Визначення життєздатності клітин проводиться методом суправітально забарвлення 0,1% розчином трипанової сині.
Hа предметне скло наносять краплю суспензії клітин і 1 краплю 0,1% розчину трипанової сині. Через 30-60 с забарвлену краплю суспензії покривають покривним склом. Надлишок суспензії видаляють промаківанія фільтрувальної папером і під мікроскопом підраховують число живих (незабарвлених) і загиблих (синіх) клітин на 100 каріоцітов. Виводять відсоток загибелі клітин.
Розчин трипанової сині готують заздалегідь. Порошок розчиняють в бидистиллированной воді з розрахунку отримання 0,2% розчину, який фільтрують. Це матковий розчин.
1. Дайте визначення інбредних тварин.
2. Опишіть принцип отримання конгенних ліній мишей.
3. Які біологічні матеріали використовуються для дослідження імунної системи?
4. Перерахуйте основні етапи отримання клітин кісткового мозку у мишей.
5. Перерахуйте основні етапи виділення клітин з периферичних органів мишей.
6. Як підрахувати кількість клітин в 1 мл клітинної суспензії і визначити життєздатність клітин?
Глава 2 Методи поділу клітин периферичної крові людини
Для дослідження функціональної активності лімфоцитів та інших клітин крові необхідні ефективні способи їх поділу (рис. 2.1). Ідеальні методи поділу характеризуються незначним ступенем втрат клітин при високому ступені очищення, збереженням фізіологічної активності виділених клітин. У корені методів виділення клітин лежать два головних принципи.
1. Поділ клітин за їхніми фізичними властивостями, наприклад за розмірами, щільності або заряду.
2. Поділ клітин по поверхневих антигенів.
Мал. 2.1. Основні методи поділу клітин
Серед різноманітних способів поділу клітин крові найбільшого поширення набули гравітаційні, засновані на різної питомої щільності клітин крові, які розрізняються між собою наступним образом˸ еритроцити> нейтрофіли і еозинофіли> лімфоцити і моноцити> тромбоцити.