і благополуччя людини,
Головний державний санітарний
лікар Російської Федерації
Дата введення: з моменту затвердження
4.2. Методи контролю. БІОЛОГІЧНІ І
МІКРОБІОЛОГІЧНІ ФАКТОРИ
Методи санітарно-бактеріологічних досліджень
об'єктів навколишнього середовища, повітря і контролю
стерильності в лікувальних організаціях
1.1. Справжні методичні вказівки призначені для фахівців органів, які здійснюють функції по контролю і нагляду у сфері забезпечення санітарно-епідеміологічного благополуччя населення, організацій та установ Росспоживнагляду, лікувально-профілактичних та інших організацій незалежно від організаційно-правової форми та форми власності.
1.2. Методичні вказівки встановлюють методи санітарно-бактеріологічних досліджень в установах охорони здоров'я, інших організаціях лікувального профілю. Об'єктами санітарно-бактеріологічних досліджень, на які поширюються ці методичні вказівки, є:
· Об'єкти навколишнього середовища, в т.ч. вироби медичного призначення, зонди, катетери, бужі, гумові рукавички та інші вироби з гуми і металів, шовний матеріал, підготовлений до використання, та інше, спецодяг;
1.3. Номенклатура, кратність і об'єм санітарно-бактеріологічних досліджень встановлюється діючими нормативно-методичними документами з урахуванням санітарно-епідеміологічної обстановки.
1.4. Для санітарно-бактеріологічних досліджень об'єктів навколишнього середовища, повітря і контролю стерильності виробів медичного призначення у закладах охорони здоров'я та інших організаціях лікувального профілю можуть бути використані поживні середовища лабораторного і промислового приготування, витратні матеріали, біологічні препарати, зазначені в цих методичних вказівках. Застосування інших комерційних поживних середовищ (витратних матеріалів, біологічних препаратів) допускається при наявності методик дослідження, затверджених і дозволених до застосування в установленому порядку.
2.3. МУ 4.2.2723-10 «Лабораторна діагностика сальмонельозів, виявлення сальмонел у харчових продуктах і об'єктах навколишнього середовища».
3.1. Дослідження бактеріального обсіменіння повітряного середовища
3.1.1. Дослідження бактеріального обсіменіння повітряного середовища проводять в приміщеннях лікувальних організацій в залежності від їх функціонального призначення на санітарно-мікробіологічні показники:
загальна кількість мікроорганізмів в 1 м 3 повітря (КУО / м 3);
кількість колоній S. aureus в 1 м 3 повітря (КУО / м 3);
кількість цвілевих і дріжджових грибів в 1 м 3 повітря.
3.1.2. Проби повітря відбирають аспіраційних методом за допомогою апаратів і пристроїв, дозволених до застосування в установленому порядку.
Кількість пропущеного повітря має становити 100 дм 3 для визначення загальної кількості мікроорганізмів, дріжджових і цвілевих грибів і 250 дм 3 для визначення S. aureus. Дослідження повітря седиментаційним методом не допускається.
3.1.3. Для визначення загальної кількості мікроорганізмів в 1 м 3 повітря забір проб проводять на поживний агар типу МПА, СПА, ГРМ-агар та інші, приготовлені відповідно до інструкцій із застосування. Посіви інкубують при температурі 37 ° С протягом (48 ± 2) год, підраховують кількість колоній, що виросли і проводять перерахунок на 1 м 3 повітря. При наявності росту колоній дріжджових і цвілевих грибів, їх підраховують і роблять перерахунок на 1 м 3 повітря. У протоколі кількість дріжджових і цвілевих грибів вказують окремо.
Примітка: При перенесенні апаратів і пристроїв для відбору проб повітря з одного приміщення в інше їх поверхню обробляють розчином дезінфікуючого засобу. Столик, внутрішні стики, кришку і інші частини приладу з внутрішньої і зовнішньої сторони протирають спиртом (70%).
Для визначення наявності S. aureus забір проб проводять на желточно-сольові середовища на основі середовищ: елективний-сольовий агар, стафілокок-агар, маннітолагар або середовище № 10 по ГФ XII, агар Байд-Паркер. Чашки з посівами інкубують в термостаті при 37 ° С (48 ± 2) год.
2. Другий-третій день.
На вищевказаних середовищах стафілокок росте у вигляді круглих, блискучих, маслянистих, опуклих, пігментованих колоній. Слід враховувати, що стафілококи, виділені від людини, дають позитивну лецітовітеллазной реакцію в 60 - 70% випадків. Отвивки на скошений агар для подальшого дослідження не менше 2 колоній, підозрілих на стафілокок. Для дослідження отвівают насамперед колонії, що дають позитивну лецітовітеллазной реакцію (утворення веселкового віночка). При відсутності на чашках таких колоній подальшому дослідженню піддаються пігментовані колонії, схожі за морфологією зі стафілококом. При одночасній наявності на чашках колоній стафілокока, що відрізняються по пігменту, слід отвівают не менше двох колоній різного виду. Пробірки з посівом поміщають в термостат при 37 ° С на (24 ± 2) год.
3. Четвертий день.
Після інкубації у виділених штамів перевіряють морфологію, тинкторіальних властивості (забарвлення по Граму) і наявність плазмокоагулирующей активності в реакції плазмокоагуляции (РПК).
Забарвлення по Граму проводять загальноприйнятим методом. Під мікроскопом забарвлені по Граму стафілококи мають вид фіолетово-синіх коків, що розташовуються гронами або невеликими купками ( «мереживо»).
Якщо культура має тільки плазмокоагулирующей або тільки лецітовітеллазной активністю, то для остаточної відповіді потрібно враховувати інші ознаки, що дозволяють визначити приналежність штаму до виду S. aureus (ферментація маніту, гемолітична активність).
При необхідності, після виділення чистої культури, проводять визначення чутливості / стійкості до антибіотиків, дезінфікуючих засобів, бактеріофагів.
Облік результатів додаткових тестів. Остаточна видача відповіді.
3.2. Дослідження мікробного обсіменіння об'єктів зовнішнього середовища
3.2.1. Бактеріологічне дослідження мікробної обсіменіння об'єктів зовнішнього середовища передбачає визначення стафілококів, бактерій групи кишкових паличок, сальмонел, синьогнійної палички. Відбір проб з поверхонь різних об'єктів здійснюють методом змивів. За епідеміологічними показниками номенклатура досліджень мікробного обсіменіння об'єктів зовнішнього середовища може бути розширена.
3.2.2. Взяття змивів виробляють стерильними ватними тампонами, вмонтованими в пробірки. Для зволоження тампонів в пробірки наливають по 2,0 мл стерильної 0,1% пептонною води з додаванням нейтралізаторів дезінфікуючих засобів.
3.2.3. При контролі дрібних предметів змиви забирають з поверхні всього предмета. При контролі предметів з великою поверхнею змиви проводять в декількох місцях досліджуваного предмета загальною площею приблизно 100 см 2.
3.2.4. Для виявлення стафілококів роблять висів 0,2 - 0,3 мл змивний рідини в пробірку з 5,0 мл 6,5% сольового бульйону. Засіяні пробірки інкубують при 37 ° С протягом (24 ± 2) год, після чого роблять висів на желточно-сольові середовища на основі середовищ: елективний-сольовий агар, стафілококкагар, манітолагар або середовище № 10 по ГФ XII, агар Байд-Паркер. Подальші дослідження виділених культур стафілококів проводять по п. 3.1.4.
3.2.5. Для виявлення бактерій групи кишкових паличок роблять висів 0,2 - 0,3 мл змивний рідини в пробірку з 5,0 мл середовища Кесслера. Засіяні пробірки інкубують при 37 ° С протягом (24 ± 2) год і роблять пересів на середовище Ендо. Виросли колонії на середовищі Ендо піддають подальшому вивченню для встановлення їх можливої приналежності до патогенних ентеробактеріями.
3.2.6. Для виявлення сальмонел роблять висів 0,2 - 0,3 мл змивний рідини в пробірку з 5,0 мл однією з середовищ збагачення (магнієва, селенітовий або середовище Раппапорта-Вассіліадіса). Засіяні пробірки інкубують при 37 ° С протягом 18 - 20 год, роблять пересів на середовище Ендо і вісмут-сульфіт агар з подальшим відбором підозрілих колоній і їх ідентифікацією.
3.2.7. Для виявлення синьогнійної палички роблять висів на середовище № 8 (бульйон для накопичення стафілококів і синьогнійної палички) і середу № 9 (для визначення синьогнійної палички за наявністю пігменту піоціанін) або поживні середовища відповідно до ГФ XII. Колонії, підозрілі на синьогнійну паличку (колонії з рівними або злегка хвилястими краями, гладкою блискучою поверхнею з характерним запахом і пігментом, однак, слід врахувати, що запах і пігмент можуть сильно варіювати або взагалі бути відсутнім), пересівають на скошений агар.
P. aeruginosa - грам, рухлива, оксидазопозитивних паличка, окислююча, але не ферментує глюкозу, що дає зростання при 42 ° С.
3.2.8. Орієнтовний перелік об'єктів, що підлягають санітарно-бактеріологічному контролю методом змивів:
А. Операційний блок:
· Маска наркозного апарату;
· Трійник наркозного апарату;
· Ємності і пристосування для миття та обробки рук;