1. Штучне запліднення поза організмом - застосовується при розведенні риб, воно полягає в змішуванні зрілих молок та ікри в судинах і витримці їх при відповідній температурі.
2. Штучне запліднення в організмі - застосовується при розведенні худоби та птахів; запліднення може бути інтрагенітальним, якщо сперму вводять в статеві шляхи. або інтраабдомінальні, коли сперму вводять безпосередньо в черевну порожнину, біля яєчників, через прокол черевної верстати.
До інтрагенітальним методам штучного запліднення відносять: 1) вагінальне 2) цервікальне 3) маточне і яйцепроводное.
Вибір методу запліднення залежить від виду тварин і головним чином від типу їх природного запліднення. Наприклад,
тваринам з вагінальним типом осіменіння сперму вводять в піхву або в канал шийки матки; у тварин з маточним типом осіменіння сперму вводять безпосередньо в матку. У птахів вводять в яйцепровід.
При всіх методах штучного осіменіння фахівці зайняті в штучному запліднення повинні строго дотримуватися правила асептики і не допускати введення в статеві шляхи забрудненої сперми. При проведенні штучного запліднення техніки зі штучного осіменіння повинні користуватися прокип'яченому хірургічними гумовими або разовими поліетиленовими рукавичками, руки повинні оброблятися так само, як при підготовці до операції. Руки повинні протягом 3-5 хвилин митися гарячою водою з милом і щіткою, після цього руки повинні насухо обтиратися стерильними або добре проутюженной рушником і 70% -ним або 96% -ним спиртом. Інструменти краще стерилізувати кип'ятінням або фламбирования. Шприци-катетери кожен раз після вживання повинні бути ретельно промиті теплим фізіологічним розчином і спиртом; зберігати їх краще в 70% -ному спирті. Перед вживанням шприци-катетери ретельно промивають в двох банках (по 3-4 рази в кожній) стерильним розчином 2,8-3% -ного лімоннокіслого, 1% -ного бікарбонату або 1% -ного хлористого натрію.
Після запліднення кожної самки поверхню катетера протирають спиртовим тампоном, вагінальні дзеркала миють і кип'ятять або фламбіруйте. Якщо штучне запліднення застосовується в господарствах неблагополучних щодо інфекційних хвороб інструменти для штучного осіменіння необхідно стерилізувати в киплячій воді або необхідно використовувати разові інструменти, які після використання повинні спалюватися. Фахівці в неблагополучному щодо заразних хвороб господарстві повинні виконувати передбачені інструкціями заходи.
Самок для запліднення поміщають в відповідний верстат і фіксують. Хвіст тваринного відводять в сторону, зовнішні статеві органи витирають ватним тампоном, просоченим кип'яченою водою. Вульву зрошують розчином фурациліну 1: 5000 і насухо витирають. При цьому для кожної самки технік по штучному заплідненню повинен мати окремий тампон. Використані тампони збирають в окрему ємність, піддають дезинфекції і знищують.
Запліднення тварин повинно проводиться в чистому, світлому приміщенні. Дані приміщення повинні відповідати «Ветеринарних правилами при відтворенні сільськогосподарських тварин» і діючих на сьогоднішній день інструкцій по штучному заплідненню.
Вагінальний метод запліднення в даний час практикується рідко, з огляду на те, що при даному способі осіменіння значно збільшується витрата насіння, на відміну від цервікального методу. При піхвовому методі сперма тварині вводиться в порожнину піхви шприцом-катетером, полістероловой піпеткою, з'єднаної з капронових шприцом або балончиком. Подібним чином зараз запліднюють кролиць, а також яскравий і телиць, що мають вузьке піхву тому піхву розкрити вагінальним дзеркалом і ввести сперму в канал шийки матки під контролем зору не представляється можливим. При осіменіння, щоб не потрапити в сечовипускальний канал, інструменти необхідно вводити по верхній стінці піхви у телиць на глибину -30-35см, а у ярок -15-18см.
Цервікальний метод запліднення з візуальним контролем полягає у веденні сперми в канал шийки матки з використанням шприца - катетера або іншим інструментом. Даний метод запліднення застосовується при осіменіння корів, овець і кіз.
Після підготовки інструментів для осіменіння тварини, самку фіксують в станку, в піхву вводиться вагінальне дзеркало і при візуальному контролі в канал шийки матки вводиться певна доза сперми - корові на глибину 4-5см, вівці 0,5-1см.
До недоліку даного методу запліднення ставитися те, що дзеркало швидко остигає і при неправильному введенні викликає обмеження слизової оболонки піхви.
Цервікальний метод запліднення з ректальної фіксацією шийки матки. Сьогодні багато техніки зі штучного осіменіння тварин у своїй роботі використовують даний метод. Перевагою цього методу полягає в тому, що завдяки використанню одноразових інструментів, дотримується стерильність і є можливість у корів контролювати стан яєчників (ступінь дозрівання фолікула) і шийки матки. Особливо даний метод доцільно застосовувати в господарствах, де мають місце інфекційні та інвазійні захворювання тварин. Техніка осіменіння тварин даними способом полягає в наступному:
- Сухими, вимитими і обтертих спиртом руками з пакета витягають полістероловой піпетку, на неї надягають пластмасову ампулу або гумовий балончик; зручніше прикріпити до піпетки сполучної муфтою маленький капронову шприц; в шприц насмоктують 1 мл сперми.
Шкіру і краю вульви обтирають вологим тампоном, праву руку вводять піпетку в піхву по його верхній стінці (щоб не потрапити в сечовипускальний канал). Інша рука в поліетиленовій рукавичці, намилена милом, фахівцем вводиться в пряму кишку, захоплюють шийку матки і направляють її на кінець піпетки. Основним при введенні піпетки в шийку матки буде правильна фіксація шийки, яку можна досягти наступними прийомами. Перший прийом - шийку матки захоплюють лівою рукою зверху так, щоб великий палець знаходився праворуч на ній, три наступних - з лівого нижнього боку початковій її частині, мізинцем контролюємо зовнішній отвір шийки матки і кінець піпетки. Другий прийом - шийку матки утримують між вказівним і середнім пальцями, великим пальцем відшукують отвір шийки матки і під його контролем вводять піпетку. Третій прийом фіксації шийки матки доступний тільки досвідченим фахівцям. Після кількох легких тисків на шийку, в результаті яких відбувається натягнення піхви, яке необхідно для просування піпетки, пальцями руки притискають шийку матки на дно кісткового таза. Потім піпетку просувають під долонею руки вперед, і якщо виникає необхідність, то великим пальцем руки направляють її кінець в отвір шийки матки.
Після введення піпетки (будь-яким способом) з метою її подальшого просування шийку матки захоплюють усіма пальцями руки і легкими обертальними рухами обережно натягують її на піпетку. Піпетку вводять в канал шийки матки на 6-8см. Після цього піпетку необхідно відвести на 0,5-1см назад. Сперму виштовхують уздовж всього цервікального каналу. Вивести піпетку з піхви і руку з прямої кишки повільно без ривків. Проводимо масаж клітора.
При використанні цього методу фахівець проводить осіменіння повинен стежити, щоб калові маси не потрапили в предверие і піхву.
Після проведеного запліднення поліетиленові рукавички і полістиролові піпетки спалюють, а скляні піпетки обробляють і зберігають у шафі техніка зі штучного осіменіння.
Мано-цервікальний (вир-шийного) метод запліднення.
При даному способі осіменіння техніки зі штучного осіменіння використовують одноразові стерильні інструменти: поліетиленову ампулу з полістероловой катетером і поліетиленову рукавичку. Техніка осіменіння наступна - технік по штучному заплідненню з термоса дістає ампулу зі спермою, протирає тампоном, змоченим 70% -ним спиртом, струшує для перемішування сперми, ковпачок відрізають стерильними ножицями, в шийку ампули вставляють полістероловой катетер, видавлюють одну краплю на предметне скло, і після оцінки сперми під мікроскопом її вводять в шийку матки. Перед тим як провести запліднення корови їй роблять ретельний туалет зовнішніх статевих органів і кореня хвоста -обтірают вульву і корінь хвоста розчином фурациліну обережно вводять в піхву праву руку, одягнену в поліетиленову рукавичку, яку попередньо змочують фізіологічним розчином, і масажуючи вагінальну частину шийки матки. Не виймаючи кисть руки з піхви, іншою рукою подаємо підготовлену ампулу зі спермою. Технік по штучному заплідненню під контролем руки вводить катетер в шийку матки, піднімає ампулу і поступовим тиском спочатку на денце, потім ближче до шийки сперму з ампули видавлює в канал шийки матки в момент її розслаблення.
Після того як сперму ввели в канал шийки матки, не розтуляючи ампули, інструмент витягують з шийки матки і кладуть її на дно піхви, рукою проводять масаж шиї. Даний прийом сприяє переміщенню сперми з шийки в порожнину матки. Потім фахівець руку з порожньою ампулою і катетером обережно виводить з піхви.
Власники тварин і фахівці повинні мати на увазі, що мано-цервикальним методом можна запліднювати тільки великих корів. Дрібних корів, особливо первісток, а також телиць з вузьким піхвою осеменять даним методом можна. При порушенні фахівцем правил асептики завжди виникає небезпека інфікування статевих органів, особливо в господарствах неблагополучних щодо інфекційних хвороб. Після запліднення тварина необхідно витримувати на прив'язі не менше 20-30 хвилин, щоб запобігти витіканню сперми з каналу шийки матки в піхву, після чого спокійно відвести тварину на своє місце. Запліднення тварин корисний масаж клітора протягом 10 хвилин. Даний прийом сприяє підвищенню заплідненості корів на 5-6%.
У тому випадку якщо під час запліднення тваринного відзначаємо занепокоєння тваринного, виникнення вагинизма, в результаті чого введена в шийку матки сперма виганяється в піхву, то дана тварина необхідно через 10-15 хвилин осіменити повторно.
Матковий метод запліднення. Даний спосіб запліднення застосовується тільки у тварин з маточним типом осіменіння (кобила і свині). При осіменіння кобил техніки зі штучного осіменіння користуються переважно ебонітовим катетером.
Під візуальним контролем катетер за допомогою вагінального дзеркала вводять безпосередньо в порожнину матки на глибину 10-15см. У разі застосування м'якого катетера кінець його захоплюють рукою, вводять в піхву і під контролем пальця направляють через канал шийки в матку. Коли для вибору часу осіменіння поряд з визначенням тічки, загального збудження і полювання визначається овуляція, технік по штучному заплідненню повинен прагнути направити сперму в той ріг матки, на стороні якого в яєчнику дозріває фолікул.
Виходячи з того, що обсяг дози сперми є значним, для її введення технік по штучному заплідненню користується 20 грама шприцом або спеціальними ампулами. Ампульний спосіб застосовується на підсобних пунктах штучного осіменіння. Ампули ємністю 30мл використовуються для перевезення сперми і для запліднення. Перед тим як приступити до осіменіння на вузький кінець ампули, заповнений спермою, надягають гумовий шланг, з'єднаний з балоном. З іншого боку ампули знімають гумовий ковпачок. Ампулу захоплюють рукою, вводять в піхву, вільний її кінець закривають пальцем і направляють в шийку матки. Під час стискання балона сперма повітрям виштовхується в порожнину матки.
У господарствах неблагополучних щодо інфекційних хвороб необхідно користуватися тільки шприцом і твердими катетерами, які легко піддаються стерилізації.
При осіменіння свиней застосовують м'який катетер. Його вводять в піхву на глибину 30-35 см без дзеркала. Однак при цьому частина сперми виливається назовні. Для штучного осіменіння свиней розведеної спермою користуються приладом ПОС-5.
Сперму свиней перед введенням при будь-якому способі осіменіння підігрівають до температури тіла.
Свиноматок запліднюють в спеціальній клітці або безпосередньо у верстатах. Власники СФГ і дрібних свинарських господарств влітку клітку поміщають в розкол, над яким влаштовують навіс. Після того як кожну свиноматку запліднив її необхідно протягом 24- 30часов містити ізольовано, в окремих верстатах. При утриманні запліднених свиноматок в загальному верстаті тварини стрибають один на одного. Все це призводить до зворотного витіканню введеної свиноматці сперми і розчинника, що в кінцевому підсумку призводить до штучно придбаному безпліддя.
Дози сперми. При визначенні дози сперми вирішальне значення має динаміка статевого акту у тварини. При штучному запліднення тваринного сперма вводиться безпосередньо в матку або шийку матки, минаючи піхву, тому необхідно вводити стільки спрямовує, скільки їх туди зазвичай потрапляє при природному осіменіння. Наприклад у овець, при природному осіменіння в шийку матки потрапляє близько 100-150 млн. Сперміїв, тобто приблизно 1 / 20-1 / 30 обсягу еякуляту (М.П. Кузнєцов). Тому і було запропоновано вводити в шийку матки вівці 0,05, а в шийку матки корови 0,5 мл сперми. Відзначено, що великі дози сперми зазвичай не мають переваг, а зменшені знижують оплодотворяемость.
Вівцям при піхвовому осіменіння вводять 0,1 мл нерозбавленою сперми, розведеної - 0,2-0,3 мл; при цервікальному осіменіння відповідно 0,05-0,1 і 0,1-0,15мл.
Коровам при піхвовому осіменіння вводять 1-2 мл нерозбавленою і 2-3мл розведеної сперми; при цервікальному запліднення -0,3-0,5 мл, 1-1,5мл.
Необхідно мати на увазі той факт, що успіх запліднення залежить від якості сперміїв. Чим вище активність їх руху, тим меншу дозу можна використовувати при осіменіння тварини.
У тварин мають матковий тип природного запліднення сперма просувається по просвіту рогів матки до яйцепроводов. Тому малі дози сперми при штучному запліднення не дають позитивних результатів. Кобилам вводять 20-40 мл сперми. При фракційному способі введення дозу сперми для свиней встановлюють залежно від концентрації і активності сперміїв. При цьому для основних свиноматок число рухомих сперміїв в дозі повинно бути 3 млрд. а для ремонтних свиноматок 2 млрд. При позафракційних способі осіменіння використовують розбавлену сперму. За методом ВИЖ її вводять з розрахунку 1 мл на 1 кг маси тіла, проте загальна кількість сперми не повинно перевищувати 150мл. У дозі сперми повинно міститися не менше 4-5млрд активних сперміїв.
Птахів запліднюють раз в 5-7 днів за допомогою піпеток або пристосованих шприців. Інструмент вводять в яйцепровід на глибину 4-5см. Сперму застосовують з активністю не нижче 7баллов, курям і індичка по 0,025- 0,03 мл (близько 100млн. Живих сперміїв), гуска 0,05 0,2 мл (30-50млн рухливих сперміїв). Запліднення проводять в другій половині дня, коли закінчується яйцекладка.