Приблизно так вони зазвичай виглядають, коли їх завдадуть на скло, зафіксують і пофарбують біологи або медпрацівники:
Це нейтрофіли крові. Втім, як показали мої екзерсиси, щоб їх побачити, мазок крові не обов'язково фарбувати. Досить застосувати оптичні методи контрастування, і ось:
Десятімікронная лінійка дозволяє судити, якого приблизно розміру клітка на фотографії. Великий млинець - це нейтрофіл, більш дрібні плюшки - еритроцити.
Власне, зазвичай клітини на мазку крові просто вважають. Ми займалися тим, щоб вивчити подробиці - то, як вони влаштовані і як працюють. Ще ми намагалися спростити методи їх вивчення, зробити їх менш витратними. Наприклад, контрастування за допомогою оптичної системи дозволяє так само добре розрізняти клітини крові, як і їх фарбування:
1 і 2 - це еозінофіл, 3 і 4 - лімфоцит, 5 і 6 - знову нейтрофіл; всі вони є лейкоцитами - в буквальному перекладі, білими клітинами (парні фотки показують одну і ту ж, зауважте, індивідуальну клітку).
Живуть нейтрофіли в крові недовго, менше доби. Проте, вони служать першими захисниками від інфекції, в разі її вторгнення в організм. Коли поруч виявляється сторонній, чужорідний об'єкт, нейтрофіл спочатку наближається, розпізнає його, тобто переконується в його чужорідність ...
... і заковтує його.
На фотке бачимо лейкоцит, який зжер три клітини дріжджів з тих, що їй згодував експериментатор (я). На честь слова «жерти» процес назвали фагоцитозу (на заголовній фотке зображений той же процес). Дія на всіх фотках, зрозуміло, відбувається не в межах організму, а на предметному скельці.
Одноядерні клітини - лімфоцити (на фотке кульку праворуч) - підключаються до боротьби дещо пізніше - вірніше, їх захисний ефект виявляється більш віддаленим.
Вбивство мікроскопічних ворогів нейтрофіли виробляють різними способами. Для знищення у них є набір ферментів. Частина їх знаходиться в мембранних мішечках-гранулах. Мієлопероксидази - фермент гранул, який є у нейтрофілів і їх найближчих «родичів»; на фотографії він забарвлений в жовтий колір:
Тут нейтрофіл виглядає блідо і скромно, а ось інша клітина - Еозінофілли - прямо золотий мішок. Про еозинофіли можна прочитати на тому ж сайті, куди вели дві попередні посилання. Сайт освітній і, за моїми поняттями, досить непоганий.
НАДФ-оксидаза (або NADP-оксидаза) - інший фермент нейтрофілів. Вона не упаковується в гранули.
Вона бере участь в продукції активних форм кисню, що вбивають клітину-чужинця. На фотке зверху дві клітини: чорнильно-фіолетова наковталася дріжджів і вже встигла наплодити активних форм кисню (АФК). Клітка внизу цим не займається.
Це була ціла юрба лейкоцитів, в якій спостерігається активність продукції АФК.
Не завжди поглинання чужорідної клітини означає її знешкодження. При деяких умовах їх поглинається багато, але активність ферментів виявляється не дуже високою: «чорнильною» забарвлення тут буде майже не видно.
Якщо чужорідну частинку проковтнути з тих чи інших причин виявляється неможливо, нейтрофіл здатний вивільняти активні продукти в навколишній розчин:
Треба сказати, що забарвлення ферментів і продуктів їх активності на фотках - не натуральної природи. Для її отримання застосовувалися хімічні барвники. Взагалі біда з цими барвниками. Напевно в майбутньому дослідники, та й медики, перейдуть до вивчення нефарбованих живих клітин. Оптики посилено працюють над створенням спеціального обладнання. Я вже говорила про систему контрастування клітин за допомогою лінз. Ще раз пропоную переконатися, що цей метод працює так само успішно, як хімічне фарбування:
На фотках верхнього ряду - нейтрофіли, які були зроблені видимими за допомогою однієї лише оптики. Нижче - ті ж індивіди, але вже пофарбовані. Їх знаходила ваша покірна слуга під мікроскопом за допомогою координатного столика.
Для скептиків припасена фотка, забезпечена кольоровим профілем (3). Він відповідає лінії (2), відкладеної через пару еритроцитів, нейтрофіл і навколишній фон:
Видно, що область, яку займає нейтрофіл, більш синя, ніж решта малюнок.
Дуже корисна оптична візуалізація при вивченні поведінки живих клітин. Такий спосіб дозволяє уникнути перекручування природних реакцій клітини, неминучого при використанні хімічних барвників. Нижче показана фотосесія з лейкоцитів, який смикає ніжками в незвичній йому обстановці - можна сказати, вивчає навколишнє середовище. Такі ненаправлення руху називають хемокінез.
Направлений рух - хемотаксис - у мене в фотоархіві немає. Але зате багато фотозвітів про поглинання і перетравленні:
На фото вище видно, що активно переварювані дріжджі мають інший відтінок - в одному випадку світяться червоним (фарба - етідіум бромід), в іншому пофарбовані ближче до жовтого (живі-неушкоджені дріжджі забарвлюються зеленим; флуоресцентний барвник називається акридіновий помаранчевий). Активно переварювані дріжджі також, як правило, світяться яскравіше:
Нейтрофіли в кінці життя, в ідеалі, гинуть довільно. Велика кількість потенційно небезпечних речовин (не тільки для чужорідних мікроорганізмів, але і для організму, частиною якого є самі нейтрофіли) вимагає коректного видалення цих клітин. Програма такий «правильної» загибелі - апоптоз, вона обумовлена генетично. «Неправильна» загибель - некроз - може закінчитися пошкодженням тканин організму. Часто апоптоз нейтрофілів визначають за зовнішнім виглядом їх ядер, забарвлених на ДНК. Ось нормальна форма ядер:
А ось - характерний для процесів апоптозу:
Взагалі-то останнім часом припускають, що у нейтрофілів загибель - це зазвичай щось проміжне між некрозом і апоптозом. Та й апоптоз точніше визначають біохімічними методами. Тут - лише ілюстрації, в більшій чи меншій мірі приблизні.
Андрій, на фото показаний тест з нітротетразоліевим синім. НСТ-тест, модифікований мною :)) Дану клітку вже складно назвати кліткою, це скоріше її залишки. Точно так же офарблювалися препарати, зображені на попередніх чотирьох картинках.
Ссилочку на методику не дам, тому що методика все одно модифікована, точно таку ж Ви не знайдете. Можу надіслати Вам на мило шматок тієї роботи, де метод описаний. НСТ-тест як такої, думаю, у Вас вийде загугли без проблем.
Ви маєте рацію, було це давно. Та й біологією я вже давно не займаюся 🙂
Щодо ссилочку - ще раз: ссилочку немає, все виходило на папері. Якщо так вже сильно потрібно Вам побачити методику, я можу її пошукати в своїх лабораторних журналах і в папках на локальному компі. В такому випадку Вам доведеться почекати. Я зараз в роботі по вуха. Розгрібаючи трохи, потім пошукаю.
Вибачте, я невірно висловився про заслання. Я мав на увазі частину роботи, яку Ви можете надіслати на мило =))
P.S. Жодним чином не хочу Вас затримувати або відволікати від роботи, буду радий будь-якої інформації, за часом у мене не горить.
Добре, через тиждень-два покопатися і пришлю. Самою ж цікаво! :))) Я сумую з біології.
Щиро дякую за відповідь! З повагою Наталя Михайлівна Якщо знайдете, буду вам дуже вдячна!