Тема: Лабораторна діагностика інфекцій, викликаних анаеробними збудниками (клостридії газової гангрени, правця, ботулізму, бактероїди).
Мета: На основі знань біології спороутворюючих і неспороутворюючих анаеробних бактерій, особливостей їх взаємодії з макроорганизмом, вміти обгрунтувати тактику мікробіологічної діагностики, профілактику і терапію, що викликаються ними захворювань.
1. Особливості біології спороутворюючих і неспороутворюючих анаеробних бактерій, що визначають їх роль в інфекційній патології людини.
2. Екологію спороутворюючих і неспороутворюючих анаеробних бактерій, особливості епідеміології, патогенезу та імунітету, що викликаються ними захворювань.
3. Матеріал і методи мікробіологічної діагностики захворювань, що викликаються спороутворюючими і неспороутворюючих анаеробними бактеріями.
4. Профілактику та терапію захворювань, що викликаються спороутворюючими і неспороутворюючих анаеробними бактеріями.
1. Враховувати і оцінювати результати мікроскопії досліджуваного матеріалу при підозрі на інфекцію, викликану спороутворюючими і неспороутворюючих анаеробними бактеріями.
2. Враховувати і оцінювати результати посіву досліджуваного матеріалу на живильні середовища з метою виділення і культивування спороутворюючих і неспороутворюючих анаеробних бактерій (тиогликолевая среда, Китта-Тароцці і ін.).
3. Проводити ідентифікацію досліджуваної культури з урахуванням морфотінкторіальних (метод Грама), біохімічних ( «строкатий ряд»), токсигенних (реакція нейтралізації) властивостей.
1. Класифікація і морфобіологічні властивості спороутворюючих анаеробних бактерій - клостридій анаеробної газової гангрени, правця, ботулізму.
2. Класифікація і морфобіологічні властивості неспороутворюючих анаеробних бактерій - бактероїди, превотелли, порфіромонади, фузобактерии.
3. Ведучий фактор вірулентності патогенних клостридій і метод його визначення.
4. Фактори вірулентності неспорообразующих анаеробних бактерій і механізм їх дії.
5. Особливості екології, епідеміології і патогенезу анаеробної газової гангрени, правця, ботулізму.
6. Особливості екології, епідеміології і патогенезу інфекцій, що викликаються неспороутворюючими анаеробними бактеріями.
7. Матеріали і методи мікробіологічної діагностики захворювань, що викликаються спороутворюючими і неспороутворюючих анаеробними бактеріями.
8. Прискорена мікробіологічна діагностика анаеробної газової гангрени.
9. Прискорена і експрес-діагностика захворювань, що викликаються спороутворюючими і неспороутворюючих анаеробними бактеріями.
10. Специфічна профілактика і терапія анаеробної газової гангрени, правця, ботулізму.
11. Профілактика і терапія захворювань, викликаних неспороутворюючими анаеробними бактеріями.
Завдання, що виконуються в ході заняття (УИРС):
1. Провести мікробіологічне дослідження біоптату (аутоптата) з глибини рани хворого з підозрою на анаеробну газову гангрену з метою встановлення етіології захворювання:
1.1. Промікроскопувати препарат з біоптату, пофарбований за Грамом. Зробити висновок.
1.2. Врахувати і оцінити результати посіву биоптата в середу Вільсона-Блера і молоко з метою прискореної діагностики. Зробити висновок.
1.3. Провести бактеріологічне дослідження по виділенню передбачуваного збудника:
- вивчити посів досліджуваного матеріалу в тіогліколевую середу (візуально, метод Грама);
- врахувати і оцінити результати посіву виділеної культури на «строкатий ряд»;
- оцінити результати розгорнутої реакції нейтралізації (РН) на білих мишах центрифугата культуральної рідини досліджуваної культури з протигангренозну антитоксическими сироватками.
За результатами сформулювати остаточну відповідь. Заповнити бланк-направлення та бланк-відповідь з бак. лабораторії.
2. мікроскопувати препарат з чистої культури, виділеної при підозрі на правець, пофарбований за Грамом. Зробити висновок.
3. Врахувати і оцінити результати розгорнутої РН на білих мишах центрифугата блювотних мас і промивних вод шлунка обстежуваного з клінічним діагнозом «харчова токсикоінфекція. Ботулізм? »
4. мікроскопувати препарат з біоптату флегмони стопи, пофарбований за Грамом. Зробити висновок.
5. Ознайомитися із середовищами, методами і приладами для створення анаеробіозу.
6. Біопрепарати: протигангренозну і протівоботуліністіческіе сироватки діагностичні та лікувально-профілактичні, протиправцева сироватка; АКДС, АДС, АДС-М.
Методичні вказівки до виконання дослідницького завдання:
I. Проведіть мікробіологічне дослідження біоптату (аутоптата) з глибини рани хворого з підозрою на анаеробну газову гангрену, для чого:
1.1. Промікроскопіруйте препарат з біоптату, пофарбований за Грамом. Зробіть висновок.
З огляду на швидкий розвиток клініки газової гангрени і залежність результату захворювання від своєчасності і цілеспрямованості специфічного (імунотерапія) і неспецифічного лікування, важливо використовувати прискорені методи діагностики.
До числа прискорених методів мікробіологічної діагностики відноситься мікроскопічне дослідження мазків-відбитків отриманих біоптатів. Клостридії - великі (0,4-1,2х3-10 мкм) грампозитивні палички, не утворюють капсули, за винятком C. perfringens. Виявлення характерних мікроорганізмів дозволяє дати орієнтовний відповідь про присутність в досліджуваному біоптаті C. perfringens (капсульні бацили) або інших клостридій.
1.2. Врахуйте результати посіву биоптата в середу Вільсона-Блера і молоко. Зробіть висновок.
Посів на середовища Вільсона-Блера і молоко дозволяє отримати орієнтовний відповідь про наявність C. perfringens - основного збудника анаеробної газової гангрени вже через 2-6 год культивування. На середовищі Вільсона-Блера відзначають почорніння середовища, на середовищі з молоком утворюється губкообразний згусток, пронизаний бульбашками газу ( «штормова реакція»). Решта клостридії також змінюють середу Вільсона-Блера (почорніння і утворення газу у газообразователей) і молоко (пептонізіруют, як C. histolyticum. Або згортають), але відбувається це повільніше в порівнянні з C. perfringens.
1.3. Проведіть бактеріологічне дослідження по виділенню та ідентифікації передбачуваного збудника з метою встановлення етіології захворювання.
На 1 етапі. крім вищевказаних досліджень, проводять посів досліджуваного матеріалу на середу для контролю стерильності (СКС) або яке-небудь середовище для виділення анаеробів (анаеробний кров'яний агар, середа Китта-Тароцці і т. д.).
На 2 етапі вивчіть і оцініть результати посіву досліджуваного матеріалу на СКС візуально і на підставі мікроскопії препаратів, пофарбованих по Граму, зробіть висновок.
На середовищі СКС клостридії викликають помутніння і газоутворення. При мікроскопії виявляють великі грампозитивні палички, що утворюють спори, що перевищують діаметр клітини і займають субтермінально або центральне розташування. У разі отримання накопичувальної культури, відповідної характеристиці клостридий, здійснюється її посів на щільне ПС з метою отримання ізольованих колоній. Чашки інкубують в анаеробних умовах.
На 3 етапі характерні колонії відсіваються на відповідні поживні середовища для виділення та накопичення чистої культури.
На 4 етапі отриманий чистий культура підлягає ідентифікації. Вкажіть в протоколі властивості і методи, що дозволяють визначити видову приналежність.
На 5 етапі врахуйте результати досліджень, розпочаті на 4 етапі по ідентифікації виділеної культури передбачуваного збудника, для чого:
- врахуйте результати посіву культури на «строкатий ряд»; для оцінки результатів використовуйте таблицю 1;
Основні властивості збудників газової гангрени, правця, ботулізму
Для визначення токсигенності культури шляхом постановки РН суміш центрифугата досліджуваної культури з антитоксическими сироватками вводять підшкірно білим мишам. У разі нейтралізації токсину тварини залишаються живими; при негативній РН - тварини гинуть.
На підставі отриманих результатів визначте видову приналежність виділеної культури, занесіть результати в протокол, заповніть бланк-направлення та бланк-відповідь з бак. лабораторії.