1. Вірусологічні методи. Вивчення ЦПД вірусу поліомієліту. Фільтратом випорожнень хворого на поліомієліт, оброблених антибіотиками, заражена культура клітин ФЕЧ (фібробласти Ембрі-вона людини). ЦПД вірусу поліомієліту при мікроскопії культури тканини під малим збільшенням проявляється мелкозерніс-тій деструкцією клітин з утворенням в них гранул, відтісняє-щих ядро до периферії. Мікрокартіну описати, замалювати.
2. Серологічний метод (ретроспективна діагностика). Ви-явище антитіл в парних сироватках крові хворого на поліомієліт за допомогою кольорової проби. У пробірках, де не відбувається репродукції вірусу в результаті нейтралізації його антитілами, середовище забарвлюється в жовтий колір через утворення клітинами культури тканини кислих продуктів метаболізму. Діагностичне значення має 4-кратне наростання титру антитіл.
3. Диференціація вірусів Коксакі А і В - біологічний метод. Фільтрат випорожнень хворого, оброблений антибіотиками, вводять внутрішньочеревно 1-4 денним мишам-шмаркачів. Миші забо-Левана на 3 -7 день. Віруси Коксакі А викликають мляві паралічі, Коксакі В - спастичні.
4. Вивчити біопрепарати для профілактики, діагностики та ле-чення:
· Діагностичні типоспецифічні сироватки для типування вірусів поліомієліту, Коксакі і ECHO;
· Вітчизняна жива вакцина проти поліомієліту, яка містить вакцинні віруси трьох типів. У Росії зареєстровано також 3 вакцини для профілактики поліомієліту фірми Пастер Мерье Коннот (Франція): Поліо Себін-ВЕРО - жива вакцина, Імовакс Поліо - інактивована вакцина, Тетракокк - комбінована вакцина для профілактики дифтерії, кашлюку, правця та поліомієліту.
· Імуноглобулін нормальний людський.
Лабораторна діагностика вірусних гепатитів
В даний час відомо 8 гепатотропних вірусів (A - HAV, B - HBV, C - HCV, D - HDV, E - HEV, F - HFV, G - HGV, а також TTV - transfusion transmitted virus, передається при трансфузіях). Ураження печінки можуть викликати і інші віруси (наприклад, цитомегаловірус, герпесвіруси і т.д.). У зв'язку з труднощами культивування вірусів гепатитів провідна роль в лабораторній діагностиці вірусних гепатитів відводиться серологічним методами, а останнім часом - методам генодиагностики (ПЛР).
Вірус гепатиту A (HAV) відноситься до сімейства вірусів, роду Hepatovirus.
Матеріалом для дослідження є фекалії хворого. Вірус гепатиту А інтенсивно виділяється з фекаліями біль-них протягом декількох днів в кінці інкубаційного періоду до появи клінічних прояв-лений інфекції, після чого його концентрація різко знижується.
Експрес-діагностика полягає в постановці ІЕМ, РІА, ІФА з метою виявлення вірусу або його антигенів в екстракті фекалій.
Вірусологічні методи полягає в зараженні фільтратом фекалій чутливих тварин (шимпанзе і мавп-мармозеток), а також культури лімфоцитів людини. Індикацію та ідентифікацію вірусу проводять за допомогою РІФ або електронною мікро-скопии.
Серологічний метод - виявлення антитіл класу IgM до вірусу гепатиту А, що з'являються в ранні терміни інфекції і вказують на свіже інфікування, а також антитіл класу IgG (зазвичай за допомогою ІФА або РСК, рідко - ІЕМ, РІА).
Генодіагностика. Для діагностики гепатиту А розроблена ПЛР, проте вона широ-ко не застосовується, так як метод ІФА дозволяє в уже ранні терміни інфекції виявити антитіла класу IgM до даного вірусу.
Вірус гепатиту В (HBV) відноситься до роду Orthohepadnavirus сімейства Hepadnaviridae, містить поверхно-стни антиген HBsAg і два внутрішніх - HBcAg (cor -серце) і HBeAg, (ДНК-полімераза), до яких у хворого утворюються відповідні антитіла.
Експрес-діагностика гепатиту Ввключает визначення HbsAg. за допомогою ІФА, РІА, Ронг, РПГ, зустрічного іммуноелектрофореза, РИМ, ронг. Антиген з'являється в сироватці крові хворого в інкубаційному-ном періоді за кілька тижнів (до 8) до по-щення активності амінотрансфераз.
Серологічне дослідження - виявлення в сироватках крові хворих і носіїв антитіл до анти-генам HBV за допомогою ІФА, РНГА РПГ, рідше - РІА, РВІЕФ. Визначення антигенів HBV і антитіл до них має важливе діагностичне і прогностичне значення. У інкубації-онном періоді протягом 2-5 місяців виявляється HBsAg, а при хронічному перебігу більш тривалий проміжок часу. Гострий період інфекції характеризується появою HBcAg і HbeAg (виявляється в крові протягом 1-7 тижнів; його поява на 1-3 тижні хвороби є несприятливим прогностичним ознакою). У стадію ранньої реконвалесценції з крові зникають HBcAg і HbeAg, нопоявляются і потім наростають антитіла до НВс і НВе антигенів. Стадія пізньої реконвалесценції характеризується наявністю антитіл до всіх трьох антиген-нам HBV.
У носіїв вірусу гепатиту В в крові виявляються HbsAg. антитіла до HbcAg і НВеAg класу IgM. рідко - антитіла до HbcAg і до HbsAg класу IgG.
У крові хворих на гепатит В можуть бути виявлені також дельта-частинки (або дельта-антиген), що представляють собою віруси гепатиту D, часто асоційовані з вірусом гепатиту В.
Генодіагностика. Розроблено кілька методів генодиагностики (методи гібридизації, лігазная ціп-ва реакція, ПЛР та ін.). Найбільшого поширення набула ПЛР, що є інформативним методом при безсимптомних, хронічних і змішаних формах гепатитів. ПЛР використовують також для оцінки рівня вірусемії і ефективності проведеного лікування.
Вірус гепатиту С (HCV) РНК-геномної представник роду сімейства Flaviviridae. Виділяють 6 сероварів ЯСК, каж-дий з яких переважно зустрічається в певній стра-ні (наприклад, 1-й тип - в США, 2-й тип - в Японії).
Вірус гепатиту D (HDV) - дефектний сателітний РНК-вірус, що ускладнює перебіг гепатиту В, входить в рід Deltavirus сімейства Togaviridae. Само-самостійну інфекції не викликає.
Вірус гепатиту Е (HEV) - РНК-геномної представник роду Calicivirus сімейства Caliciviridae,
Вірус гепатиту G (HGV) умовно відноситься до сімейства Flaviviridae.
Серологічний метод є в реальній практиці основним методом лабораторної діагностики зазначених гепатитів, тому що культивування цих вірусів пов'язане з великими труднощами. Антитіла до вірусів гепатитів в парних Сивоя-Ротко крові хворих виявляють за допомогою ІФА, РІА, ІЕМ, РІФ з диференціацією антитіл за класами імуноглобулінів (зокрема по IgM - маркера свіжого інфікування). Антитіла класу IgM до вірусів гепатитів D, Е і G з'являються через 10-15 днів після початку клінічних проявів інфекції, до вірусів гепатиту С - через 3 місяці. Антитіла класу IgG IgM до вірусу гепатиту D можна виявити через від 2 до 11 тижнів, а до вірусів Е і G через 30 днів після перенесеної інфекції. Підтверджує лабораторним методом є іммуноблотінга.
Генодіагностика. Важливим методом діагностики HCV інфекції є ПЛР, яка дозволяє виявити Віремія і її рівень за змістом РНК вірусу в крові у безсимптомних носіїв вірусу, а також у хворих вже в інкубаційному періоді (задовго до появи антитіл) і в період розпалу інфекції, що має важливе значення для вибору обґрунтованої терапії та прогнозування інфекції. ПЛР є єдиним методом, що дозволяє відрізнити перенесений гепатит С від наявної інфекції у даного пацієнта в даний момент.
ПЛР дозволяє виявити також РНК вірусу гепатиту D при першій-ліпшій нагоді цієї інфекції, підтверджуючи результати визначення антитіл до цього вірусу за допомогою ІФА, тому що результати серологічних досліджень можуть бути сумнівними або негативними у випадках зв'язування антитіл антигенами вірусу.
Самостійна робота студентів