Діагноз на трихомоноз ставлять на підставі епізоотологічних даних, клінічного обстеження тварин і результатів лабораторного дослідження відібраного від хворих тварин матеріалу.
Для дослідження в лабораторію ветеринарної медицини направляють абортований плід (до 4-місячної тільності) разом з плодовими оболонками або частина плаценти, паренхіматозні органи плода, патологічні виділення зі статевих органів. Направляють також зіскрібки слизової препуция, секрет придаткових статевих залоз, сперму биків, патологічні виділення зі статевих органів.
Згідно «Методичних вказівок з лабораторної діагностики трихомонозу великої рогатої худоби» (схваленим Головним управлінням ветеринарії Держагропрому СРСР 29.12.1985 р) взяття та пересилання матеріалу здійснюються в такий спосіб.
Перед взяттям діагностичного матеріалу у тварини статеві органи миють теплою водою з милом і витирають рушником.
Слиз беруть полістироловий пипетками. Для цього до 1 0-граммовому шприцу за допомогою гумової муфти приєднують полістироловий піпетку, набирають 5 мл фізіологічного розчину і вводять його під тиском через розкрите дзеркалом піхву в шийку матки на глибину 3-4 см. Потім, не витягуючи піпетки, шприцом насмоктують фізіологічний розчин разом зі слизом, переносять в пробірку, яку закривають гумовою пробкою.
Вагінальну слиз можна брати ложкою-катетером, яку вводять в піхву тваринного без дзеркала. При цьому положення ложки повинно бути боковим, а її стрижня - горизонтальним. Ложкою роблять зіскрібок слизової оболонки піхви і через канал стрижня переливають в пробірку. Якщо зішкріб густої консистенції, через канал стрижня ложки шприцом вводять 5 мл фізіологічного розчину, виливають в пробірку і закривають пробкою.
Сперму від биків отримують на штучну вагіну, переливають в поліетиленові пакетики, як роблять на станції штучного осіменіння.
Секрет придаткових статевих залоз отримують шляхом масажу їх через пряму кишку.
Зіскрібки зі слизової оболонки препуция беруть за допомогою приладів Казеева, Корчака або Жабоєдова. Змонтований прилад вводять в порожнину препуция до її середини. Потім висунутим стрижнем роблять 3-4 зворотно-поступальних руху від зводу препуціальной порожнини до трубки приладу. Після цього стрижень обережно витягують, опускають в пробірку з 3 мл фізіологічного розчину, промивають, витягують. Пробірку закривають гумовою пробкою.
Матеріал для дослідження беруть не раніше ніж через 6 днів після профілактичних зрошенні і через 10 днів після лікування тріхомонадоціднимі препаратами.
Абортований плід, плаценту доставляють в лабораторію не пізніше 12 годин після аборту. У холодну пору року плоди рекомендується заморожувати.
Проби секрету придаткових статевих залоз, препуціальной і вагінальної слизу, патологічні виділення в пробірках, нерозбавлену сперму в поліетиленових пакетиках доставляють в лабораторію в термосі з льодом не пізніше 6 годин після взяття. Висіву з патологічного матеріалу рекомендується робити на місці і відправляти в лабораторію засіяні поживні середовища.
Нативний матеріал (зіскрібки, секрет, сперма) досліджують в роздавленою краплі.
Зіскрібки слизу густої консистенції розбавляють фізіологічним розчином при температурі 37 ° С в співвідношенні 1. 2-1. 5, сперму - 1:10.
При дослідженні сперми сперматозоїди обездвиживают, змішуючи краплю її з краплею оцтової кислоти, розведеної в співвідношенні 1. 500-1. 800.
Рідкий матеріал беруть з дна пробірки, наносять на предметне скло, накривають покривним і досліджують в роздавленою краплі під малим, а потім під середнім збільшенням мікроскопа в затемненому полі зору.
При мікроскопії треба враховувати, що живі трихомонади мають ундулірующую мембрану і аксостиль, руху стрибкоподібно-поступально-обертальні.
Для отримання культури збудника трихомоноза використовують середу Петровського або пептонно-агарове.
Перед посівом в кожну пробірку з середовищем (Петровського, пептонно-агарної) додають стерильну сироватку крові коня або великої рогатої худоби (без ознак гемолізу) - 1 мл, пеніцилін і стрептоміцин по 1000 ОД / мл, а в пептонно-агарове середовище-додатково і ністатин по 250 ОД / мл середовища. Потім ці пробірки поміщають в термостат при 37 ° С на 1-1,5 ч.
Кожну пробу від тваринного висівають в дві пробірки з середовищем. У пробірки з середовищем вносять по 0,3-0,5 мл матеріалу.
При дослідженні абортовану плода роблять посіви вмісту грудної, черевної порожнин, сичуга, печінки, легенів, серця, змінених ділянок плаценти, навколоплідної рідини в дві пробірки з середовищем.
Засіяні пробірки інкубують в термостаті при 37 ° С протягом 10 днів.
На 3-й день посіви переглядають візуально і при виявленні помутніння піпеткою беруть краплю середовища з дна пробірки, поміщають на предметне скло і переглядають в нерозбавленому вигляді під середнім збільшенням мікроскопа в затемненому полі зору. Потім посіви переглядають на 5-й, 7-й, 9-й дні.
З метою диференціації трихомонад готують пофарбовані мазки з середовища. Роблять тонкий мазок, висушують на повітрі, фіксують етиловим спиртом протягом 20-25 хв, забарвлюють за Романовським протягом 40-90 хв, промивають дистильованою водою (рН 7,0-7,2), висушують і досліджують під иммерсионной системою мікроскопа.
При мікроскопії необхідно враховувати, що трихомонади мають округлу, овальну, грушоподібну, ланцетовидную, паличкоподібну форми. Цитоплазма трихомонад забарвлюється в блакитний колір різної інтенсивності, ядро - в червоно-фіолетовий або червоний, джгутики - в червоний.
Від переднього кінця трихомонади відходять 4 джгутика, з яких три спрямовані вперед, а четвертий, облямований ундулірующую мембрану, йде назад і закінчується вільно. Уздовж усього тіла розташований аксостиль. Ядро овальної форми, частіше розташоване ближче до передньої частини тіла збудника.
Трихомонаду необхідно диференціювати від непатогенних джгутикових роду Воdо, Oicоmоnаs, у яких є 1 або 2 джгутики, а ундулирующая мембрана і аксостиль відсутні.
Результати мікроскопічного, культурального досліджень вважають позитивними в разі виявлення в препараті або посівах збудника трихомоноза.
Терміни дослідження: мікроскопічного - 1 день; культурального - 10 днів (табл.9).
Коротка схема диференціальної діагностики трихомонозу, вібріозів, інфекційного фолікулярного вестібуліта, бульбашкового висипу, бруцельозу і токсоплазмозу (по Б.А.Тімофееву, 1967)
Рецепти поживних середовищ для діагностики трихомонозу середу Петровського. Свежеохлажденной печінку великої рогатої худоби звільняють від жиру, канальців, плівок і пропускають через м'ясорубку. Потім беруть 1 кг фаршу, заливають 1 л водопровідної води, настоюють протягом 1 год і кип'ятять 1 год. Після відстоювання фарш видаляють, а рідина доливають дистильованою водою до початкового об'єму і фільтрують через ватно-марлевий фільтр. В колбу наливають 1 л печінкової води, додають 10 г Пептін, 5 г натрію хлористого, 10 г мальтози і стерилізують при 112 ° С (0,5 атм) протягом 30 хв (рН середовища до стерилізації - 8,0-8,2 , після стерилізації-7,2-7,4). Середовище розливають в стерильні пробірки по 8-10 мл, заливають стерильним вазеліновим маслом по 0,30,5 мл. Були отримані серед світло-коричневого або світло-солом'яного кольору.
Пептонно-агарового середовища. В колбу наливають 900 мл кип'яченої дистильованої води, додають 0,5 г агар-агар і підігрівають до повного його розчинення. Потім в гарячий розчин послідовно вносять 20 г пептона, 10 г глюкози, 7 г натрію хлористого, постійно струшуючи колбу. Після розчинення компонентів середу в гарячому вигляді фільтрують через шар фільтрувального паперу, в фільтрат додають кип'ячену дистильовану воду до початкового об'єму і закривають гумовою пробкою, через яку протикають ін'єкційну голку, а горлечко з пробкою перев'язують двома шарами марлі і ставлять в киплячу баню, рН середовища - 6,9-7,2. Якщо рН середовища нижче, то додають по краплях 1% -ний водний розчин натрію їдкого або натрію бікарбонату. Охолоджену середу струшують обертальними рухами колби, розливають в стерильні пробірки по 8-10 мл, нашаровуються стерильне вазелінове масло по 0,5-0,6 мл. Отримана п'ятниця - світло-солом'яного кольору, містить невелику суспензія з часток агар-агар.