Пряме виявлення патогенних мікробів у грунті проводять тільки при розслідуванні спалахів інфекційних захворювань. В якості непрямих показників можливого забруднення грунту патогенними бактеріями використовують санітарно-показові мікроорганізми: бактерії групи кишкової палички, Cl. perfringens. бактерії з роду Proteus. термофільні бактерії.
Наявність в грунті бактерій групи кишкової палички свідчить про її фекального забруднення. У загряз-наних ділянках грунту колі-титр становить 1 · 10 - 4. тоді як в чистих грунтах коли-титр може бути дорівнює 1 і вище. Виявлення Cl. perfringens в грунті також вказу-ет на її фекальне забруднення.
Методи визначення складу і активності ґрунтових мікроорганізмів.
Для оцінки діяльності грунтової біоти використовують показник біологічної активності грунту. Ґрунтова біота - це сукупність живих організмів, що населяють грунт. В їх число входять: бактерії, гриби, актиноміцети, водорості, мікроскопічні тварини, а також лишайники і зелена рослинність, що має в грунтах свою кореневу зону. Зазвичай, чим плодороднее грунт, тим більше в ній міститься живих організмів, і тим різноманітніше вони за видовим складом.
Біологічну активність грунту визначають наступним чином:
- підрахунком загальної кількості грунтових мікроорганізмів.
- визначенням кількості окремих фізіологічних груп мікроорганізмів, наприклад, нитрифицирующих або целлюлозоразлагающіе бактерій. Поява нитрифицирующих бактерій (нитрификаторов) вказує на розвиток процесу самоочищення, так як вони завершують цикл розкладання азотовмісних сполук, перетворюючи аміак в азот. При свіжому фекального забруднення нитрификаторов не буде, оскільки субстрат для їх розвитку відсутня. В ході життєдіяльності мікроорганізмів, що розкладають органічні речовини, утворюється аміак, що призводить до розвитку нитрификаторов.
- визначенням виділяється грунтом діоксиду вуглецю - біохімічний спосіб визначення біологічної активності грунту.
Чим інтенсивніше виділення вуглекислого газу з ґрунту, тим активніше відбуваються в ній біологічні процеси, тим краще умови для вирощування сільськогосподарських культур і вище їх потенційна врожайність.
Виділення вуглекислого газу з ґрунту в приземний шар атмосфери називають диханням ґрунту. Інтенсивність дихання ґрунту залежить від її властивостей, гідротермічних умов, характеру рослинності, агротехнічних заходів. Виділення діоксиду вуглецю ґрунтом посилюється при її окультуреності в зв'язку з активізацією біологічних процесів і поліпшенням умов аерації. Зменшення виділення вуглекислого газу ґрунтом (зниження біологічної активності) може погіршити надходження кисню в грунт, що, в свою чергу, буде сприяти утворенню токсичних речовин.
Відбір проб проводять з квадратного ділянки (не менше 5x5 м) з 5 точок - з кожного кута і центру квадрата ( «метод конверта»). Зразки забирають в умовах асептики з глибини 20-30 см. Обсяг зразків 1 кг.
Періодичність контролю. Періодичність контролю залежить від контрольованих об'єктів, але не рідше 1 разу на рік. При вивченні динаміки самоочищення грунту на забруднених територіях проби беруть у протягом першого місяця після забруднення щотижня, в наступні місяці - 1 раз на місяць протягом вегетаційного періоду до завершення активної фази самоочищення.
Санітарна оцінка води за мікробіологічними показниками
Серед об'єктів, які підлягають мікробіологічному контролю, найважливіше місце відводиться дослідженню води.
Відповідно до чинних нормативних документів контролю підлягають:
вода питна (центрального і місцевого водопостачання);
вода плавальних басейнів;
вода відкритих водойм;
вода для приготування ін'єкційних розчинів і очних крапель.
Попереджувальний нагляд здійснюють при:
вирішенні питань водопостачання і каналізації населених територій;
санітарної оцінці басейнів, пляжів, місць колективного відпочинку.
Поточний санітарний нагляд здійснюють при:
оцінці якості питного водопостачання населених місць;
оцінці санітарного стану поверхневих вод для встановлення ступеня впливу біологічного забруднення на здатність води до самоочищення;
контролі над знезараженням стічних вод;
виявленні санітарно-показових і патогенних мікроорганізмів за епідемічними показаннями для виявлення можливого шляху передачі інфекційних захворювань.
Відбір проб. Для відбору проб питної води використовують стерильні флакони ємністю 500 мл. Попередньо проводять випалювання водопровідних кранів полум'ям і пропускають воду протягом 10-15 хв при повністю відкритому крані.
Проби води з басейнів в ході їх експлуатації відбирають не менше ніж у двох точках з 25-30 см від поверхні в кількості одного літра.
Методика дослідження. Загальне мікробне число (загальна кількість бактерій в 1 см3 води) дозволяє оцінити рівень мікробного забруднення води. Досліджувану воду вносять по 1 мл в стерильні чашки Петрі з живильним середовищем і підраховують число вирослих колоній. Даний показник обчислюють шляхом підсумовування середнього арифметичного числа бактерій, дріжджів і цвілевих грибів і висловлюють в КУО / мл.
Визначення коліформних бактерій. Коліформні бактерії - це грамнегативні неспорообразующие палички, що не володіють оксидазної активністю і зброджують лактозу з утворенням кислоти і газу при 37 ° С протягом 24-48 годин. Термотолерантні коліформні бактерії зброджують лактозу з утворенням газу при 44,5 оС протягом 24 годин. Термотолерантні коліформні бактерії швидко відмирають у зовнішньому середовищі, тому їх виявлення свідчить про свіжому фекального забруднення води.
Для визначення коліформних бактерій у питній воді використовують метод мембранних фільтрів. Досліджувану воду (3 проби по 100 мл) пропускають через бактеріальні фільтри з нітроцелюлози, які потім поміщають на середовище Ендо і інкубують при 37 ° С 24 години. Підраховують кількість вирослих лактозопозитивних колоній.
Визначення колі-фагів (бактеріофагів E. coli). Наявність фагів бактерій групи кишкових паличок є непрямим показником можливої присутності ентеровірусів в досліджуваній пробі води. Коли-фаги викликають лізис E. сoli, що можна спостерігати за освітою зон лізису (бляшок) на посіві бактеріальної культури. Досліджувану пробу води (100 мл) нагрівають до 35-44 ° С і розливають по 20 мл у стерильні чашки Петрі. Потім в кожну чашку заливають по 20 мл засіяного культурою E. сoli поживного агару і акуратно перемішують. Через 18 годин інкубації підраховують і підсумовують все бляшки, що утворилися на чашках Петрі. Таким чином, отримують кількість бляшкообразующіх одиниць (БОЮ) в 100 мл води.
Санітарна оцінка повітря за мікробіологічними показниками
Санітарно-мікробіологічні показники повітря нормуються в залежності від типу і призначення приміщення.
Дослідження повітря на наявність мікроорганізмів здійснюють седиментаційним або фільтраційними методами.
Новий метод Коха заснований на спонтанному осіданні бактеріальних частинок і крапель під дією сили тяжіння на поверхню живильного середовища відкритої чашки Петрі. При цьому читається, що відповідно до формули В.Л.Омелянского на поверхню щільного поживного середовища в чашці Петрі площею 100 см 2 за 10 хвилин осідає таку кількість бактерій, яке міститься в 10 л повітря.
При фільтраційних методах відбір проб повітря здійснюється за допомогою різних приладів і апаратів. Зокрема при використанні апарату Кротова відбір проб повітря (по 100 л) проводиться над двома чашками Петрі з м'ясо-пептони агаром. Посіви культивують 48 годин при 37 о С. Після інкубації підраховують число колоній на живильному середовищі і обчислюють кількість бактерій в досліджуваному повітрі.
Основні показники санітарного стану повітря:
ОМЧ повітря - кількість колонієутворюючих одиниць в 1 м 3 повітря;
присутність золотистого стафілокока, α- і β- гемолітичних стрептококів;
присутність дріжджоподібних і пліснявих грибів;
присутність патогенних мікроорганізмів.
В повітрі особливо чистих приміщень лікувальних установ (операційних, пологових залів, боксів для опікових хворих і недоношених дітей і т.п.) загальна кількість мікроорганізмів в 1 м 3 повітря не повинно перевищувати 200 КУО. Золотистий стафілокок, α- і β- гемолітичний стрептокок, дріжджоподібні та плісняві гриби повинні бути відсутніми.
Знезараження повітря закритих приміщень проводять різними способами: УФЛ-аероіонізатор, вентиляцією.
Контрольні питання по темі заняття:
1. Поширення мікробів в природі.
2. Мікрофлора грунту.
3. Мікрофлора води.
4. Мікрофлора повітря.
5. Поняття про санітарно-показових мікроорганізмів.
6. Методи визначення санітарно-показових мікроорганізмів.
Література для підготовки до заняття: