A61B5 - Вимірювання для діагностичних цілей (Радіодіагностика A61B 6/00; діагностика за допомогою ультразвукових, інфразвукових і звукових хвиль A61B 8/00); впізнання особистості
Власники патенту RU 2420229:
Федеральне Державне Освітнє Установа Вищого Професійного Освіти Уральська державна сільськогосподарська академія (УрГСХА) (RU)
Винахід відноситься до ветеринарну медицину, зокрема до ендокринології, і може бути використано для постановки більш точних діагнозів при обстеженні телят. Технічним результатом є розробка безпечного і анатомічно коректного способу відбору проб біоматеріалу для прижиттєвих гістологічних досліджень у телят. Спосіб діагностики патології щитовидної залози і тимуса у телят включає проведення під місцевою анестезією у тварини біопсії часткою щитовидної залози, шийних парних і грудної непарної часткою тимуса. Відбір біоматеріалу проводять шляхом використання голки для ріжучої біопсії різних органів, що вводиться через попередньо введений троакар. Троакар вводять шляхом проколу по сагітальній лінії при використанні інфільтраційної анестезії при фіксації тварини в положенні стоячи з незначним поворотом голови в бік і вгору - дорсо-латерально. 1 з.п. ф-ли, 4 іл.
Винахід відноситься до ветеринарну медицину, зокрема до ендокринології, і може бути використано для постановки більш точних діагнозів при обстеженні телят, особливо в йод-недостатніх і техногенних промислових областях, в яких ведеться тваринництво.
Широкий спектр діагностичних методів дослідження ендокринних органів у людини не знайшов застосування у ветеринарній практиці через специфіку виробництва на фермах і анатомо-фізіологічних особливостей тварин (наявність грубої шкіри і вовняного покриву). Відсутність комплексного діагностичного підходу в питаннях можливої тканинної реакції досліджуваного органа, а також характеру післяопераційних ускладнень стало стримуючим фактором в питанні біопсії для прижиттєвої діагностики ендокринних органів у тварин.
Завданням винаходу в даних умовах є розробка безпечного і анатомічно коректного способу відбору проб біоматеріалу для прижиттєвих гістологічних досліджень, що дозволило б з більшою точністю і спрямованістю проводити діагностику, прогноз і профілактику захворювань ендокринної системи, зокрема, у телят. Спосіб повинен практично здійснюватися в умовах ветеринарного пункту тваринницьких ферм при мінімальному використанні спеціальної апаратури, приладів та медикаментозних препаратів силами штатних фахівців ветеринарної медицини.
Завдання вирішується тим, що у тварини під місцевою анестезією прижиттєво проводять біопсію часткою щитовидної залози, шийних (парних) і грудної (непарної) часткою тимуса, причому відбір біоматеріалу проводять шляхом використання голки для ріжучої біопсії різних органів, що вводиться через попередньо введений троакар, а троакар вводять шляхом проколу по сагітальній лінії при використанні інфільтраційної анестезії при фіксації тварини в положенні стоячи з незначним поворотом голови в бік і вгору (дорсо-латерально), при цьому вико т автоматичну голку діаметром 2 мм для ріжучої біопсії різних органів типу Ібра «Уникон» (Ібра 10), причому місцеву інфільтраційну анестезію проводять 0,5% розчином новокаїну, а биоптат відбирають довжиною 10-15 мм і для гістологічних досліджень фіксують 10% водним розчином формальдегіду.
Спосіб здійснюють наступним чином. Хворого теляти з зовнішніми ознаками захворювання переводять в санітарний блок (ізолятор), де у тварини роблять забір крові для гематологічного та біохімічного дослідження. А для уточнення діагнозу і призначення більш ефективного лікування проводять пункційну біопсію його ендокринних органів для гістологічних досліджень, використовуючи по новому призначенню автоматичну голку для ріжучої біопсії різних органів Ібра-3 «Уникон» з діаметром голки 2 мм, що вводиться через троакар.
На фіг.1 представлена схема точок вкола троакара і напрямок введення голки для взяття у телят біопроб, де:
1. Точка вкола і напрямок введення голки для пункції щитовидної залози;
2. Для парних часткою тимуса;
3. Для грудної частки тимуса.
На фіг.2 представлений знімок взяття біопроб щитовидної залози.
На Фіг.3 представлений знімок взяття біопроб тимуса в умовах ферми.
1. Щитовидна залоза;
А. Забарвлення гематоксиліном і еозином;
Б. Забарвлення за методом Ван-Гізоном;
В. Забарвлення за методом Маллорі;
Г. Забарвлення гематоксиліном і еозином;
Д. Забарвлення за методом Ван-Гізоном.
Для пункції бічний частки щитовидної залози у теляти, провівши анестезію, необхідно зафіксувати гортань. Пропальпировать задній край гортані і перші два кільця трахеї. На рівні першого кільця трахеї, по сагітальній лінії шиї, шляхом проколу ввести направляючу голку (троакар) (фіг.2) по дотичній до трахеї на глибину 2 см до контакту з латеральної поверхнею першого кільця трахеї. Після чого через канал троакара підводимо біопсійні голку до точки відбору проби, висуваємо стилет на необхідну довжину, виробляємо відбір біоматеріалу шляхом спуску автоматичного механізму голки і витяг біоматеріалу для гістологічного дослідження.
Для пункції парних часткою тимуса (Фіг.3) орієнтиром є передня межа задньої третини шиї і її сагітальній площині (при зміщеною в бік трахеї). Передня межа задньої третини шиї знаходиться на відстані 8-12 см (в залежності від віку) від рукоятки грудної кістки. Направляючу голку-троакар вводимо по сагітальній лінії до упору в трахею, зміщуємо трахею латерально (в сторону). Голка проходить по дотичній до трахеї, на глибину 3-4 см. Взаємозалежності професій виїмку стилета в напрямку від трахеї, виробляємо відбір біоматеріалу шляхом спуску автоматичного механізму голки і витяг біоматеріалу для гістологічного дослідження.
Крапку введення направляючої голки-троакара і голки для взяття матеріалу з грудної (непарної) частки тимуса визначаємо по перетинанню сагітальній лінії шиї і переднього краю рукоятки грудної кістки. Направляючу голку вводимо по дотичній до бічної частини трахеї, під кутом 15 ° в каудальному напрямку, на глибину 4-5 см. Взаємозалежності професій виїмку стилета в напрямку від трахеї, виробляємо відбір матеріалу шляхом спуску автоматичного механізму голки.
Попередні дослідження, проведені на трупному матеріалі, показали, що такий доступ до структур щитовидної залози і тимуса є практично безпечним, так як введення троакара і голки для ріжучої біопсії проводимо минаючи великі кровоносні судини, що не викликає кровотечі, при цьому не пошкоджуються нервові стовбури. Ця обставина дає підставу для розробки прижиттєвої гістологічної оцінки стану щитовидної залози і тимуса по відібраному біоматеріалів, без зайвого травмування тварини.
Відпрацювання способу на живих телятах здійснювалася з застосуванням місцевої інфільтраційної анестезії 0,5% розчином новокаїну. Тварин фіксували в положенні стоячи, з незначним поворотом голови в бік і вгору (дорсо-латерально) (фіг.2 і 3).
Отриманий біоптат, який має вигляд стовпчика тканини довжиною від 5 до 15 мм і діаметром 1-2 мм, фіксують 10% -ним водним розчином формальдегіду.
За морфологічними критеріями пунктати тканини щитовидної залози мають більш чіткі структури, ніж фрагменти залози, узяті посмертно. Ділянки пошкоджених фолікулів розташовуються лише по лінії відсікання пунктата, тканинні структури на решті площі не деформовані.
Використання трьох забарвлень під час гістологічного дослідження отриманих зразків дозволяють судити про морфофункціональних особливостях досліджуваних структур і оперативно призначати необхідне лікування. Забарвлення гематоксиліном і еозином є основною, фонової. Забарвлення за методом Ван-Гізоном дає можливість виявити активність сполучнотканинних компонентів щитовидної залози. Забарвлення за методом Маллорі виявляє функціональну активність щитовидної залози і насичення колоїду йодом (фіг.4).
Гістологічне дослідження показало, що при фарбуванні А - гематоксиліном і еозином: щитовидна залоза знаходиться в стані активного фолікулогенезу і має чітко виражену фолікулярної будова. В поле зору мікроскопа LEICA DM1000 при збільшенні: об'єктив × 4, окуляр × 10 потрапляє значна частина досліджуваної нами тканини залози. Фолікули в основному дрібні, заповнені гемогенним колоїдів. Збільшення окуляр × 20, об'єктив × 10. Епітелій дрібних фолікулів має кубічну, рідше циліндричну форму, з базально розташованим ядром. Крім тиреоцитов, в епітелії виявляються клітини Ашкіназі-Гюртля, що виступають в просвіт фолікула і мають більший розмір, центрально розташоване ядро. Фолікулярний епітелій в більшості фолікулів розташовується в 1 ряд. На препараті так само чітко видно великі фолікули, стінка яких представлена тиреоцитах, що розташовуються в 2-3 ряди. У порожнині фолікулів резорбціонний вакуолей НЕ обнаружно. Кровоносні судини запустевшие.
При фарбуванні Б - по Ван-Гизону: міжфолікулярних сполучна тканина набрякла, представлена тонкими колагеновими волокнами.
Особливим діагностичним тестом є забарвлення щитовидної залози за методом Маллорі (В). Вона дозволяє виявити недостатність надходить в організм йоду, особливо в умовах природного йод-дефіциту території - показником чого і є щитовидна залоза. На препараті більшість дрібних фолікулів - слабо активні. У великих фолікулах тільки в пристеночной області виявляється наявність колоїду, що містить йод. Більше 30% фолікулів не містять йоду в колоїді.
На підставі комплексу даних, отриманих під час гістологічного дослідження, можемо говорити про йод-дефіцитному стані, розвиненому в організмі теляти.
Тимус - збільшення × 100 фіг.4 - 2Г.Д. Часточки тимуса розділені широкими сполучнотканинними тяжами. У препараті чітко видна застійна гіперемія як мікроциркулярного русла, так і судин більшого калібру, з випаданням зерен гемосидерину. Колагенові волокна розташовуються рихло. У часточках тимуса межа коркового і мозкового шарів згладжена, а клітинної - різко знижена. Клітини, які інфікують часточки, представлені, в основному, малими та великими лімфоцитами, лімфобластами, плазматичними клітинами, макрофагами. Тельця Гассаля присутні на препараті в незначній кількості, у вигляді як скупчень епітеліоїдних клітин, так і у вигляді одиничних клітин з явищами розпаду. Комплекс патологічних змін, виявлений під час гістологічного дослідження, характерний іммунодіфіцітному станом залози, з ознаками йодної недостатності.
Неочевидні переваги при використанні запропонованого способу полягають у відсутності необхідності складного інструментального контролю положення, ріжучого інструменту (УЗД, рентген тощо), і практично повній відсутності кровотечі при відборі біозразків у телят при здобутті якісної біоматеріалу для досліджень.
Первинні випробування по апробації способу проводили на трупному матеріалі в кількості 5 голів. Відпрацювання розробленого способу здійснювали на телятах у віці 2, 3, 4 місяців - в кількості 10 голів.
Кількість опитаних тварин