Індекс множинних дефектів сперматозоїдів. Диференціація живих і мертвих сперматозоїдів
Сперматозоїди з патологічною морфологією часто мають множинні дефекти. Раніше в протоколах фіксувався тільки 1 дефект, перевага віддавалася дефектів головки. В даний час часто підраховують індекс тератозооспермії (ІТЗ, або TZI, - teratozoospermia index), або індекс множинних аномалій (ІМА, або MAI, - multiple anomalies index), т. Е. Число дефектів, поділене на число патологічних сперматозоїдів:
ІТЗ (ІМА) = сумарне число дефектів / число сперматозоїдів з дефектами.
Окремо виділяють «дефекти головки», дефекти середньої частини »,« дефекти хвоста ». Значення ІТЗ лежить в межах від 1,00 (кожен патологічний сперматозоїд має тільки 1 дефект) до 3,00 (кожен патологічний сперматозоїд має дефекти головки, середньої частини і хвоста).
Є дані, що при ІТЗ більше 1,6 відбувається зниження частоти настання вагітності. Другим індексом, використовуваним для характеристики популяції сперматозоїдів, є індекс дефектності сперматозоїдів (ІДС), т. Е. Число дефектів, поділене на загальне число сперматозоїдів. ІДС 1,6 є граничним, вище цього значення спостерігаються невдачі при заплідненні т vitro:
ІДС = сумарне число дефектів / число підрахованих сперматозоїдів.
Цей індекс може бути більше 1, якщо більшість сперматозоїдів має по кілька дефектів.
За допомогою цих індексів прогнозується функція сперматозоїдів як in vivo. так і in vitro (фертильність еякуляту). Для підрахунку цих індексів можна використовувати клавішні лічильники клітин крові.
Під життєздатністю мається на увазі частка (у відсотках) «живих» сперматозоїдів, які визначаються або по виключенню барвника, або по гіпоосмотіческая набухання. Життєздатність слід визначати тільки в тому випадку, якщо відсоток нерухомих сперматозоїдів перевищує 50%. Оцінка життєздатності може служити контролем точності оцінки рухливості сперматозоїдів, оскільки відсоток мертвих клітин не повинен перевищувати відсотка нерухомих сперматозоїдів. Наявність великої кількості живих, але нерухомих сперматозоїдів вказує на структурні дефекти хвостиків (синдром Картагенера),
Некрозооспермія - присутність в еякуляті більше 50% мертвих сперматозоїдів.
Диференціація живих і мертвих сперматозоїдів
хід дослідження
I спосіб. На предметному склі змішати краплю добре розмішати еякуляту з такою ж за розміром краплею розчину еозину і покрити препарат покривним склом. Дослідити препарат через 30 с при збільшенні х400.
Оцінку отриманих результатів провести негайно. Живі сперматозоїди - безбарвні (білі), мертві - фарбуються в колір барвника.
II спосіб. Змішати краплі сперми і розчину еозину на предметному склі. Через 1 хв зробити мазки і висушити на повітрі. Мікроскопіровать під іммерсійним об'єктивом (х90 або х100) з окуляром х10 або бинокуляром. Головки живих сперматозоїдів - безбарвні, мертвих - пофарбовані еозином в оранжево-червоний колір.
2-й варіант - еозин-нігрозин (модифікація Блюма)
Реактиви: еозин - 3% водний розчин, нігрозин - 10% водний розчин, Хід дослідження:
- на предметне скло нанести краплю добре розмішати еякуляту; поруч помістити 2 краплі розчину еозину; - краплю сперми ретельно перемішати скляною паличкою з краплями еозину і витримати 30 с;
- додати 3 краплі розчину нігрозину, витримати 30 с;
- зробити пластиковим шпателем або покривним склом тонкі мазки, висушити і досліджувати під иммерсией (х900 або х1000);
- порахувати 100 забарвлених і нефарбованих сперматозоїдів і визначити процентне співвідношення живих і мертвих. оцінка тесту
Живі сперматозоїди - безбарвні, мертві - пофарбовані в оранжево-червоний колір. Нігрозин створює темний фон, що полегшує вивчення препарату.
Нормальним вважається еякулят, в якому> 75% живих сперматозоїдів (в рекомендаціях ВООЗ - 50% і більше).