При обстеженні на малярію значного числа осіб необхідно завчасно підготувати голки, предметні скельця, скла зі шліфованими краями, спирт, ефір, гигроскопическую вату. Для забезпечення чистоти предметних стекол їх кип'ятять в слабкому розчині соди, потім миють з милом в теплій воді, промивають в проточній і витирають чистим рушником.
Після цього поміщають в закриваються банки зі спир- тому і витримують в них деякий час.
Кров зазвичай беруть з м'якоті останньої фаланги безіменного або середнього пальця лівої руки. Прокол роблять гострими голками одноразового користування. Місце уколу протирають спиртом, а потім ваткою, змоченою ефіром для швидкого обсушування. Якщо кров з ранки від проколу виступає погано,
Мал. 2. Правильно виготовлений мазок крові (по Г. В. Епштейна, 1940).
то злегка масажують палець в напрямку до місця уколу або просять обстежуваного позгинати пальці і зробити кілька енергійних згинальних рухів пензлем. Іноді роблять повторний прокол. Коли від одного хворого беруть кілька мазків, а яка виступила з пальця кров згортається, її видаляють сухою ватою. При виготовленні мазків палець повертають проколом вгору. K виступила краплі крові торкаються нижньою поверхнею предметного скла, відступивши на 1,5-2 см від вузького краю. Потім скло перевертають, беруть в ліву руку, а в праву - предметне скло з шліфованими краями і обламаними куточками і його вузьким краєм під кутом в 45 ° стосуються краплі крові. Кров розтікається по краю йшли
Мал. 1. Виготовлення мазка крові.
Фовал скла, після чого швидким рухом цього скла вперед роблять мазок (рис. 1, 2). Останній повинен бути тонким (еритроцити не повинні налягати друг на друга) і розташовуватися по середній частині скла, не доходячи до бічних країв і до кінця скла, так як уражені еритроцити в значній частині групуються у кінця і по краях мазків. При такому виготовленні препаратів їх зручно досліджувати під мікроскопом.
При виготовленні товстих крапель палець повертають проколом вниз. K виступаючим краплях крові підносять предметне скло, на яке беруть 2-3 каплікрові і затеміглой або кутом іншого предметного скла кров розмазують, щоб отримати на склі овал діаметром близько 1 см або смугу довжиною 2-3 см. Шар крові не повинен бути занадто товстим, так як в останньому випадку при висиханні він перетворюється в корочку і легко відстає від скла. Після виготовлення товстих крапель їх висушують, поміщаючи скла на горизонтальну поверхню. Для прискорення висихання стекол їх можна поміщати в термостат (30-35 °). Потрібно охороняти скла від запилення, а також від мух і тарганів, які охоче поїдають вологу і підсохлу кров.
Фіксація і забарвлення мазків крові. Мазки, висушені на повітрі, фіксують, а потім фарбують. Для фіксації застосовують метиловий спирт (фіксація 3-5 хв), етиловий 96 ° спирт (15 хв) або суміш Никифорова - абсолютний етиловий спирт і ефір в рівних співвідношеннях (20 хв). Фіксатор можна наливати прямо на скло, яке перебуває в горизонтальному положенні, або краще користуватися спеціальними стаканчиками, в які занурюють відразу кілька препаратів. Фіксовані мазки висушують на повітрі і забарвлюють за методом Романовського - Гімза.
Готовий розчин фарби розводять перед вживанням дистильованою водою з розрахунку 1-2 краплі на 1 мл води і піпеткою наливають на мазки, вміщені на дно скляної ванночки. Тривалість фарбування - 30-45 хв. Після забарвлення препарат промивають слабким струменем води і висушують на повітрі. Ha склі з мазком можна написати простим олівцем прізвище хворого, номер і дату. Цей напис добре зберігається.
Дистильована вода для розведення фарби повинна мати нейтральну або слабощелочнуюреакцію (pH = 7,0-7,2).
Число крапель основного розчину на певний об'єм води і тривалість фарбування краще встановлювати для кожної окремої серії фарби Романовського шляхом попередніх проб.
Забарвлення товстої краплі. Товсті краплі після висушування на повітрі фарбуються фарбою Романовського - Гімза без попередньої фіксації. Техніка фарбування така ж, як при фарбуванні мазка. Тривалість фарбування - близько 40-45 хв. При цьому відбувається вилуговування гемоглобіну з еритроцитів, і одночасно фарбуються лейкоцити, кров'яні пластинки і плазмодії. Якщо товсті краплі зберігали незабарвленими більше тижня, то їх слід попередньо обробити дистильованою водою протягом 10-15 хв, наливаючи воду безпосередньо на препарат. Після видалення з стекол дистильованої води, разом з вилужені гемоглобіном, на них наливають фарбувальний розчин. Після забарвлення товстої краплі препарати обполіскують водою. Найкраще промивати препарат зануренням його в баночку з водою, дотримуючись обережності, щоб не змити зі скла забарвлену краплю.
Зберігають пофарбовані препарати загорнутими в папір, невеликими пачками, а краще - в спеціальних папках з гніздами для кожного препарату. Після микроскопирования іммерсійне масло видаляють м'якою фланелевою ганчірочкою. Попередньо масло можна розчиняти очищеним бензином. Для більшого збереження можна робити захисні покриття препаратів розчином органічного скла в хлороформі.
Для виявлення плазмодіїв мазки крові розглядають під мікроскопом з об'єктивом 90 і окуляром 7, при достатньо яскравому освітленні денним або штучним світлом, відбитим плоским дзеркалом мікроскопа. Діафрагму відкривають повністю, і освітлювач піднімають до рівня столика мікроскопа. Краплю иммерсионного масла наносять на тонке місце мазка. Після виявлення в препараті еритроцитів регулюють висоту освітлювача і положення дзеркала.
B мазку крові плазмодії виявляються в еритроцитах (ріс.З), причому цитоплазма паразитів забарвлюється в блакитний або сірувато-синій колір, а ядро - в різні відтінки червоного кольору. B цитоплазмі плазмодія на стадії власне ши- парасольки з'являється пігмент - дрібні зернятка коричневого або темно-коричневого кольору. Для зручності вивчення зростаючих паразитів умовно поділяють на кілька вікових стадій.
Стадія кільця. Форма кільця утворюється через 2-3 год після впровадження в еритроцит плазмодія (мерозоїти). B МЕРО зоіте утворюється вакуоль, яка відсуває цитоплазму і ядро на периферію і паразит приймає кільцеподібну форму з вузьким обідком блакитний цитоплазми без пігменту і рубіново-червоним ядром.
Стадія власне шизонти. Поступово відбувається збільшення цитоплазми, в ній з'являються зернятка пігменту і плазмодій вступає в стадію власне шизонти. Розрізняють малі, середні та великі шизонти.
Стадія ділиться шизонта. Ha цій стадії відбувається послідовне поділ ядра на 2-4-8 частин до граничного числа, властивого кожному виду плазмодіїв. Потім паразит розпадається на відповідне число мерозоитов. Останні являють собою грудочки цитоплазми розміром близько 1,5 мкм, що містять ядро. Деяка частина мерозоїтів після впровадження в еритроцити розвивається в незрілі статеві клітини - гаметоцити, або гамонти, в цитоплазмі яких також відкладається пігмент. Вони служать джерелом зараження комарів роду Anopheles. B організмі комарів гаметоцити здійснюють свій подальший розвиток. Розрізняють чоловічі і жіночі гаметоцити, або мікрогаметоцити і макрогамето- ціти. Вони мають (за винятком P. falciparum) округлу форму і нагадують великі шизонти. У P. falciparum гаметоцити мають форму півмісяця. Для визначення виду малярійних плазмодіїв необхідно знати їх морфологічні особливості в мазках і товстих краплях.