Це універсальна реакція служить еталоном при оцінці інших серологічних реакцій.
Принцип її полягає в тому, що при взаємодії антигену (вірусу) з гомологічними антитілами утворюється комплекс антиген + антитіло, в результаті нейтралізується інфекційність вірусу. Індикатором вільного (не пов'язані з антитілами) вірусу є чутлива до вірусу жива система: тварини, курячі ембріони або культура клітин.
При постановці реакції в пробірці змішують рівні об'єми вірусу і сироватки, суміш витримують при відповідній температурі (4, 22 або 37 ° С) протягом однієї години або 16-18 год (залежить від вірусу і умов досвіду). Потім цією сумішшю заражають чутливу до вірусу живу систему, спостерігають за станом живих об'єктів і через відповідний термін (в залежності від вірусу) враховують результат нейтралізації вірусу по відсутності:
1) загибелі, розвитку клінічної картини хвороби і патологічних змін в органах і тканинах лабораторних тварин;
2) загибелі, патологічних змін в оболонках, тканинах зародка і відсутності гемагглютининов в рідинах порожнин курячих ембріонах;
3) цитопатичної дії (ЦПД) або бляшкоутворення в культурі клітин.
Сироватки, що використовуються в PH, повинні бути попередньо звільнені від термолабільних неспецифічних інгібіторів шляхом прогрівання. Як чутливу систему, так і метод її зараження підбирають з урахуванням найкращої можливості культивування даного вірусу.
Так як для нейтралізації певної кількості вірусу потрібна певна кількість антитіл, а один з цих компонентів все ще невідомий, то PH можна ставити в двох варіантах:
1) до різних доз (разведениям) сироватки (зазвичай у вигляді послідовних 2-кратних розведень) додають однакові дози вірусу (зазвичай 100-1000 ЕД50). У цьому варіанті визначають титр віруснейтралізуючих антитіл в сироватці, показником якого є розведення сироватки, що захищає від дії вірусу 50% заражених біологічних систем;
2) до різних доз (разведениям) вірусу (зазвичай у вигляді послідовних 10-кратних розведень) додають однакові дози сироватки (зазвичай в розведеннях 1. 10 або 1. 20). При постановці даного варіанту PH крім досліджуваної (або специфічної) сироватки використовують і нормальну (негативну) сироватку. У цьому випадку визначають індекс нейтралізації (IN), який показує, у скільки разів імунна (специфічна) або досліджувана сироватка знижує титр вірусу в порівнянні е нормальної сироваткою.
Необхідно пам'ятати, що будь-яка серологічна реакція (в тому числі і PH) повинна супроводжуватися контролями на кожен компонент, що бере участь в реакції.
PH дозволяє вирішити наступні діагностичні завдання:
виявити і визначити титр віруснейтралізуючих антитіл за допомогою відомого вірусу;
ідентифікувати невідомий (виділений) вірус шляхом дослідження його з різними свідомо відомими сироватками (антитілами).
Перевагами PH є її універсальність і висока специфічність; недоліки - велика трудомісткість; необхідність суворо дотримуватися стерильність матеріалів, посуду та інструментів; висока вартість живих біологічних систем; відносна тривалість біопроби і необхідність проведення математичних розрахунків.
Поділіться посиланням з друзями