Отримання фагів. Практичне використання фагів
Низька ефективність фаготерапіі і фагопрофілактика компенсується широким використанням фагів для ідентифікації та внутрішньовидової диференціації бактерій, при діагностиці інфекційних хвороб та епідеміологічному обстеженні вогнищ дизентерії, сальмонельозів, дифтерії, стафілококових та інших інфекцій, де з їх допомогою вдається виявити джерела і шляхи передачі заразного початку. В якості ілюстрації наведемо способи виявлення фагів і визначення їх активності, методики індукції лізогенних бактерій і фаготипирования.
Виділення вирулентного фага. Для виділення фага досліджуваний рідкий матеріал центрифугують. Надосадову рідину в кількості 1 мл переносять в 30 мл м'ясо-пептони но го бульйону (МПБ), засіяного 1 мл 6-18-годинної культури відповідного мікроорганізму.
Посів поміщають в термостат при температурі 37 ° С на добу, після чого пропускають через фільтр Зейтца, фільтрат розводять 1:10, 1: 100, 1: 1000 і додають по 0,05 мл культури. Контрольної служить бульйонна культура без фільтрату. Через 18-20 год пробірки витягують з термостата. Про наявність фага судять по просвітління середовища (в контрольній відзначається нормальний ріст бактерій).
Індукція лізогенних бактерій ультрафіолетовими променями. Свежевиросшую 8-годинну культуру бактерій розводять 1: 20-1: 30 вероналовим буфером і по 5 мл розливають в дві чашки Петрі. Одну з них (дослідну) відкривають і протягом 30-180 з опромінюють під бактерицидною лампою БУВ, а другу (контрольну) - витримують в зоні дії УФ-променів закритою. Потім обидві суспензії бактерій (3-3,5 мл) засівають у дві пробірки з 5 мл відповідної живильного середовища і після декількох годин інкубації в термостаті в опроміненому посіві виявляють політично ефект дії вегетативних фагів.
Типування стафілококів набором 23 еталонних фаговаров. Добову культуру золотистого стафілокока 209 Р висівають в 2,5 мл бульйону Хоттингера, вирощують протягом 3-4 ч і засівають газоном на свежеприготовленную і підсушену чашку Петрі з 1,2% -м агаром. Дно засіяної чашки Петрі ділять олівцем на 23 квадрата і в кожен з них стандартної петлею або пастерівською піпеткою наносять краплю відповідного фага. Результати дії фага враховують за ступенем лізису культури стафілокока, позначаючи плюсами - від «±» до Визначення активності фага за методом Аппельмана.
Активність фага визначають в МПБ. Для цього беруть ряд пробірок, що містять по 4,5 мл бульйону. В першу пробірку вносять 0,5 мл випробуваного фага, змішують його з середовищем і інший піпеткою переносять 0,5 мл в наступну пробірку і т. Д. Таким чином фаг послідовно розводять від 10-1 до 10-9 і вище.
У кожне розведення фага вносять по 0,05 мл 18-годинний бульонной культури відповідного виду бактерій. Дві пробірки з МПБ повинні складати контроль: одну засівають культурою бактерій (контроль за наявністю в ній фага), в другу наливають фаг (контроль його стерильності). Облік результатів проводять після 18-24 год перебування пробірок в термостаті. Титр фага визначають найбільшим розведенням, в якому спостерігається повний лізис бактерій.