C12N1 / 20 - бактерії; поживні середовища для них
Власники патенту RU 2324733:
Державна наукова установа Всеросійський науково-дослідний інститут маслоробства і сироваріння (RU)
Організація наукового обслуговування "Експериментальна біофабрика ВНИИМС" (RU)
Винахід відноситься до молочної промисловості, зокрема до виробництва ферментованих молочних продуктів. Штам бактерій Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф (Російська колекція молочнокислих бактерій для виробництва сирів і бактеріофагів до них при ВНИИМС) отримано з самоквасной сметани і відібраний по спектру чутливості до 250 відомим бактеріофагів. Використовується як індикаторний штам для виявлення бактеріофагів лактококков, шляхів і джерел їх поширення на підприємстві. Винахід дозволяє запобігти розвитку бактеріофагів при виробництві молочної продукції, підвищити її якість і безпеку для здоров'я споживача, а також збільшити ефективність виробництва.
Винахід відноситься до молочної промисловості, зокрема до виробництва ферментованих молочних продуктів, і являє собою новий штам бактерій лактококков, який може бути широко використаний для виявлення бактеріофагів на молочних підприємствах.
Однією з умов отримання якісних молочних продуктів є запобігання розвитку бактеріофагів у виробництві. Для цього необхідно використовувати набір індикаторних культур, чутливих до широкого спектру бактеріофагів.
Недоліком даного штаму є те, що він чутливий до відносно невеликій кількості бактеріофагів, виділених раніше на молочних підприємствах.
В даний час спектр бактеріофагів на молочних заводах змінився і розширився. Для їх виявлення потрібні нові штами, чутливі до бактеріофагів зі зміненим спектром літичної дії.
Завдання полягає в запобіганні розвитку бактеріофагів у виробництві молочної продукції шляхом їх виявлення за допомогою індикаторних культур.
Технічний результат - виявлення нового штаму Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф, чутливого до широкого спектру бактеріофагів, що циркулюють на молочних підприємствах.
Штам бактерій Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф отриманий з самоквасной сметани і відібраний по спектру чутливості до 250 бактеріофагів, виділених на молокопереробних підприємствах СНД протягом більше 20 років.
Штам бактерій Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф відрізняється від відомих штамів лактококков набором лізуючого фагів (фаготип), чутливий до 44% бактеріофагів лактококков (110 з 250 вивчених).
Штам бактерій Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф характеризується наступними ознаками.
Морфологічні та культуральні ознаки.
Клітинна популяція представлена грампозитивними коками діаметром 0,8-0,9 мкм, розташованими парами і в коротких ланцюжках (по 3-4 клітини).
На поверхні агару з гідролізованим молоком утворює білуваті каплевидні блискучі поверхневі колонії і лодочкообразние глибинні колонії. На агарі з гідролізованим молоком і цитратом кальцію навколо колоній спостерігаються зони просвітління. При вирощуванні в бульйоні з гідролізованого молока утворює рівномірну густу суспензію. Знежирене молоко згортає при 30 # x000B0; С дозою інокулята 0,1% за 16-18 год, при внесенні 5% інокулята - за 5-7 год. Кількість життєздатних клітин при культивуванні в знежиреному молоці 10 8 -10 9 КУО / дм 3 .
Фізіолого-біохімічні властивості. Факультативний анаероб. Оптимальна температура росту (30 # x000B1; 2) # x000B0; С, рН живильного середовища 6,8-6,9. Не утворює каталазу, газу з глюкози. Ферментує глюкозу, галактозу, лактозу, маніт, декстрин, мальтозу, сахарозу, арабинозу. Чи не ферментує сорбіт, раффинозу, інулін, гліцерин. Утилізує цитрат в присутності вуглеводів з утворенням діоксиду вуглецю, диацетила + ацетоина. Утворює аміак з аргініну. Не зростає в лакмусовим молоці при 45 # x000B0; С і при концентрації кухонної солі 6,5% при 30 # x000B0; С. Володіє типовими властивостями, характерними для Lactococcus lactis subsp. diacetilactis.
Умови зберігання. Штам зберігається в лиофилизированном вигляді при температурі 6-8 # x000B0; С. Середа висушування - знежирене молоко.
Чутливість до бактеріофагів. Штам чутливий до 110 вірулентним бактеріофагів з 250 вивчених, виділених на молокопереробних підприємствах СНД.
Виявлення бактеріофагів лактококков з використанням штаму Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф.
1. Підготовка газонів штаму
У чашки Петрі розливають 15-20 мл 1,5% агару з гідролізованим молоком і підсушують 3-4 ч. Попередньо розлитий в пробірки по 2,5 мл 0,6% агар з гідролізованим молоком розплавляють при температурі 100 # x000B0; С, охолоджують до 45 # x000B0; С, вносять в нього 1 мл 18-годинний бульонной культури Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф, перемішують і виливають на чашки Петрі з щільним ПС.
2. Підготовка випробовуваних проб.
Досліджувані на наявність бактеріофага проби (молоко, закваска, сироватка і т.д.) попередньо звільняють від білка (дією молочної кислоти), фільтрують через ватно-марлевий, потім бактеріальний (діаметр пор 0,2 мкм) фільтри.
3. Виявлення бактеріофагів.
На поверхню двошарового агару з посіяної культурою наносять краплі досліджуваних на бактеріофаг проб, чашки інкубують при 30 # x000B0; С 18-24 ч. Штам Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф утворює на поверхні чашки рівномірний мутний газон. Якщо на місці нанесення крапель утворюються прозорі зони, то в досліджуваній пробі знаходиться бактеріофаг, лізуючий штам Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф.
Таким чином, виявлено новий індикаторний штам Lactococcus lactis subsp. diacetilactis ТК-ОБЛ-Д5-5Ф, чутливий до широкого спектру бактеріофагів лактококков.
Пропонований штам бактерій рекомендований для широкого використання в молочній промисловості з метою виявлення бактеріофагів лактококков, шляхів і джерел їх поширення на підприємстві. Це дозволить запобігти розвитку бактеріофагів при виробництві ферментованих молочних продуктів, підвищити їх якість і безпеку для здоров'я споживача, а також збільшити ефективність виробництва.
Штам бактерій Lactococcus lactis subsp. diacetilactis Російська колекція молочнокислих бактерій для виробництва сирів і бактеріофагів до них при ВНИИМС, рег. № ТК-ОБЛ-Д5-5Ф, який використовується для виявлення бактеріофагів лактококков.