Прямий базофільний тест по shelly (1962), лабораторні тести для діагностики алергії негайного

Устаткування і реактиви: термостат, центрифуга на 3000 об / хв, мікроскоп бінокулярний, гепарин, 0,3% розчин фарби «нейтральний червоний», вазелін хімічно чистий, стерильні пастерівські піпетки, пробірки, предметні і покривні скла.

Приготування і забарвлення предметних стекол. Для приготування 0,3% спиртового розчину фарби «нейтральний червоний» 300 г барвника змішується з 100 мл абсолютного спирту. Для кращого розчинення суміш поміщається в термостат при 37 ° С на добу, періодично помішує, потім фільтрується через фільтрувальну папір. Для знежирення предметні скельця містяться в суміші Нікіфорова (спирт і ефір 1: 1). Забарвлення стекол проводиться до реакції: на знежирене предметне скло наносять краплю барвника, висушують при кімнатній температурі. Пофарбовані скла можуть зберігатися протягом декількох місяців.

Техніка реакції. На попередньо знежирене і забарвлене 0,3% спиртовим розчином «нейтрального червоного» предметне скло наносять 0,05 мл лейкоцитарної суспензії хворого і 0,05 мл алергену, перемішують і покривають покривним склом, краю-якого змазані вазеліном; залишки суспензії промокають. Паралельно готується 2 контрольних мазка: 1-й з алергеном, до якого у хворого немає підвищеної чутливості, 2-й-з тест-контрольної рідиною, на якій готується алерген. Досвідчений препарат і контрольні поміщають в термостат при 37 ° С на 15 хвилин; потім під иммерсионной системою мікроскопа (при збільшенні 600) підраховується 40 базофілів в кожному препараті і відзначають серед них кількість морфологічно змінених і дегранулірованних клітин.

Оцінка реакції. Тест вважається позитивним, якщо відсоток змінених базофілів в досвіді перевищує такий в контролі більш ніж на 10%. При цьому реакція вважається слабоположительной, якщо відсоток дегранулірованних клітин становить 11 - 15%, помірно позитивної (+ +) - якщо він перевищує контрольний на 16-20% і різко позитивною (+ + +) - при дегрануляції базофілів в досвіді вище контрольного більш ніж на 20%. Число дегранулірованних клітин в контролі не повинно бути більше 1-2 (3-5%).