Генна діагностика має велике майбутнє в експрес - діагностики інфекційних захворювань. На ранніх етапах інфекції, коли АТ в організмі ще не вироблені, діагностика заснована на ідентифікації Аг, в тому числі специфічних генів збудника. Для цього виявлення застосовують методи гібридизації та ампліфікації ДНК.
Методи виявлення РНК і ДНК збудників знайшли застосування в основному при діагностиці вірусних інфекцій. Проте, розроблені тест - системи для ідентифікації деяких вибагливих бактерій (наприклад, легіонел, хламідій), а так само для ідентифікації колонійNeisseriagonorrhoeae, Haemophilusinfluenzaeтіпаb, стрептококів групи В, ентерококів і мікобактерій.
Гібридизація нуклеїнових кислот.
Найбільш поширені методи гібридизації нуклеїнових кислот. Принцип методів обумовлений здатністю ДНК (і РНК) специфічно з'єднаються з комплементарними фрагментами штучно створених ниток ДНК (І РНК), мічених ізотопами або ферментами. Надалі зразки досліджують різними методами (наприклад, ІФА).
Метод гібридизації в розчинах дає найшвидші результати. Широкому впровадженню методу перешкоджає проблема незв'язаних ниток нуклеїнових кислот.
Метод гібридизації на твердій основі і його сендвіч - модифікація, поширений більше. Як твердої основи служать мембрани з нітроцелюлози або нейлону. Незв'язана реагенти видаляють багаторазовим відмиванням.
Полімеразна ланцюгова реакція.
Основу методу ПЛР становить каталізує ДНК - полімеразою багаторазове освіту копій певної ділянки ДНК. Спочатку виробляють відпал - термічний поділ двухнитевой молекули ДНК на окремі ланцюжки. Потім середу охолоджують і вносять праймери (затравки), комплементарні нуклеотидних послідовностей обох ланцюжків. Для запуску реакції застосовують синтетичні праймери - олігунуклеотіди, що складаються з 10 - 20 нуклеотидів (наприклад, дезоксінуклеотідтріфосфат), які взаємодіють з закінченнями послідовностей і утворюють послідовності в 50 - 1000 підстав. Потім в середу вносять термостабільнуюtag- полимеразу, що запускає утворення вторинних копій ланцюгів ДНК, після чого утворюються двухнитьові молекули ДНК знову підігрівають. Утворені окремі ланцюжки остуджують, вносять праймери і знову повторюють процедуру підігріву та охолодження; посколькуtag- полімераза термостабильна, то необхідність у її повторному внесенні відсутня. ПЛР дозволяє отримати велику кількість досліджуваного фрагмента ДНК навіть у тому випадку, якщо в розпорядженні дослідника є всього лише одна вихідна молекула геномної ДНК. Ідентифікацію копій ДНК проводять методом електрофорезу. Метод ПЛР лежить також в основі ДНК - ідентифікації особистості, встановлення спорідненості людей, виявлення генів спадкових хвороб і ін.
Виявлення вірусних Аг.
У теперішній час вже з'явилися комерційні набори для виявлення деяких збудників, що дозволяють їх ідентифікувати за 5 - 10 хвилин. Для виявлення Аг на твердій фазі збирають відомі АТ і додають сироватку, що містить Аг; після інкубування незв'язаний Аг декантирують, систему промивають і вносять мічені АТ, специфічні до сорбирования АТ. Повторюють процедуру інкубування та відмивання, вносять хромогенний субстрат, позитивний результат фіксують при зміні забарвлення системи.
Це високоспецифічний метод, що дозволяє ідентифікувати геном вірусу після його гібридизації комплементарними молекулами ДНК. Як маркера застосовують ферменти і ізотопи. Метод визначає здатність вірусної ДНК гібридизувати з міченої з міченої комплементарної ДНК; специфічність методу прямо пропорційна довжині комплементарної ланцюжка. Перспективний метод гібридизації нуклеїнових кіслотinsitu. Для постановки реакції мічену ДНК наносять на біоптати тканин (в тому числі на фіксовані формаліном або ув'язнені в парафінові блоки) і реєструють взаємодія з комплементарної ДНК. Метод використовують для виявлення вірусів простого герпесу, папіломи людини, Епстана - Барр та ін.
(Стор. 137 - 138, 268 - 271, 276 - 277)