Забарвлення мікроорганізмів - комплекс методів і прийомів, що застосовується для вивчення морфологічних властивостей мікроорганізмів. У нативному (природному) стані бактерії мають такий же коефіцієнт заломлення, як і скло, тому вони невидимі під мікроскопом. Завдяки О. м. Можна вивчати їх морфол. особливості, що необхідно при проведенні бактеріологічного дослідження. Фарбування бактерій проводиться як для виявлення їх в досліджуваному матеріалі при бактеріоскопічної діагностиці, так і для їх ідентифікації після виділення чистої культури з досліджуваного матеріалу при бактеріол. дослідженні.
Приготування забарвленого препарату складається з наступних етапів: приготування мазка, його висушування, фіксація і забарвлення. Для приготування мазка на середину чистого предметного скла наносять невелику краплю води і за допомогою бактеріальної петлі поміщають в неї досліджуваний матеріал. Матеріал рівномірно розподіляють на склі таким чином, щоб утворився тонкий мазок круглої або овальної форми розміром 1-2 см2. Потім препарат висушують або при кімнатній температурі на повітрі, або в струмені теплого повітря високо над полум'ям пальника. Висушений мазок піддають фіксації, внаслідок чого він прикріплюється до скла (фіксується), мікроби инактивируются і стають безпечними, зростає їх сприйнятливість до фарбування. Застосовують різні способи фіксації. Найбільш простим і найпоширенішим способом є фіксація жаром - нагріванням на полум'ї пальника (препарат кілька разів проводять через найбільш гарячу частину полум'я пальника). У деяких випадках вдаються до фіксації препарату етиловим або метиловим спиртом, ацетоном, сумішшю рівних обсягів етилового спирту і ефіру (по Никифорову). Після фіксації виробляють забарвлення мазка. Найбільш придатними для забарвлення мікробів є основні і нейтральні анілінові барвники. Пофарбований препарат промивають водою і висушують. На висушений мазок наносять краплю иммерсионного масла і проводять мікроскопію, користуючись иммерсионной системою мікроскопа.
Існують прості і складні способи фарбування мікробів. При простій забарвленні, к-раю дозволяє швидко вивчити морфол. особливості мікробів, зазвичай використовують тільки один барвник, найчастіше червоного кольору - фуксин (забарвлення проводиться протягом 1-2 хв) або синього кольору - метиленовий синій (час обробки мазка фарбою 3-5 хв). При складних методах забарвлення застосовують два або більше контрастних барвника, протрави, що диференціюють речовини і ін. Серед складних методів забарвлення розрізняють диференціальні методи і методи, призначені для виявлення окремих структур клітини. До диференціальним методів належать методи Грама і Ціля-Нельсена, що дозволяють розрізняти за кольором мікроорганізми, подібні за морфол. властивостями.
Метод забарвлення за Грамом - найбільш поширений складний спосіб забарвлення. Бактерії в залежності від того, піддаються вони забарвленням за цим методом чи ні, поділяють на дві групи: грампозитивні (фарбувальні по Граму) і грамнегативні (не прикрашають) Різниця в забарвленні обумовлено різною будовою клітинної стінки грампозитивних і грамнегативних бактерій.
Методика забарвлення по Граму полягає в послідовній обробці фіксованого мазка: забарвленні генціанвіолетом через фільтрувальну папір (1-2 хв), обробці розчином Люголя (1 хв), знебарвленні спиртом (1 / 2-1 хв - до відходження фіолетових цівок фарби), промиванні водою, фарбуванні фуксином (1-2 хв). Суть методу полягає в тому, що грампозитивні бактерії утримують комплекс барвник - йод і не знебарвлюються спиртом, грамнегативні не володіють цією властивістю, т. Е. Знебарвлюються спиртом (дифференцирующим речовиною) і дофарбовував фуксином. В результаті грампозитивні бактерії набувають фіолетовий колір, грамнегативні - червоний.
Метод Ціля-Нельсена призначений для диференціації кислотостійких бактерій (збудників туберкульозу і лепри) від некіслотоустойчівих. При фарбуванні за цим методом використовують карболовий фуксин Ціля, сірчану к-ту (дифференцирующее речовина) і метиленовий синій. Кислотостійкі бактерії забарвлюються в червоний колір карболовим фуксином Циля і не знебарвлюються к-тій, некіслотоустойчівие втрачають червоне забарвлення при обробці к-тій і дофарбовував метиленовим синім.
При вивченні структури мікробної клітини використовують цілий ряд складних методів. Так, для виявлення капсули у бактерій застосовують метод Гінса, для виявлення спор бактерій - метод Ауєскі, зерна волютина можна забарвити за допомогою методу Нейссера. Для виявлення джгутиків використовують методи "сверхокраскі", при яких клітини і окремі їх структури збільшуються в розмірах і стають видимими під світловим мікроскопом. До методів "сверхокраскі" відноситься, зокрема, метод сріблення по Морозову. Він також може бути використаний для фарбування спирохет і навіть найбільш великих вірусів - вірусів віспи.
Універсальним методом О. м. Є забарвлення за Романовським-Гімзою (сумішшю Азура, еозину і метиленового синього). При фарбуванні найпростіших їх цитоплазма набуває блакитного кольору, а ядра - червоно-фіолетовий. Цей метод використовують також при дослідженні риккетсий, хламідій, спірохет, формених елементів крові.