ВДОСКОНАЛЕННЯ СХЕМИ бактеріологічних ІДЕНТИФІКАЦІЇ AEROMONAS SALMONICIDA
Н. Г. Кукліна, І. Г. Горшков, Д. А. Вікторов, Д. А. Васильєв
(Ульяновська державна сільськогосподарська академія імені П. А. Столипіна)
Aeromonas salmonicida є нерухомою грамнегативною паличкою з заокругленим кінцем. Вона викликає захворювання аеромоноз у промислових і акваріумних риб, яке характеризуються випаданням луски і плавників, появою фурункулів.
Мета досліджень - розробити вдосконалену схему бактеріологічної ідентифікації бактерії Aeromonas salmonicida.
На наявність бактерій A. salmonicida нами були досліджені зразки води з водойм Ульяновської області - с. Дубравка, с. Михайлівка, кар'єри селища УКСМ.
За основу для поживних середовищ були розглянуті середовища А-1 і А-2, які викладені в методичних рекомендаціях «Методи досліджень об'єктів навколишнього середовища і патологічного матеріалу на аеромонади», розроблених в Московському науково-дослідному інституті гігієни ім. Ф. Ф. Ерісмана в 1980 р
Початковим етапом дослідження був посів 1 мл досліджуваного субстрату на 5 мл синтетичної середовища наступного складу.
Середа АН1-УГСХА (середа накопичення):
1) вода дистильована 100 мл;
2) сульфат магнію 0,02 г;
3) фосфат калію 2замещенний 0,1 г;
4) хлористий натрій 0,5 г;
6) бромтимоловий синій 0,003 г;
7) стерилізація при 0,5 атм 15 хв .;
8) після стерилізації асептично додавали ампіцилін в кількості 0,03 мл.
Глюкоза в даному середовищі служить єдиним джерелом вуглецю і доступна в якості поживного субстрату для бактерій A. salmonicida. Фосфат калію двозаміщений, сульфат магнію та хлорид кальцію необхідні для забезпечення біохімічних процесів в клітинах A. salmonicida. Ампіціл-лін служить в якості селективної добавки.
Після 24-48 год культівіровнія при оптимальній для A. salmonicida температурі (20-22 ° C) спостерігалися помутніння прозорого бульйону, освіта поверхневої плівки, осаду, у випадках зростання бактерій забарвлення середовища змінювалася з блакитного в жовто-зелений колір.
З накопичувальної середовища АН1-УГСХА виробляли посів за методом Дрігальского на чашки Петрі з середовищем наступного складу.
Середа АН2-УГСХА (селективна середа):
1) вода дистильована 100 мл;
2) агар-агар 1,5 г;
4) дріжджовий екстракт 0,3 г;
5) сульфат магнію 0,02 г;
6) калій двозаміщений 0,1 г;
8) стерилізація при 0,5 атм 15 хв.,
9) хлорид барію 0, 5 г; після стерилізації асептично додавали:
10) тріфенілтетразолхлорід 2 мл 10%;
11) ампіцилін 0,03 мл.
Пептон є джерелом амінокислот, калій фосфорнокислий двозаміщений і магній сірчанокислий забезпечують електролітний склад середовища, необхідний для біохімічних процесів. Хлорид барію і ампіцилін були обрані в якості інгібітора сторонньої мікрофлори. Після культивування на даному середовищі протягом 24 год при 20-22 ° C на її поверхні були виявлені однорідні колонії округлої форми і червоного кольору.
Подальша схема типування передбачає дослідження біохімічних властивостей за допомогою ряду тестів.
Результати, характерні для виділених нами штамів A. salmonicida, представлені в табл.
Результати біохімічних тестів
Результати досліджень і висновки. Розроблена нами схема виділення бактерії A. salmonicida, заснована на сконструйованих поживних середовищах і системі бактеріологічних тестів, дозволяє проводити виділення і ідентифікацію A. salmonicida протягом 48-72 ч. З використанням перед- лага схеми з водних джерел нами було виділено понад 30 штамів зазначеного виду бактерій.