Всі отримані у хворих отомікозом штами грибів визначаються до виду. Для визначення виду цвілевих грибів виробляли пересівання культур грибів на середу Чапека наступного складу:
Вода - 1000 мл
NaNO - 3 г
КH2Р04 (або К2НРО4) - 1 г
MgS04 - 0,5 г
KCI - 0,5 г
FeS04 - 0,01 г
Сахароза - 30 г
Кожен штам гриба висівають в окрему чашку Петрі із середовищем Чапека і містять в термостаті при температурі 28-30 С. Перше вивчення посівів проводять через 3-4 дні, а на 8-10-й день остаточно визначають отримані культури.
Спочатку вивчають характер росту грибів: розміри колоній, їх форма, колір як з верхньої, так і з нижньої сторони чашок Петрі, забарвлення субстрату, ширина і будова зростаючого краю (занурений, павутинний, щільний). Всі ці спостереження проводять неозброєним оком або через місяць, не відкриваючи чашок Петрі. Таким чином, на підставі результатів послідовного ряду спостережень складають характеристику макроскопічного будови колонії (рис 15, 16).
Мал. 15. Зростання культури Penicillium notatum при посіві на середу Чапека.
Мал. 16. Зростання культури Aspergillus fumigatus при посіві на середу Чапека.
Через 8-10 днів, в період рясного спорообразованія, проводять їх мікроскопічне вивчення з метою остаточного визначення виду даного штаму гриба. Таке визначення засноване майже виключно на морфологічних ознаках і кольорі колоній на відміну від видового визначення бактерій, які характеризуються і за ступенем їх біохімічної активності.
Мікроскопічне дослідження проводять як при середніх збільшеннях (Х200-300), так і при більш сильних (Х400). При середніх збільшеннях вивчають загальну будову пензликів або конідіальной головок, розташування самих суперечка, конидиеносцев, будова міцелію, освіту склероциев. При більш сильному збільшенні визначають окремі деталі конидиеносцев, їх колір, розгалуження, розміри і форму конідій, а також інші більш дрібні деталі гриба. Таку ідентифікацію проводять для визначення видів збудників отомікозов з родів Aspergillus, Penicillium, Mucor (рис. 17).
Мал. 17. Мікроскопічна картина культури гриба роду Aspergillus на 10-й день росту на середовищі Чапека Видно конідіального головка і що обсипалися конідін х900.
Культуральная діагностика мікозів, обумовлених дріжджоподібними грибами роду Candida, представляє відомі труднощі, тому що культури дріжджоподібних грибів виростають часто в асоціації з різною бактеріальною флорою, а для ідентифікації цих грибів необхідно отримання чистих культур. У той же час для визначення виду необхідно не тільки морфологічний, але і біохімічне вивчення отриманих культур.
У зв'язку з цим первинні культури дріжджоподібних грибів, отримані на середовищі Сабуро, піддають механічному очищенню від сторонньої флори шляхом багаторазового розведення суспензії гриба в стерильній воді і посівом однієї петлі останнього розведення у вигляді штриха на середу Сабуро в чашку Петрі. Виросли потім колонії перевіряють на чистоту (в пофарбованому препараті) і в разі необхідності піддають повторної очистки тим же методом. Існує і хімічний спосіб очищення: культуру гриба заливають па 1 год 10% розчином сірчаної кислоти.