Епідемічна обстановка в світі ніколи не була спокійною. Весь час спостерігалися спалахи інфекційних захворювань і з'являлися нові види заразних хвороб, а в останні 10 років відбувається повернення «старих» інфекцій. Генетична мінливість циркулюючих штамів, внутрішньолікарняні інфекції, бактеріоносійство, труднощі в забезпеченні і застосуванні імунобіологічних препаратів вимагають посилення роботи в області імунопрофілактики та імунотерапії. Недостатня увага до цих проблем неминуче призводить до підйому інфекційної захворюваності. Профілактика і лікування, засновані на імунологічних принципах, стали вирішальним засобом зниження дитячої смертності, збільшення тривалості та поліпшення якості життя всіх вікових груп населення.
Добре відомо, що профілактика є найефективнішим і найекономічнішим способом збереження здоров'я людей.
Люди навчилися боротися з інфекціями, однак їх імунна система стала слабшою реагувати на патогени і не завжди справляється з інфекційними захворюваннями [2].
Діагностичні препарати відносяться до імунобіологічних препаратів, оскільки їх дія заснована на імунологічних принципах і реакціях. Діагностичні препарати, системи та набори широко використовують для діагностики інфекційних і неінфекційних хвороб, індикації та ідентифікації бактерій, вірусів, грибів і найпростіших, для визначення імунного статусу, алергічних і імунопатологічних розладів, імунологічної сумісності тканин, імунних взаємовідносин матері і плоду і т.д.
Діагностикуми застосовують для виявлення специфічних антигенів та антитіл, алергенів, сенсибілізованих імунокомпетентних клітин, факторів природної резистентності, іммунорегуляторов. Відповідно до цільового призначення діагностичних препаратів вони містять ті чи інші специфічні іммунореагенти (антигени, антитіла, алергени, імуномодулятори, фактори природного імунітету та ін.), Які використовують для виявлення об'єкта дослідження в певних реакціях або тест-системах. Ефект реакції відповідно до характером іммунореагентов і механізму реакції реєструють по фізичним (наприклад, каламутність), хімічним (наприклад, зміна кольоровості) або клінічним (симптоми і прояви) показниками [1].
На основі перерахованих імунологічних реакцій створені сотні сучасних діагностичних систем, за допомогою яких діагностують інфекційні (ВІЛ-інфекції, грип, черевний тиф, чума, холера, хламідіоз, вірусні гепатити та ін.) І неінфекційні (онкологічні, алергічні, іммунопатологичеськіє і ін.) хвороби. Імунологічні методи діагностики специфічні, високочутливі і достовірні, тому знаходять широке застосування в медицині та екології [6].
Метою моєї роботи є вивчення антигенних діагностикумів.
Для досягнення даної мети необхідно вирішити такі завдання: провести огляд відповідної літератури, ознайомитися з поняттями антигенної діагностики, визначити ступінь значущості в сучасній медицині.
Глава 1 Загальні відомості про діагностикумів
Діагностикуми - це суспензії убитих мікробів, найчастіше в фізіологічному розчині, що застосовуються в якості антигенів для серологічних реакцій. Перевага діагностикумів перед живою культурою полягає в стабільності їх агглютінабільних властивостей, стандартності, безпеки і простоті поводження з ними. Використання діагностикумів дає можливість широко застосовувати серологічні методи в практиці масової роботи. Особливе значення мають діагностикуми у випадках, коли робота з живими бактеріями або вірусами небезпечна через їхню високу інфекційності (наприклад, з бруцеллами, туляремійний бактеріями, вірусами кліщового і японського енцефаліту і ін.). Діагностикуми, що використовуються для розпізнавання інфекційних захворювань, діляться на бактерійні, риккетсіозних та вірусні. З їх допомогою в сироватці хворих можна визначити наявність антитіл по відношенню до певного виду мікроба-збудника [1].
Більш тонкі відмінності антитіл в досліджуваній сироватці встановлюють за допомогою специфічних монодіагностікумов. Так, при черевному тифі для визначення групових О-антитіл і видових Н-антитіл застосовуються відповідні Про- і Н-діагностикуми з культури черевнотифозних бактерій 0-901 або бактерій паратифів № 2, що мають спільний О-антигеном з черевнотифозними бактеріями; Н-діагностикум є суспензія бактерій, що володіють вираженою рухливістю [3].
Діагностичні препарати застосовуються для наступних цілей:
- для визначення за допомогою специфічних імунних сироваток виду або типу мікроба виділеного від хворого, носія або з об'єктів зовнішнього середовища;
- для виявлення за допомогою діагностикумів антитіл в сироватці хворих або реконвалесцентів;
- для виявлення за допомогою алергенів перебудови організму, що виникає при деяких інфекційних захворюваннях.
Всі діагностичні препарати є антигени або антитіла [4].
Глава 2 діагностикумів ДЛЯ РОЗПІЗНАВАННЯ інфекційних захворювань
2.1 Бактерійні діагностикуми
Для приготування бактерійних діагностикумів береться агарові добова культура певного виду мікроба, що перебуває в S-формі. Культури повинні агглютинироваться відповідними еталонними сироватками в розведенні до титру, що визначається реакцією аглютинації на три хрести, а також бути типовими за морфологічними і біохімічними властивостями. Аглютинація з гетерологічними сироватками в розведенні вище 1/8 титру не повинна мати місця [1].
Виробництво діагностикумів, як і всіх біологічних препаратів, вимагає стерильних умов. Перевірені 18-20 годинні агарові культури або 4 годинні бульйонні засівають на матраци з агаром, приготованим на м'ясному, дріжджовому або казеїновому гидролизате. Через 18-20 годин інкубації в термостаті при 37 ° С з культур роблять мазки (з кожного матраца окремо) для перевірки чистоти. Потім культуру змивають фізіологічним розчином і отриману суспензію різних штамів одного виду бактерій зливають в одну градуированную бутель. При масовому виробництві застосовується котельної метод вирощування бактерій. Діагностикуми готують з різних кількостей штамів відповідних мікробів [5].
Густоту маткової суспензії визначають по оптичному стандарту. Допускається отримання маткової суспензії, що містить в 1 мл 10 млрд. Мікробних тіл. Далі маткова суспензія інактивується. Інактивацію можна проводити різними способами: прогреванием, дією формаліну, алкоголю та ін. Так, для визначення фагоцитарної активності лейкоцитів діагностикуми готують з мікробів, убитих нагріванням, так як фенол або формалін обумовлюють негативний хемотаксис лейкоцитів.
При виготовленні формалінізірованних діагностикумів до 10-мільярдної суспензії додають різні кількості формаліну в залежності від виду диагностикума. Після додавання формаліну бутель закривають гумовою пробкою, ретельно струшують і поміщають в термостат при 37 ° С на 18-20 годин або залишають на 2 доби при кімнатній температурі. Після закінчення цього терміну проводять посів для визначення стерильності, після чого перевіряють агглютінабільность маткової суспензії з гомологічними сироватками. Маткову суспензія розводять формалізованим 0,1% фізіологічним розчином до густоти в 3 млрд. По оптичному стандарту. Після розведення диагностикума знову виробляють контроль на стерильність [6].
Для виготовлення спиртового диагностикума добова культура О-штаму змивається з матраців фізіологічним розчином, що містить 0,5% карболової кислоти. Маткова суспензія розлучається до густоти 4-х млрд. В 1 мл. Для розведення застосовується суміш карболізірованного фізіологічного розчину з 96% етиловим спиртом, узятим в співвідношенні 1: 2. Спирт попередньо фільтрується через бактеріальний фільтр. Вміст бутлів ретельно перемішується. Діагностикум поміщається на 48 годин в термостат при 37 ° С і потім залишається на три доби при кімнатній температурі. Спиртові діагностикуми також контролюються на стерильність [4].
Готовий диагностикум перевіряють на агглютінабільность гомологичной агглютинируют сироваткою і для виявлення групових агглютінінов - гетерологічними сироватками. Крім того, діагностикумів відчувають в реакції аглютинації з сироватками здорових людей (5 сироваток). Реакцію аглютинації з діагностикумами ставлять за класичною методикою [1].
Готові діагностикуми розливають в ампули по 5 або 10 мл; вони, як правило, містять 3 млрд. мікробних тіл в 1 мл за винятком туляремийного, що містить 50 млрд. бактерій в 1 мл, і бруцельозного диагностикума, що містить 20 млрд. мікробних тіл в 1 мл. Після контролю виробляють етикетування препарату. Діагностикуми придатні протягом року з моменту розведення маткової суспензії.
Формалінізірованних Н-діагностикуми дають крупнохлопчатую Н-аглютинацію, при якій пластівці легко розбиваються, в зв'язку з чим при читанні реакції слід уникати сильного струшування пробірок. О-діагностикуми дають дрібнозернисту аглютинацію, не розбивати при струшуванні [3].
Використовується також Vi- диагностикум, що дозволяє виявити Vi-антитіла в сироватках хворих на черевний тиф і бактеріоносіїв. Він являє собою суспензію черевнотифозних паличок, знешкоджених формаліном (0,4%). Для отримання препарату рекомендуються штами в V-формі, типові за всіма ознаками і не мають жгутикового апарату. Діагностикум містить 3 млрд. Мікробних тіл в 1 мл суспензії. Специфічна активність його перевіряється в реакції аглютинації з еталонною монорецепторними Vi-сироваткою. Термін придатності 1 рік. У ряді випадків для цілей серологічної діагностики застосовують не корпускулярні діагностикуми, а виділені з мікробних тіл антигени.
Мікробна клітина являє собою складний глюцідо- липоидно-поліпептидний комплекс, в який входять як повноцінні антигени, так і гаптени. Виготовлення повних антигенів проводиться за способом Буавена і Мезробеану. Для цієї мети беруть добре вивчену чисту культуру певного виду мікробів і проводять посів на поживні середовища. Через добу інкубації при 37 ° С змив культури двічі промивають (при центрифугуванні), фізіологічним розчином, потім екстрагують при низькій температурі десятикратним кількістю ¼ N розчину трихлороцтової кислоти. Екстракт нейтралізують вуглекислої содою до рН 7,0 і діалізу протягом 2 діб в текучої водопровідній воді і протягом 1 доби - в дистильованої воді. Діалізували екстракт осаджують чотирма обсягами ацетону, розчиняють в дистильованої воді і вдруге беруть в облогу ацетоном. Отриманий осад повного антигену промивають спиртом і ефіром, висушують і зберігають у вигляді сухого порошку [2].
Антигени з мікробних клітин витягують і іншими способами: багаторазовим заморожуванням з подальшим розморожуванням, кип'ятінням, дією ультразвуку, спирту, соляної кислоти і ін.
Бактерійні антигени застосовуються в реакціях преципітації, пасивної гемаглютинації з діагностичними цілями і для вивчення антигенного апарату мікробів і їх типізації [4].
В даний час розроблені методи приготування еритроцитарних діагностикумів із тривалим терміном придатності. Початком їх є витягнуті з тих чи інших мікроорганізмів антигени, якими сенсибілізовані еритроцити.
Принцип приготування еритроцитарних діагностикумів зводиться до наступного: дефібринованої кров людини О (1) групи або барана фільтрується через марлю і тричі відмивається на центрифузі охолодженим фізіологічним розчином. Після цього проводиться обробка еритроцитів формаліном. Готують суспензію, яка містить 12,5% еритроцитів, в неї поміщають целофановий мішок з формаліном і струшують на шюттель-апараті протягом 16 годин. У перші 2 години формалін надходить через пори поліетилену, потім його проколюють і, нарешті, розривають. Цей прийом дозволяє отримати повільне спочатку і поступово посилюється дія формаліну на еритроцити. Після закінчення терміну струшування еритроцити знову фільтрують через марлю, відмивають 6 разів десятикратним об'ємом охолодженого до 4-5 ° С фізіологічного розчину на центрифузі при 2500-3000 об / хв, з'єднують з рівним об'ємом стерильного нейтрального фізіологічного розчину і розливають у флакони. У такому вигляді формалінізірованних еритроцити можна зберігати до року. Надалі, в залежності від характеру антигену, ці еритроцити або обробляють додатково таннином, або з'єднують з антигеном без цієї обробки [1].