Ферменти генної інженерії
рестріктази
Рестріктази (рестріцірующіе ендонуклеази, ендонуклеази рестрикції) - це ферменти, які дізналися і атакуючі певні послідовності нуклеотидів в молекулі ДНК (сайти рестрикції).
Ще в 1953 році було виявлено, що ДНК певного штаму E. coli, введена в клітини іншого штаму (наприклад, ДНК штаму В - в клітини штаму С) не проявляє, як правило, генетичної активності, так як швидко розщеплюється на дрібні фрагменти.
У 1966 році було показано, що це явище пов'язане зі специфічною модифікацією хазяйської ДНК - вона містить кілька метилованих підстав, відсутніх в немодифікованої ДНК, причому метилювання (додавання до основи метильної групи) відбувається вже після завершення реплікації. Бактерія здатна відрізнити свою власну ДНК від будь-вторгающейся «чужорідної» саме за типом її модифікації. За «мітку» відповідають метіліруется ферменти модифікації, так звані ДНК-метилаза. Різниця в модифікації робить чужорідну ДНК чутливою до дії рестріцірующіх ферментів, які дізнаються відсутність метильних груп у відповідних сайтах.
Системи рестрикції і модифікації широко поширені у бактерій; їх існування грає важливу роль в захисті резидентної ДНК від забруднення послідовностями чужорідного походження.
Рестріктаза, яка розщеплювала неметілірованную ДНК була виділена в 1968 р Мезельсоном і Юанем. Цей фермент був високоспеціфічен по відношенню до певної послідовності ДНК, але розщеплював молекули неспецифически, в іншому місці, на деякому віддаленні від ділянки впізнавання. Незабаром, в 1970 р Сміт і Вількокс виділили з Haemophilus influenzae першу рестріктази, яка розщеплювала строго певну послідовність ДНК (Hind III). Оскільки різні бактерії по-різному мітять свою ДНК, то і рестріктази повинні дізнаватися різні послідовності. І дійсно, з тих пір виділені рестріктази, які дізналися більше 150 сайтів рестрикції (місць розщеплення ДНК).
Інші розділи: