В.В. Пругло, к.в.н. Керівник відділу технічного сервісу ТОВ «Сева СА», Росія
С.В. Палазюк, к.в.н. Головний державний інспектор ветеринарної лікар ТОВ «ПсковАгроІнвест»
А.Н. Гречухін, к.в.н, Член експертно-консультаційної ради при НСС
Практичні лікарі свинарських господарств часто стикаються з процедурою відбору зразків крові від свиней для проведення лабораторної діагностики. На жаль, практика показує, що найчастіше в свинарських господарствах не всі фахівці володіють цією процедурою і часом зазнають труднощів при необхідності її практичної реалізації.
В огляді розглядаються декілька методик взяття зразків крові від свінейразлічних вікових груп, легко освоюваних і реалізованих на практиці.
1. Необхідний інструментарій:
1. Голки (залежать від віку / розміру):
· До 10 кг ЖМ: 25-20G 16/25 мм;
· До 45 кг ЖМ: 18G 38 мм;
· До 100 кг ЖМ: 18G 38 мм
· Свиноматки / кнури: 16G 100 мм
2. Шприци: 2, 10, 30 мл або Вакуумні пробірки: 7-10 мл
3. Етиловий спирт, ватні тампони, скальпель, петля / мотузка для фіксації,
4. Два людини (з мізками і руками)
2. Вибір місця відбору та методики
3. Методики
3.1. Методика взяття крові з вушних вен
Крайні вушні вени, одні з небагатьох вен, легко виявляються у свиней будь-якого віку і розміру. Як правило, видно три вени. Зазвичай найбільш великими є - латеральна (бічна) або центральна вени. Вушні вени являють собою відгалуження каудальной вушної і поверхневої шийної вени. Їх рельєф, анастомози і відносні розміри варіюють від тварини до тварини.
Взяття крові з вени вуха.
Малюнок 1
На малюнку 1 - порося, вагою близько 7 кг. Асистент фіксує тварина, одночасно затискаючи вену біля основи вуха. Фото ілюструє використання голки калібру 22G. Іноді процесу відбору крові може сприяти обережне підкачувати натискання пальцем на судину.
Свині мають незначну кількість функціональних потових залоз і не способниактівно потіти. Саме тому циркуляція крові в судинах вуха дуже важлива для регуляції температури тіла. При підвищеній температуреокружающей середовища вушні вени будуть розширені і кровенаполнена, що значно полегшує процес відбору крові.
Після пункції вени, що виділяється кров може бути відразу зібрана в відповідний посудину під впливом капілярного ефекту. Така методика підходить для вимірювання гематокриту і рівня гемоглобіну, а також отримання мазків крові. Пробірки, використовувані при відборі крові для оцінки гематокриту, повинні бути покриті антикоагулянтом. Пробірки, використовувані для вимірювання гемоглобіну (20 мкл) не обробляються подібним способом. Тому, відразу після відбору в кров необхідно додати розчин-антикоагулянт, що перешкоджає її згортанню.
Відбір крові з вушних вен іноді виконують з використанням скальпеля: розрізом судини і збором крові в відкриту пробірку, проте дана методика не рекомендується до практичного застосування.
Черезушниевениможновиполнятьвнутрівенниеін'екціідажеу новорождённихпоросят. Тварина фіксується також, як і в попередньому випадку. Длямаленькіхпоросятіспользуютсяоченьтонкіеігли, калібру 25G. Поросёнокнарісунке 2несколькокрупнее. Ветомслучаеіспользуетсяіглакалібра 23G. Відня - тонкостенниесосудиілегкоперфоріруются. Тому рекомендується приєднувати шприц до голки до початку пункції, а оператор повинен спробувати акуратно аспирировать кров після проколу вени. Рекомендуетсяначінатьін'ецірованіесперіферіческой частини вени, оскільки в разі невдалої спроби залишається можливість повторної пункції / ін'екцііна ділянці, розташованій ближче до голови.
Іглаіухофіксіруютсямеждубольшіміуказательнимпальцемоператора. Когдаетаопераціявиполнена, ассістентможетпрекратітьсжіманіе / наполненіевениіс цього моменту починається ін'екція.Практіческі, ін'ецірованіедолжнобитьвиполненоотносітельнобистро і тому кількість введеного розчину / препарату кілька лімітовано.
Введення розчину в вушну вену.
малюнок 2
У продажу є пристрої для вливання в малі вени (внутрішньовенної ін'єкції), що складаються з трубочки, з'єднаної з голкою (рис.3). Ці «голки-метелики» призначені для стандартної венепункции, забезпечені гнучкими прозорими сполучними трубками і прикріплюються до шкіри з використанням липкої стрічки. Крильця забезпечують зручне кріплення системи, і часто мають кольорове маркування в залежності від розміру ін'єкційної голки. Їх найважливішою перевагою є гнучкість сполучної трубочки і можливість фіксації голки на ділянці ін'єкції. Доступні набори різних розмірів / калібрів: 19-21G.
Пристрій для вливання в малі вени
малюнок 3
Для полегшення взяття крові або внутрішньовенної ін'єкції можна іспользоватьпредварітельное внутрішньом'язове введення седативного засобу. Подобниепрепарати (наприклад, «Ветранквіл») полегшують процес, викликаючи розширення і підвищуючи доступність периферичних кровоносних судин. Використання катетера (наприклад, Braunule, 18G). зі стилетом полегшує внутрішньовенне введення ІПРІ фіксації гарантує знаходження голки у вені, навіть якщо свиня активно рухає головою. Дляубойнихжівотнихімолодихсвіноматокподходіткалібр 18G. Дляболеекрупнихжівотних (свиноматки, кнури) можетбить використаний калібр 16G. Последнійразмертакже можетбитьрекомендовандлябольних тварин при необхідності введення великих обсягів рідини / препаратів.
3.2. Методика взяття крові у дорослих тварин і підсвинків
Зразки крові від дорослих свиней найчастіше відбирають з поверхневою яремної вени. Тварина має бути зафіксовано мотузкою, або фіксатором за верхню щелепу, а шия витягнута вгору. При цьому бажано, щоб тварина стояло на всіх чотирьох кінцівках. Мотузка затягується, з таким розрахунком, щоб вона не зісковзувала і не переміщалася по напрямку до носового хряща, оскільки здавлювання цій галузі некомфортно для свиней. Тварина буде намагатися рухатися назад і затягне мотузок в достатній мірі. Такимобразом, після затягування петлі нетнеобходімостіблокіроватьдвіженіесвіньівперёд (рис.4).
Фіксація підсвинка за верхню щелепу
малюнок 4
Постановка і утримання тварини в правильній позиції є важливими елементами швидкого і легкого відбору зразка крові. При достатньому практичному навику фахівця процедура не займає більше 1-2 хвилин.
Поверхнева яремна вена пролягає на глибині 25-40 мм від поверхні шкіри. Правильна область венопункції (проколу вени), знаходиться приблизно в 120 мм вище точки плечового суглоба і розташована в найглибшій точка яремного жолоба, сформованого медіальної грудинно-головний (sternocephalic) і латеральної плечоголовний (brachiocephalic) м'язами (рис.5). На малюнку 5ета область позначена (крупний план, збоку) чорної точкой.Ігла повинна бути спрямована каудо-дорсально і в цьому випадку - перпендикулярно шкірі. Оператору-правші, як правило, зручніше проводити пункцію правої яремної вени.
Голка вводиться навсюдлінуік голкотримачі прісоедіняетсявакуумнаяпробірка. Жіроваяткань, лежащаяповерхвени, должнабитьслегкапріжата. При попаданні голки в вену кров почне надходити в пробірку. На малюнку 6вакуумнаяпробіркасіглойудержіваетсятолькоуказательнимпальцемоператора для наілучшейдемонстрацііметодікіотбора. Вдействітельностіігла з пробіркойдолжнибитьзафіксірованиболеекрепко.
Місце пункції при взятті крові з яремної вени
малюнок 5
Взяття крові з яремної вени
малюнок 6
При необхідності зміни вакуумної пробірки необхідно міцно утримувати иглодержатель. Оператор утримує иглодержатель лівою рукою, одночасно обережно натискаючи на шию свині. Права рука використовується для зміни пробіркі.Подобная методика також використовується для відбору зразків крові у підсвинків масою 20-50 кг. На малюнку 6 показана процедура у тварини масою близько 40 кг.
Настійно рекомендується не переміщати голку з боку в бік після введення в тканини, оскільки це може привести до серйозних пошкоджень судин, кровотечі і смерті (у поросят). При неправильному введенні голки або втрати судини, рекомендується:
· Від'єднати вакуумну пробірку;
· Вийняти голку з тканин
· Ввести голку в тканини під іншим кутом
· Під'єднати вакуумну пробірку
3.3. Методика взятіякрові у поросят (до 20 кг)
Грудне венозний сплетіння, сформований з: верхньої порожнистої, внутрішньої яремної, зовнішньої яремної, загальною яремної, плечоголовний, пахвовій, і внутрішньої грудної вен.
малюнок 7
У поросят масою менше 20 кг рекомендується відбирати кров більш каудально і медіально в яремному жолобі, ближче до рукоятки грудини (лат. Manubriumsterni, манубріум). Залежно від ділянки пункції (проколу), кута і глибини введення голки, кров буде відібрана з будь-якого кровоносної судини, показаного на малюнку 7. Важко сказати з якого саме. Асистент може утримувати поросят до 20 кг за кінцівки: необхідно зафіксувати передні ноги і голову. Манубріум (рукоятка) грудини і точка / напрямок уколу показані чорним (ріс.8,9).
Малюнок 8 Малюнок 9
Взяття крові з грудного венозного сплетення
Якісна фіксація тварини є важливим елементом процедури. Бажано уникати викривлення хребетного стовпа порося, а також не допускати надмірного витягування шиї і закидання голови.Подобние деформацііпрепятствуютдиханію, ведуть до зміщення / здавлення кровоносних судин і ускладнюють відбір крові.
Дляпоросятгруппи подсоса / дорощування (до 20 кг) можноіспользоватьшпріцііглу. Іглапрісоедіняетсякшпріцуішпріцзаполняетсяантікоагулянтом (наприклад, 3% розчином лимоннокислого натрію на фізіологічному розчині). Дляноворожденнихпоросятіспользуютсяігликалібра 23G, дляболеекрупних - 22G.Послевведеніяіглиподкожу, операторосторожноаспірірует (создаётотріцательноедавленіе в шприці) витягаючи поршень. Кров повинна почати надходити після введення голки на 10-25 мм. Після того як кров почала надходити через голку необхідно міцно утримувати шприц, уникаючи подальшого руху. Дляопориіглиоператорможетуперетьсвоюрукувтелопоросёнка, як показано на малюнку 9.
3.4. Методика взяття крові з хвостової вени
Медійна хвостова вена лежить в підхвостовому жолобі, близько до артерії. Оператор піднімає хвіст однією рукою і проколює вену інший. Зазвичай використовуються голки калібру 20G і вакуумні пробірки. Областю пункції є перший, вільно рухається хвостовій суглоб, розташований біля п'ятого хвостового хребця. У дорослих свиней голка вводиться під кутом в 45 ° до шкіри. У більш дрібних тварин рекомендується утримувати хвіст майже горизонтально, а голку вводити паралельно шкірі.
Взяття крові з медіальної каудальной вени
На малюнку 10 показаний відбір крові з медіальної каудальной вени. Навіть у великих тварин важко отримувати великі обсяги венозної крові. Але оскільки артерія пролягає дуже близько до вені, часто при цьому способі відбирається артеріальна кровь.Впрочем, як правило, це не несе загрози здоров'ю тварини.
3.5 Методика взяття крові з орбітального (очного) венозного синуса.
Методика взяття крові з орбітального венозного синуса оптимальна для отримання зразків у новонароджених поросят (рис. 11,12). Втім, подібна методика також може бути застосована у тварин будь-якого віку.
При цьому методі голку 18-19G через третя повіка направляють до носової перегородки зверху вниз до упору в кістку орбіти очі. Потім злегка відтягують назад і набирають потрібну кількість крові.
Іноді в практиці використовуються інші методики відбору, наприклад, з молочної або інших вен. Вибір місця пункції або внутрішньовенної інфузії залишається на розсуд ветеринарного фахівця.
Введення голки з боку внутрішнього кута ока
малюнок 11
Взяття крові з очного венозного синуса
малюнок 12
3.6. Отримання сироватки крові
Після взяття крові у свиней, отримана кров дуже швидко згортається. Тому для отримання якісної сироватки бажано дотримуватися ряду простих умов:
1. Кров збирають в чисті (в ідеалі - стерильні) пробірки. Чим чистіше проведений відбір, тим довше можна зберігати зразок і нижча ймовірність неспецифічних реакцій. Зручним варіантом є взяття крові в спеціалізовані вакуумні пробірки з коагулянтом.
2. Відібрані зразки крові витримують при кімнатній температурі на 1-2 години або поміщають в баночку з теплою водою на 30 хвилин. Чистої (стерильною) спицею або голкою відокремлюють згусток від стінок пробірки і поміщають пробірку з матеріалом в холодильник (4 º С) для кращої ретракції (стиснення) кров'яного згустку
3. Через кілька годин (ніч зберігання) можна відокремити сироватку, відібравши / слив в окрему пробірку.
4. Обсяг зразка сироватки повинен становити не менше 2 мл.