Діагностичне значення дослідження активності ізоферментів КФК
Методи визначення активності КФК
Стандартні клініко-лабораторні показники
Роль креатинфосфокінази в метаболізмі м'язової тканини
Кінетика дії КФК
Перенесення енергії з мітохондрій в цитоплазму клітини міокарда за допомогою ізоферментів КФК
Активність КФК в мембранах саркоплазматичного ретикулума міокарда в умовах експериментальної коронарної недостатності
Вплив алкогольної інтоксикації і процесів старіння на активність креатинфосфокінази і її ферментів
Історія вивчення креатинфосфокінази (КФК) цікава і незвичайна: не дивлячись на те, що вона почалася більше 80 років тому (з відкриття креатинфосфату в 1927 р), а креатінкіназная реакція була відкрита Ламаному і Леманн в 1934- 1936 роках, дослідники все ще відкривають нові функції креатінкіназной системи і проблема залишається далекою від вирішення. Розвиток ідей про фізіологічну роль креатінкіназной системи з самого початку було тісно пов'язане з успіхами в галузі вивчення м'язової фізіології та біоенергетики. Зі свого боку, дослідження креатінкіназной системи вносять помітний внесок у формування уявлень про загальні принципи організації метаболізму і метаболічного контролю в клітці.
Мета роботи: дослідження сучасних поглядів на будову і біологічну роль креатинфосфокінази.
Креатинкіназа (КФ 2. 7. 3. 2) - відноситься до фосфотрансферази з азотовмісними групою в якості акцептора.
До класу трансфераз відносять ферменти, що каталізують різні перетворення, що представляють собою перенесення радикала від молекули-донора до молекули-акцептора і не є процесом гідролізу. Найменування їх складається за формою: «донор - транспортується група - трансфераза».
У 1964 р було відкрито ізоферменти креатинфосфокінази: цитоплазматические ВВ-КФК (від англ. Brain - мозок), ММ-КФК (від англ. Muscle - м'яз) і гібридна форма - МВ-КФК, а також мітохондріальний ізофермент - мт-КФК.
У серці цитоплазма містить половину ММ-форми, а також всю МВ- і ВВ-КФК; їх сумарна активність складає 40-50% від загальної активності.
Діагностичне значення дослідження активності ізоферментів КФК
Дослідження активності ізоферментів КФК в сироватці крові має важливе діагностичне значення. Ферменти креатинкінази особливо важливо досліджувати при гострому інфаркті міокарда, так як МВ-форма в значній кількості міститься майже виключно в серцевому м'язі. Підвищення активності МВ-форми в сироватці крові свідчить про поразку саме серцевого м'яза.
Методи визначення активності КФК
Уніфікованим методом визначення активності креатинфосфокінази служить метод з використанням в якості субстрату реакції креатину. Активність ферменту пропорційна кількості неорганічного фосфору, що утворюється в результаті кислотного гідролізу продукту креатінкіназной реакції - креатинфосфату. Неорганічний фосфор визначається по кольоровій реакції з молибдатом амонію. У нормі активність креатинкінази в крові, встановлена за допомогою цього методу, досягає 100 нмоль / (с * л), або до 6 МО. Активність МВ-форми креатинкінази становить менше 2% від загальної активності ферменту. Другим методом визначення активності креатинкінази, також прийнятим в якості уніфікованого, є метод з використанням в якості субстрату креатинфосфату. Активність ферменту пропорційна кількості креатину, що утворюється в результаті ферментативної реакції. Креатин визначається по кольоровій реакції з a-нафтолом. У нормі активність креатинкінази в сироватці крові, встановлена за допомогою цього методу, становить від 0 до 220 нмоль / (с * л), або від 0 до 13 МО [Міжнародна одиниця = 16,67 нмоль / (с * л)]. (Ленинджер А. Біохімія, М. 1976, с. 382).
Стандартні клініко-лабораторні показники
Креатинфосфокиназа (КФК) у сироватці
Норма: 10-50 МО / л при 30С0 (варіює залежно від методу визначення).
А. Застереження щодо проведення експерименту: фермент нестабільний, вміст еритроцитів пригнічує активність ферменту. Сироватка повинна бути швидко відділена від згустку. Якщо дослідження не може бути виконано негайно, сироватку слід заморозити.
Б. Фізіологічна основа: КФК розщеплює креатинфосфат (за участю АДФ) з утворенням креатину і АТФ. КФК багато в скелетної та серцевої м'язах, в мозку.
В. Інтерпретація отриманих даних:
Підвищення показника має місце при м'язових порушеннях (інфаркт міокарда, травма м'яза), при м'язової дистрофії, поліміозиті, сильному м'язовому напрузі (бігу), гіпотиреозі, інсульті. Після інфаркту міокарда КФК підвищується швидко (за 3-5 годин) і збережуться підвищеної 2-3 дня.
Показник не підвищується при інфаркті легкого або ураженні паренхіми печінки.
Ферменти креатинфосфокінази в сироватці (таблиця №1)
А. Застереження щодо проведення експерименту: такі ж, як і в випадку дослідження КФК (див. Вище).
Б. Фізіологічна основа: КФК представлена трьома ізоферментами, що розділяються при електрофорезі. Для скелетного м'яза характерний изофермент ММ, для міокарда МВ, для мозку - ВВ.
Таблиця №1. Ферменти креатинфосфокінази
Інші новини по темі: