Визначення вмісту гемоглобіну в крові проводиться колориметричною способами, один з яких (гематіновий метод Салі) заснований на утворенні стійкого розчину коричневого кольору при взаємодії гемоглобіну з соляною кислотою. Принцип колориметрического способу полягає в тому, що якщо досліджуваний розчин шляхом розведення довести до забарвлення, однаковою зі стандартним розчином, то концентрація розчинених речовин в обох розчинах буде однакова, а кількості речовин будуть співвідноситься як їх обсяги. У стандартному розчині гемоглобіну міститься 167 г / л.
Д л я р о б о т и н е о б х о д і м и: гемометр Салі, капіляр з міткою 0,02 мл, 0,1 н розчин соляної кислоти, дистильована вода, свіжа кров, піпетка, скляна паличка, стерильна ін'єкційна голка, вата, спирт, йод, ефір, стерильний скарифікатор. Об'єкт дослідження - людина.
Хід роботи
У середню пробірку гемометра налити 0,1 н розчин соляної кислоти до нижньої кільцевої мітки. З пальця звичайним способом набрати в капіляр кров без бульбашок до мітки. Надлишок крові можна видалити з капіляра прикладанням вати або фільтрувального паперу до кінчика капіляра. Видути кров на дно пробірки з капіляра так, щоб верхній шар кислоти залишився незабарвленим. Не виймаючи капіляр, промити його розчином соляної кислоти з верхнього шару пробірки гемометра. Після цього вміст пробірки перемішати скляною паличкою і поставити в гемометр на 5-10 хв. Цей час необхідний для повного перетворення гемоглобіну в солянокислий гематин
Переклад отриманих даних в одиниці системи СІ (в г / л) виробляють шляхом множення виміряного кількості гемоглобіну в г% на 10. Замалювати гемометр і капіляр.
4) Підрахунок кількості еритроцитів
Ц е л ь р о б о т и: освоїти методику і визначити кількість еритроцитів в досліджуваній крові.
Д л я р о б о т и н е о б х о д і м и: мікроскоп, лічильна камера Горяєва, меланжер для еритроцитів, 3% розчин хлориду натрію, покривні скла, регульована піпетка, пробірки, стерильний скарифікатор, вата, спирт , ефір, йод. Об'єкт дослідження - людина.
Хід роботи
Необхідно перед початком роботи розглянути лічильну камеру під мікроскопом, знайти малі квадратики і великі квадрати сітки (рис.1). Камеру попередньо необхідно підготувати шляхом притирання покривного скельця до бічних виступаючим гранях камери до появи кольорових (ньютоновских) кілець. У краплю свіжої крові, отриманої з пальця, занурити кінчик меланжера (з червоною бусинкою в розширенні) для еритроцитів і набрати кров до позначки 0,5, стежачи, щоб в капіляр НЕ
потрапили бульбашки повітря. Швидко, поки кров не згорнулася, перенести кінчик меланжера в 3% розчин хлориду натрію і набрати його до мітки 101, тобто розвести кров у 200 разів. Після цього взяти заповнений меланжер (змішувач), затиснути його кінці 1 і 3 пальцями і протягом 1 хв встряхі-
вать. Після ретельного перемішування крові, видаливши попередньо 1-2 краплі, нанести невелику крапельку на сітку камери.
При необхідності таке ж розведення може бути виконано в інший спосіб. Наприклад, 0,02 мл крові змішати з 4 мл 3% NaCl в пробірці. Вміст пробірки в цьому випадку ретельно перемішується.
Якщо крапля розведеної крові буде занадто велика, то рідина може потрапити на бічні грані камери і висота шару над сіткою буде більше 0,1 мм. В цьому випадку камеру слід промити дистильованою водою, насухо витерти і заповнити знову. Розведену (в меланжери) кров слід ще раз перемішати.
Заповнивши камеру, помістити її під мікроскоп і, якщо формені елементи розташовані рівномірно (що є показником хорошого перемішування крові), приступити до підрахунку. Вважати еритроцити зручніше при великому збільшенні.
Необхідно підрахувати число еритроцитів в 5 великих квадратах, розташованих в різних місцях сітки, наприклад, по діагоналі. Щоб уникнути дворазового підрахунку клітин, що лежать на кордоні між малими квадратиками, керуватися правилом Єгорова, згідно з яким, що відносяться до даного квадратику вважаються еритроцити, що лежать як всередині квадратика, так і на його лівій і верхній межі. Еритроцити, що лежать на правій і нижній межі для даного квадратика не враховуються.
Формула для обчислення кількості еритроцитів в 1 мм 3 крові:
N - шукане число еритроцитів;
А - число еритроцитів в 80 маленьких квадратиках (або в 5 великих);
4000 - множник для отримання вмісту еритроцитів в одному мм 3 крові;
200 - ступінь розведення еритроцитів.
Для перекладу отриманої кількості еритроцитів в одиниці СІ, підрахована кількість еритроцитів помножити на 10 6 і висловити в N x 10 12 / л (тера на літр). Замалювати фрагмент сітки камери Горяєва з маленькими і великими квадратами.
У висновку порівняти кількість підрахованих еритроцитів з нормою.