Підготовка до стерилізації лабораторного посуду
1. Перед стерилізацією лабораторний посуд ретельно миють і сушать.
2. Пробірки, флакони, пляшки, матраци, колби закривають ватно-марлевими пробками.
Поверх пробки на кожній посудині (крім пробірок) надягають паперовий ковпачок.
3. Чашки Петрі стерилізують загорнутими в папір по 1 5 штук або в пеналах.
4. Пастерівські піпетки по 3-5-10-15 штук загортають в щільну обгортковий папір. У верхню частину кожної піпетки вкладають шматочок вати. Під час роботи піпетки з пакета виймають за верхній кінець.
Лабораторний посуд стерилізують:
а) сухим жаром при температурі 150, 160 і 180 ° С відповідно 2 години, 1 годину і 30 хвилин.
б) в автоклаві при тиску 1 атм. протягом 20-30 хвилин.
Стерилізація металевих інструментів
Ножиці, скальпелі, пінцети та ін. Стерилізують в 2% содовому розчині (сода попереджає поява іржі і втрату гостроти). Леза скальпелів і ножиць перед зануренням у воду рекомендується обгортати ватою.
Стерилізація рукавичок та інших гумових виробів
Рукавички, шланги, трубки та інші, забруднені вегетативною формою мікробів, стерилізують кип'ятінням в 2% розчині соди або текучою парою 30 хвилин; при забрудненні спороносной патогенною мікрофлорою - в автоклаві при тиску 1 атм. протягом 30 хвилин.
Приготування дезрастворов групи хлору
1. Вапно має високий бактеріальним дією. Її використовують в мікробіологічній практиці у вигляді порошку, 10-20% хлорно-вапняного молока і 0,2-10% освітленого розчину.
2. Схема приготування хлорно-вапняного молока.
Концентрація хлорно-нзвсстко-вого молока (в%)
Кількість хлорного вапна в грамах на 10 л води при вмісті в ній активного хлору (в%)
3. Хлорамін - містить 25-26,5% активного хлору.
У мікробіологічних лабораторіях користуються 0,2 10% розчинами хлораміну.
Концентрація розчину (в%)
Кількість хлораміну в 1 г на:
Приготування маточного розчину хлорного вапна
1. Взяти ємність (скляні бутилі темного скла з притертою пробкою, емальований або скляний посуд) і помістити в неї 1 кг сухого хлорного вапна, після чого, продовжуючи помішувати, додати поступово невелику кількість води до отримання кашкоподібної маси. І потім, перемішуючи, додати воду до об'єму 10 літрів, т. Е. Для приготування 10% розчину хлорного вапна необхідно взяти: 1 кг сухого хлорного вапна + 9 літрів води = = 10 літрам розчину.
2. Свіжоприготовані розчини залишають на 24 години в прохолодному темному приміщенні в закритому посуді. Через 24 години обережно, не збовтуючи осаду, зливають освітлений розчин в іншу ємність (скляні ємності темного кольору, емальований або пластмасовий посуд) для зберігання до 10 днів.
3. При приготуванні маточного розчину на ємності (на етикетці, яка кріпиться на ній) вказується дата приготування, концентрація розчину, посаду, прізвище особи, приготував розчин.
Увага! Використання оцинкованого посуду заборонено. Дезрозчини групи фенолу
1. Карболова кислота. Рідка карболова кислота містить 90% кристалічного фенолу і 10% води. У мікробіологічних лабораторіях використовують 3-5% розчини карболової кислоти.
Схема приготування розчинів карболової кислоти
2. Хромова суміш. Пропис приготування:
В колбу наливають 150 мл концентрованої сірчаної кислоти, туди ж всипають 25 г двухромовокислого калію. Отриману суміш залишають стояти до розчинення. Через добу розчин темно-оранжевого кольору може бути застосований для миття посуду. Перед вживанням суміш треба підігріти до 45-50 ° С. Якщо колір суміші змінюється на темно-зелений, це говорить про її непридатність.
Виділення бактеріофага з патологічного матеріалу
Досліджувану рідину фільтрують від мікробів.
Твердий досліджуваний матеріал (грунт, харчові продукти, оформлені випорожнення) подрібнюють в ступці, емульгують, фільтрують. Наявність фага в отриманому фільтраті визначають в рідких поживних середовищах або на щільних середовищах за методом Отто або Граціа.
Виявлення бактеріофага на щільних поживних середовищах за методом Отто
1,5% МПА розливають в чашки Петрі (більш висока концентрація агару пригнічує розвиток колоній бактеріофага). Після застигання МПА засівають 16-18-годинний бульонной культурою бактерій, гомологічних шуканого фагу. Для отримання суцільного зростання посів розтирають шпателем. Через 5-10 хв після посіву на підсушену поверхню краплями наносять досліджуваний фільтрат. Чашки ставлять в термостат на 18-24 години при температурі 37 ° С.
Немає результатів: доказом наявності бактеріофага служить повна відсутність зростання культури в місці попадання краплі фільтрату (активний бактеріофаг) або поява в цьому місці дрібних стерильних плям-колоній бактеріофага (бактеріофаг слабкої активності).
Техніка фаготшшрованія мікробів за методом Креджі і Єнсена
В основу фаготипирования покладено принцип спільного вирощування тіпіруемой культури з типовим бактериофагом. Наступ лізису визначає типову приналежність бактерій. Для фаготипирования бактерій застосовують 1,5% МПА з 5% гліцерину. Пророщену бульонную культуру краплями наносять на поверхню живильного середовища. Краплі не повинні розтікатися. Вони повинні вбратися протягом 3-10 хв.
Потім на поверхню кожної краплі наносять по 1 краплі типового фага з таким розрахунком, щоб частина культури залишалася вільною від впливу бактеріофага (для контролю росту культури). Чашки поміщають в термостат при температурі 37 ° С: через 6-8 годин виконують облік результатів фаготипирования.
Наявність добре вираженого лізису досліджуваної культури з одним з типових фагів вказує на приналежність культури до даного фаготип.
Додаток 7.4 (обов'язковий)
Засоби і методи дезінфекції, що використовуються при роботі з мікроорганізмами III-IV груп патогенності
I. Бактерії, що не утворюють спор
0,5%, 1%, 2%, 3% -е (по препарату) розчини.
0,5%, 1%, 2% -е (по препарату) освітлені розчини;
10% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені розчини;
20% -й (по препарату) хлорно-вапняне молоко.
0,5%, 1%, 2% -е (по препарату) освітлені розчини;
10% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені розчини.
0,15% -й (за активним хлором) розчин;
0,25%, 0,5%, 1% -е (за активним хлором) прояснені розчини;
5% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені розчини.
1%, 1,5% -е (по препарату) освітлені розчини;
5% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені розчини.
0,25%, 0,5%, 1% -е (по препарату) освітлені розчини;
5% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені розчини.
1% -й (по препарату) освітлений розчин;
5% -е (по препарату) освітлені і неосвітлені розчини.
1% -й (за активним хлором) розчин.
9. Гіпохлорит натрію, одержуваний методом електролізу кухонної солі на установках, дозволених до виробництва і застосування 0,125%, 0,25% -е (за активним хлором) розчини.
10. анолітов, одержувані на установках, дозволених до виробництва і застосування:
2%, 5% -е (по препарату) розчини.
1%, 2% -е (по препарату) розчини.
3% -й (по ДВ) розчин перекису водню;
3% -й (по ДВ) розчин перекису водню з 0,5% миючого засобу ( «Прогрес», «Новина», «Астра», «Лотос»);
6% -й (по ДВ) розчин перекису водню.
0,5%, 0,75%, 2% -е (по перекису водню) розчини.
3% -й (по перекису водню) розчин.
3%, 6%, 7%, 9% -е (по препарату) розчини.
1% -й (за препаратом) розчин.
19. Демос (містить комплекс катіонних і ін. ПАР):
5%, 10% -е (по препарату) розчини.
1% -й (за препаратом) розчин.
0,5-1% -е (по ДВ) розчини.
0,5%, 2% -е (по препарату) розчини.
5% -й (за препаратом) розчин.
0,5%, 2% -е (по препарату) розчини.
10% -й (за препаратом) розчин.
26. Аламінол (містить катамін АБ, гліоксаль і ін.):
1% -й (за препаратом) розчин.
27. Біанол (містить глутаровий альдегід, гліоксаль і ка-Таміно АБ):
1,5% -й (за препаратом) розчин.
готове до застосування засіб.
3%, 10%, 20%, 40% -е (по формальдегіду) водні розчини.
30. Аміак 25% (по ДВ) водний розчин.
Для нейтралізації формальдегіду застосовується співвідношення 1: 1.
31.Діхлор-1, Білка, Блиск, Блиск-2, Саніта, Дезус і ін. Побутові чистяще-дезінфікуючі засоби: пасти, порошки та ін. Форми.
2% -й розчин харчової соди;
2% -й розчин кальцинованої соди.
33. Обробка водяним насиченим паром під тиском (автоклавування).
34. Етиловий спирт 70%, 96% -е, суміш Нікіфорова.
35. Обробка гарячим повітрям - 180 ° С.
38. Обробка в дезінфекційних камерах: пароповітряний, пароформаліновою методи.
39. Аерозольний метод знезараження.
40. Газовий метод (дезінфекція парами формальдегіду).
41. Ультрафіолетове опромінення.
5% -й (за препаратом) розчин;
0,5% і 1% -е (за активним хлором) активовані розчини.
2-10% -е (по препарату) розчини;
20% -й (по препарату) хлорно-вапняне молоко;
0,25 0,5% -е (за активним хлором) активовані розчини.
2-10% -е (по препарату) розчини;
0,25-0,5% -е (за активним хлором) активовані розчини.
20% -ве хлорно-вапняне молоко;
1% -й (за препаратом) розчин.
1%, 5% -й (за активним хлором) розчин.
2% -й (за препаратом) розчин.
8. Гіпохлорит натрію, одержуваний методом електролізу на установках, дозволених до виробництва і застосування:
0,25%, 0,5% -е (за активним хлором) розчини.
10% -й (за препаратом) розчин.
0,5% -й (за препаратом) розчин.
0,25%, 0,5%, 1% -е (по НУК) розчини.
3 і 4% -е (по ПВ) розчини.
2,5% -й (по ПВ) розчин.
0,5% -й (за препаратом) розчин.
готове до застосування засіб.
19. Аламінол (містить катамін АБ, гліоксаль і ін.):
1% -й (за препаратом) розчин.
20. Біанол (містить глутаровий альдегід, гліоксаль і катамін АБ):
1,5% -й (за препаратом) розчин.
2% -й розчин харчової соди;
2% -й розчин кальцинованої соди.
22. Обробка водяним насиченим паром.
23. Обробка гарячим повітрям - 180 ° С.
26. Обробка в дезінфекційних камерах: пароповітряний, пароформаліновою методи.
27. Ультрафіолетове опромінення.
Ш. Бактерії, що утворюють спори
1-4% -е активовані розчини, які містять 0,25 1% АХ.
20% -й освітлений і неосвітлений розчин, що містить не менше 5% АХ;
4% -й освітлений активований розчин, що містить не менше 1% АХ.
15% -й освітлений розчин, що містить не менше 5% АХ;
2% -й освітлений активований розчин, що містить не менше 1% АХ.
15% -й освітлений розчин, що містить не менше 5% АХ;
2% -й освітлений активований розчин, що містить не менше 1% АХ.
4% -й активований розчин, що містить не менше 1,2% АХ.
10% -й розчин (70 ° С).
7. Пергідроль, що містить 30-35% перекису водню (ПВ):
6% -й розчин ПВ з 0,5% миючого засобу ( «Прогрес», «Новина», «Астра», «Лотос»);
3% -й розчин ПВ з 0,5% миючого засобу при температурі розчину 50 ° С.
розчин, що містить 4% ПВ при температурі 20 ° С; розчин, що містить 3% ПВ при температурі 50 ° С.
3% -й (по ПВ) розчин при температурі 20 і 50 ° С;
6% -й (по ПВ) розчин.
20%, 40% -е (по формальдегіду) водні розчини;
0, 2% -й розчин формальдегіду з 0,2% мила або ОП-10 при температурі 60 ° С.
15. Сухе гаряче повітря.
16. Обробка паром під тиском.
17. Всі ємності, в яких проводиться знезараження, повинні бути закриті кришкою.
18. Обробка в камерах: пароповітряний і пароформалі-1 новий методи.
19. Аерозольний метод знезараження.
ПИТАННЯ для самоконтролю
Які фізичні фактори впливають на клітину? Що таке «антисептика» і «асептика». Які ви знаєте «антисептики». Що таке «симбіоз», «метабіозу» і «антагонізм». Що таке «стерилізація»? Назвіть фізичні методи «стерилізації». Де застосовується хімічна і механічна стерилізація?
Що таке «бактеріофаг». Структура і морфологія фагів. Як використовуються фаги в медицині?