Заливка тканин для дослідження. блоки препаратів
Для полегшення різання тканини зазвичай заливають в тверду середу. Щоб за допомогою мікротома отримати тонкі зрізи, тканини після фіксації повинні бути просочені заливальним речовинами, які надають їм тверду консистенцію. Як заливальних матеріалів використовують парафін і пластичні смоли. Парафін зазвичай застосовують для світлової мікроскопії, смоли - як для світловий, так і для електронної мікроскопії.
Процесу заливки в парафін. або просочування тканини, зазвичай передують два основних етапи: зневоднення (дегідратація) і просвітлення. Перед заливанням зі шматочків видаляють воду, спочатку поміщаючи їх послідовно в ступінчасту серію суміші етилового спирту (етанолу) і води (зазвичай з 70% до 100% етилового спирту).
Етанол потім заміщають розчинником. який здатний змішуватися з заливальної середовищем. При заливці в парафін в якості такого розчинника зазвичай використовують ксилол. У міру того, як тканини просочуються розчинником, вони зазвичай стають прозорими (просвітлення). Після просочування шматочка тканини розчинником його поміщають в термостат в розплавлений парафін, як правило, при температурі 58-60 ° С.
Під впливом тепла розчинник випаровується, а простору в тканинах заміщуються парафіном. Після вилучення з термостата тканину разом з просочують її парафіном твердне. Тканини, які заливають в пластичну смолу, також зневоднюють в етанолі і, в залежності від типу смоли, далі просочують розчинниками пластмас. Етанол або розчинники згодом заміщаються розчинами пластиків, які тверднуть за допомогою полімеризаторів, що утворюють перехресні зв'язку.
Заливка в пластичну масу запобігає стисненню, яке викликають високі температури, необхідні для заливки в парафін, і дає значно кращі результати.
Тверді блоки. містять тканини. збожеволіють в мікротом; в результаті різання сталевого або скляній мікротомних бритвою (ножем) отримують зрізи товщиною 1 - 10 мкм. Слід пам'ятати, що 1 мікрометр (1 мкм) = 0,001 мм = 10-6 м; 1 нанометр (1 нм) = 0,001 мкм = 10-6 мм = 10-9 м. Далі зрізи поміщають в воду і переносять на предметне скло для фарбування.
Можна використовувати зовсім інший спосіб підготовки гістологічних зрізів шляхом швидкого заморожування тканин. В цьому випадку тканини фіксують заморожуванням (фізично, а не хімічно), причому одночасно вони стають твердими і тому можуть піддаватися різанні. Заморожують мікротом - кріостат (грец. Kryos - холод + statos - установка) - розроблений для різання заморожених тканин.
Оскільки цей метод дозволяє швидко приготувати пофарбовані зрізи (протягом декількох хвилин), його зазвичай використовують в лікарнях для дослідження зразків тканин під час хірургічних операцій. Заморожування тканин також дає хороший ефект при проведенні гістохімічних досліджень дуже чутливих ферментів або дрібних молекул, так як заморожування не інактивує більшість ферментів.
Через те, що обробка тканин такими розчинниками, як ксилол, розчиняє тканинні ліпіди, використання заморожених зрізів рекомендується при необхідності вивчення цих сполук.