Прижиттєвий діагноз на більшість гельмінтозів встановлюється коп-рологіческімі методами дослідження шляхом виявлення гельмінтів або їх фрагментів (гельмінтоскопія), статевих продуктів - яєць (овоскопія) або личинок (ларвоскопія).
У свежевиделенних фекаліях тварин можна виявити членики цестод (аноплоцефалід). Іноді з фекаліями можуть виділятися великі нематоди (параскаріси, оксіуріди, стронгілід). Однак таке явище має випадковий характер і відбувається з різних причин, не пов'язаних з біологічними особливостями паразитів.
Членики цестод і дрібних нематод виявляють методом послідовного промивання фекалій. Гельмінтів вибирають з осаду і диференціюють за морфологічними ознаками.
Більшість гельмінтозів прижиттєво діагностується овоскопіческімі методами. Залежно від питомої ваги яєць гельмінтів їх виділяють з фекалій або методами осадження, або спливання (флотації) (рис. 292).
Яйця трематод важчі, тому їх виділяють осадженням, використовуючи метод послідовних змивів.
Метод послідовних змивів. Для виконання досліджень будуть потрібні: а) ступка з товкачиком (при їх відсутності можна обійтися консервною банкою і ложкою); б) воронка; в) скляний стакан на 100-150 мл (краще циліндричний); г) металева сітка або марлева серветка розмірами 12 х 12 см; д) предметні скельця.
Мал. 292 Яйця гельмінтів однокопитних тварин:
Метод послідовних змивів застосовується для діагностики фасциолеза і дикроцеліоз тварин.
Яйця фасциол - великого розміру, правильної овальної форми, з кришечкою на одному з полюсів, зернистою масою всередині і оболонками золотисто-жовтого кольору.
Яйця дікроцелій - дрібні, асиметрично-овальної форми, з личинками-мірацідіямі всередині і оболонками коричневого кольору.
Для виявлення яєць більшості гельмінтів та ооцист кокцидій використовують копрологіческіе методи спливання (флотації). Найбільш простими з виконання копрологіческого методами дослідження на гельмінтози, що не вимагають спеціального обладнання і матеріалів, є методи Фюллеборна і Котель-ників. Обидва методи дослідження фекалій можуть бути використані в умовах виробництва. Обладнання, необхідне для виконання дослідження цими методами, таке ж, як при методі послідовного промивання. Для флотації яєць гельмінтів необхідно приготувати розчини солей з певною щільністю.
Метод Фюллеборна. Для виконання дослідження методом Фюллеборна готують насичений розчин кухонної солі (NaCl). У посуд з киплячою водою кладуть кухонну сіль (з розрахунку 400-420 г солі на 1 л води) і продовжують кип'ятити при слабкому нагріванні до тих пір, поки сіль не припиняє розчинятися (на дні посуду залишається нерозчиненого сіль, а на поверхні рідини з'являється тонка плівка). Розчин ролі в гарячому стані фільтрують через шар вати або марлю. Після охолодження розчину на дні посуду випадає осад солі (ознака правильності приготування розчину потрібної концентрації). Використовують в роботі надосадову рідину без взмучивания осаду.
Порцію досліджуваних фекалій в кількості близько 10 г поміщають в ступку, додають близько 80-100 мл насиченого розчину кухонної солі і ретельно перемішують з допомогою маточки (без інтенсивного розтирання фекалій) до рівномірної суспензії. Суспензія фільтрують через металеве сито або один шар марлі в циліндричний стаканчик (або банку) ємністю 100-150 мл і відстоюють протягом 10-15 хвилин, після чого з поверхні рідини знімають копроліт-ня петлею плівку, переносять її на предметне скло для мікроскопічного дослідження . Бажано досліджувати не менше трьох плівок, знятих з різних ділянок поверхні рідини в стаканчику. Стандартну копрологіче-ську петлю можна виготовити з тонкого мідного дроту (одна жилка многожильного електричного дроту) довжиною 10-12 см, скрутивши на її кінці кільцеву петлю на круглому олівці і підігнувши петлю під кутом 90 °. Петля багаторазового користування. Перед використанням її пропалюють на полум'ї пальника або ретельно промивають.
Плівка рідини, вміщена на предметне скло, повинна негайно досліджуватися, так як в ній, при підсиханні, випадають кристали солі, що утрудняють виявлення яєць гельмінтів. Методом Фюллеборна виділяються далеко на всі яйця гельмінтів, тому перевагу слід віддати його модифікації - методу Котельникова, який виконується за такою ж методикою, але в якості флотаційного рідини використовується розчин аміачної селітри. Щільність застосовуваного розчину селітри значно більше, ніж насиченого розчину кухонної солі, тому в ньому спливають яйця майже всіх гельмінтів (крім яєць трематод).
Метод Котельникова. Готують флотационную рідина, розчиняючи гранульовану аміачну селітру (використовувану в агрономії в якості мінерального добрива) в гарячій воді. На 1 л води беруть 1500 г селітри. Селітру розчиняють поступово при постійному підігріванні (але не кип'ятінні!) Води і зберігають у щільно закупореній посуді.
Дослідження фекалій методом Котельникова роблять так само, як і методом Фюллеборна, але фекалії беруть в кількості 5 г, а розчину селітри не більше 50 мл. Суспензія фекалій у флотационном розчині відстоюють протягом 10 хвилин. Перевагою методу Котельникова є не тільки більш висока ефективність і універсальність, а й те, що поверхнева плівка рідини при відстої не містить великих спливли частинок фекалій і піни, що заважають виявленню яєць паразитів.
Флотацій методами в фекаль- ь них масах тварин виявляють яйця нематод - параскарісов, стронгілят, стронгілоідесов, Драша і габронем, а також яйця цестод.
Яйця параскарісов - середнього розміру, округлої форми, з товстими оболонками, жовто-коричневого кольору. Всередині яйця проглядається дрібнозернистий зародковий шар, іноді на стадії дроблення.
Яйця стронгілят - середнього розміру, видовжено-овальної форми, з тонкими двоконтурними оболонками, сірого кольору. Усередині яєць видно зародковий шар на стадії дроблення ( «кулі дроблення»). Яйця всіх стронгілят мають однакову будову, і визначити їх родову приналежність неможливо. Діагноз встановлюється тільки до підряду - «стронгілятози».
Прижиттєву родову приналежність яєць стронгілят визначають по інвазійних личинок, вирощеним в фекаліях тварин за певних умов.
Яйця стронгілоідесов дрібні, округло-овальної форми, з тонкими, гладкими оболонками, сірого кольору. Усередині яєць проглядається личинка, згорнута в формі «шпильки».
З яєць стронгілоідесов у зовнішньому середовищі при сприятливих умовах вже за 6-7 годин може вийти личинка.
Яйця Драша і габронем дрібні, довгасто-овальні, з притупленими кінцями, з тонкими, ніжними оболонками, світло-сірого кольору, з личинками всередині, згорнутими в формі «шпильки». Хоча яйця Драша і габронем виявляються методами флотації (за методом Котельникова), концентровані розчини солей їх деформують. Тому для виділення їх з фекалій у спеціально розробленій метод Горшкова (див. Ларвоскопіческій метод Бермана-Орлова).
Яйця аноплоцефалід. Яйця цестод-аноплоцефалід середнього розміру, неправильної форми у вигляді багатогранників (в проекції зазвичай чотирикутні з закругленими кутами), з тонкими оболонками, темно-сірого кольору. Усередині проглядаються онкосфери округлої форми, укладені в власні оболонки з бічними виступами у вигляді ріжків ( «грушоподібний апарат»).
Яйця оксіурісов - середнього розміру, овально-асиметричної форми, з товстими двоконтурними оболонками, светлосерого кольору, зі слизової пробочкой на одному з полюсів. Всередині яйця проглядається дрібнозернистий маса.
Яйця оксіурісов виявляють на шкірі періанальної області тіла, зскрібаючи їх з шкіри дерев'яною паличкою або ватяним тампоном, змоченим 50% -ним розчином гліцерину. З соска-ба готують розчавлену краплю на предметному склі і досліджують під мікроскопом. У фекальних масах інвазованих тварин яйця оксіурісов виявляються рідко.
Для виділення з фекалій, внутрішніх органів і тканин личинок гельмінтів використовують методи гельмінтоларвоскопіі. Найчастіше для цієї мети використовують методи Бермана-Орлова і Щербовічу.
Фекалії для дослідження слід брати з прямої кишки тваринного і досліджувати в свіжому вигляді так, щоб вони знаходилися в зовнішньому середовищі не більше 68 годин. При дотриманні цієї умови всі виявлені личинки будуть належати легеневим гельмінтів, диференціювати яких нескладно. У полежали у зовнішньому середовищі фекаліях з'являються личинки гельмінтів травного тракту, від яких необхідно буде відрізняти личинок діктіокаул, що значно ускладнить діагностику.
Метод Бермана-Орлова. Для дослідження фекалій методом Бермана-Орлова потрібні: а) воронка, на кінець якої надіта гумова трубка довжиною 12-15 см; б) конічна центріфужная пробірка чи затиск для гумових трубок; в) металеве ситечко або марлева серветка розміром 20 х 20 см; г) штатив або інше пристосування для фіксації воронки в вертикальному положенні.
На кінець гумової трубки надягають центрифужную пробірку, щільно заклинило її (або при відсутності пробірки встановлюють зажим). У воронку наливають воду кімнатної температури або підігріту до 35-40 ° С, встановлюють ситечко, так щоб воно було злегка зануреним у воду, і на ньому розміщують фекалії від тварин в кількості 5-10 м При відсутності сита фекалії загортають одним шаром марлі і занурюють у воду. Фекалії витримують у воді протягом 6-12 годин, після чого обережно, пережавши гумову трубку, знімають пробірку. Рідина в пробірці відстоюють 510 хвилин або центрифугують при 1000 оборотах протягом хвилини. Верхній шар рідини в пробірці обережно одним прийомом зливають так, щоб в пробірці залишилося 0,5-1 мл рідини, яку виливають на предметні скельця для мікроскопії (краще, якщо для цієї мети використовують спеціально вирізані скла великих розмірів, на які можна відразу розмістити всю досліджувану частину матеріалу).
Метод Бермана-Орлова частіше використовується в умовах лабораторій. У виробничих умовах зазвичай застосовують його модифікації.
Цим же методом досліджують фекалії однокопитних тварин при діагностиці драшейоза і габронематоза. У воронку наливають воду кімнатної температури. Встановлюють металеву сітку, так щоб вона була занурена в воду, на ній рихло розміщують 100-200 г фекалій і витримують до 10-12 годин. Яйця нематод вимиваються з фекалій і осідають на дно пробірки. Досліджують осад, який осів на дно пробірки.
Метод Щербовічу. Для виконання дослідження методом Щербовічу потрібні: а) конічний або циліндричний стаканчик ємністю на 50-100 мл; б) марлева серветка (15 х 15 см); в) предметні і покривні скла; г) відрізок тонкої м'якої мідного дроту довжиною 10 см.
У стаканчик наливають воду кімнатної температури або підігріту до температури 35-40 ° С, в кількості 2/3 ємності посуду. Фекалії, взяті з прямої кишки тварини, загортають в один шар марлі, обв'язують мідним дротом, так щоб частина дроту залишилася вільною. Вільний кінець дроту загинають гачком, на який і підвішують загорнуті в марлю фекалії на край склянки, щоб вони стосувалися води. Фекалії в підвішеному стані залишають на 5-6 годин, після чого обережно видаляють, а що залишилася в стаканчику рідина відстоюють ще 5-10 хвилин. Після відстою верхній шар рідини обережно зливають, так щоб в стаканчику залишилося 0,5-1 мл осаду, і переносять його на предметні скельця для мікроскопії.
Методом ларвоскопія виявляють у фекаліях тварин личинок нематоди-діктіокаули, яка паразитує в бронхах.
Личинки діктіокаулов розміром 0,4 мм в довжину, з короткими загостреними хвостовими і закругленими головними кінцями, темно-сірого кольору. Тіло личинок заповнене зернистої масою (крім головного і хвостового кінців). Внутрішня будова личинок погано проглядається. Личинки мають повільним змієподібним рухом.
Ларвоскопіческімі методами можна виділити з різних органів і тканин мігруючих личинок деяких нематод (з легких, печінки та інших органів.
Личинки нематод однокопитних тварин
Кров тварин досліджують при підозрі на парафіляріоз і сетарйоз.
Діагностика парафіляріоза. Поява кровоточивих ранок на шкірі тварини в теплу пору року дає підставу досліджувати кров на наявність личинок гельмінтів. Для цієї мети очної піпеткою набирають з кровоточить шкірної ранки краплю крові, переносять на предметне скло (краще на спеціально вирізаний скло великого розміру, приблизно 5 х 10 см), додають до неї 5-10 крапель дистильованої води (для лізірованіе еритроцитів) і проводять мікроскопію при слабкому збільшенні. Виявляють рухливих личинок розміром близько 0,2 мм, заповнених зернистої масою зеленого кольору, або дрібні яйця овальної форми сірого кольору з личинками всередині.
Личинок сетарій (мікросетарій) виявляють при дослідженні мазків, приготовлених з периферичної крові тварин і забарвлених за методом Романовського-Гімза. Мазки бажано готувати у вечірній час, коли кількість мікросетарій в периферичної крові збільшується. Личинки сетарій довжиною близько 0,3 мм, зернистої структури, з чехликом, добре видимим на головному і хвостовому кінцях. У задній частині личинок видно 4-5 великих клітин.
При підозрі на онхоцеркоз досліджуються шматочки шкіри методом дермолар-воскопіі з метою виявлення личинок онхоцерков (мікроонхоцерков). Для цього на уражених ділянках шкірного покриву в області холки, плечей, передніх кінцівок за допомогою ножиць або скальпеля вирізають шматочок шкіри розміром з дрібну горошину і товщиною 2-3 мм.
Вирізаний шматочок шкіри поміщають в пробірку з невеликою кількістю фізрозчину і витримують протягом 1-2 годин в термостаті при температурі 36-3 7 ° С, після чого досліджують осад. У позитивному випадку при мікроскопії виявляють рухливих личинок зернистої структури (без чохлика), розміром близько 0,25 мм.
Дослідження очей проводиться при підозрі на телязіоз з метою виявлення гельмінтів або їх личинок.
Гельмінтів можна вимити з кон'-юнктівального мішка 1% -ний розчином борної кислоти за допомогою гумової груші з м'яким наконечником. Кінець груші вводять в кон'юнктивальний мішок і струменем розчину борної кислоти промивають очей. Витікаючу рідину збирають в підставлену кювету і уважно переглядають. Вимиті з ока ниткоподібні нематоди розміром близько 1,5 см в довжину активно рухаються і легко виявляються.
Личинок телязий можна виявити при мікроскопічному дослідженні слізної рідини, взятої з ока тварини. Для цього очної піпеткою обережно збирають слізну рідину з внутрішнього кута ока, поміщають на предметне скло і проводять мікроскопію. Личинки телязий розміром близько 0,3 мм, зернисті, з чех-ликом, активно рухаються.