A61K39 / 012 - антигени Coccidia
Власники патенту RU 2312890:
Російська академія сільськогосподарських наук Державна наукова установа Всеросійський науково-дослідний ветеринарний інститут птахівництва (ГНУ ВНІВІП Россельхозакадеміі) (RU)
Винахід відноситься до ветеринарної паразитології та біотехнології. Штам Л-1-23 Eimeria tenella зберігатиметься в колекції Всеросійського науково-дослідного ветеринарного інституту птахівництва Россельхозакадеміі під номером КЕ №1. Штам виділений від хворого курчати, курчати, зараженого однієї ооцисти з штаму Л-1 Eimeria tenella. Штам специфічний тільки для курей, паразит може проходити повний цикл розвитку також в курячих ембріонах. Штам має такі імунобіологічними властивостями, які дозволяють використовувати його для проведення експериментальних досліджень, а також з метою отримання антигенного і імуногенною матеріалу, використовуваного для діагностики і специфічної профілактики захворювання. 2 табл.
Винахід відноситься до ветеринарної паразитології та біотехнології, а точніше до виробництва діагностикумів і вакцинних препаратів проти кокцидіозів курей, що викликаються Eimeria tenella (E. tenella), а також може бути використано і для проведення наукових досліджень.
Кокцидіоз курей, що викликається Е. tenella, має широке поширення у всіх країнах і завдає істотного економічного збитку промисловому птахівництву.
Багато науково-дослідні центри займаються вивченням як самого паразита, так і викликаний ним захворювання у птахів. Основною метою наукових досліджень є створення засобів і методів діагностики, хіміо- і специфічної профілактики хвороби.
Важливим методом боротьби з кокцидіозом курей є специфічна імунопрофілактика. Технологія виробництва і застосування вакцин така, що використовуються при їх виготовленні штами повинні володіти високою иммуногенной активністю, репродуктивністю, не бути стійкими до дії різних Антикокцидійний препаратів (хіміопрепарати і ионофорного антибіотики).
Відомий ряд штамів E. tenella, використовуваних для виробництва вакцин [1, 2, 3, 4]. Ці штами виділені в інших країнах і використовуються при проведенні наукових досліджень і виробництві вакцин. Незважаючи на те, що антигенні відмінності у різних штамів на сьогоднішній день не встановлені, не можна виключити, що вони існують. Тому з'явилася необхідність виділення такого штаму Е. tenella, який можна було б використовувати для зазначених цілей.
Як прототип використаний штам E. tenella Л-1, виділений з посліду хворих кокцидіоз курчат з одній з птахофабрик Ленінградської області [5]. Штам Л-1 в дозі від 5000 і вище ооцист на голову викликає у заражених сприйнятливих курчат гостре переболевание з характерними клінічними (пригнічений вигляд, скуйовджене пір'я, блідість гребінців і слизових оболонок, спрага, відмова від корму, кров'янистий кал) і патолого-анатомічними ознаками (у полеглих птахів відзначається сильне здуття і геморагічні ураження слизової оболонки сліпих відростків кишечника). У перехворілих курчат утворюється імунітет до повторного зараження.
Таблиця 1
Характеристика штаму Л-1 Е. tenella
Чутливість до кокцидіостатик
Чутливий до ампроліуму, нікарбазіну, фармкокціду, хімкокціду, клінакоксу, до всіх ионофорного антибіотиків
Однак штам Л-1 Е. tenella має високу вірулентністю, так як вакцинація птиці проти кокцидіозу заснована на введенні в організм строго дозованої кількості ооцист паразита, в зв'язку з чим можливі порушення при вакцинації можуть викликати спалахи кокцидиоза у імунізованих курчат.
Завданням винаходу є отримання вакцинного штаму Е. tenella, зі слабким ступенем вірулентності, що володіє високими імуногенні властивості в поєднанні зі здатністю до високого рівня репродуктивності в організмі курчат.
Поставлена задача досягається штамом Л-1-23 Eimeria tenella для виробництва вакцин, діагностикумів та проведення наукових досліджень. Штам Л-1-23 Eimeria tenella виділений шляхом зараження чутливого курчати однієї ооцисти з штаму Л-1 Eimeria tenella.
Штам Л-1-23 Eimeria tenella зберігатиметься в колекції Всеросійського науково-дослідного ветеринарного інституту птахівництва Россельхозакадеміі під номером 1.
Характеристика штаму Л-1-23 Eimeria tenella
Систематичне положення. Штам Л-1-23 Е. tenella відноситься до роду Eimeria, сімейству Eimeriidae, загону Coccidiida.
Морфологічна характеристика. Має широкоовальні ооцисти довжиною 19,0-26,0 мкм, шириною 16,0-22,0 мкм (середня 22,6-18,8 мкм).
Біологічні властивості. Препатентний період розвитку паразита становить 130 годин. Місце ендогенного розвитку паразита в кишечнику інвазованих курчат - сліпі відростки.
Вірулентні властивості. При зараженні 15-денних курчат ооцистами, що зберігалися не більше 2-х місяців, в дозі 800000 ооцист на голову летальність становить 50% (ЛД50).
Імуногенні властивості. Зараження курчат ооцистами викликає формування специфічного імунітету (гуморального і клітинного).
Культурально-біохімічні властивості. Штам Л-1-23 Е. tenella НЕ культивується на поживних середовищах. Підтримується шляхом пассірованія на курчатах, викликаючи через 72-96 годин характерні ураження в кишечнику з виділенням ооцист, починаючи з 130-го години після зараження.
Штам чутливий до Антикокцидійний препаратів - ампроліуму, нікарбазіну, фармкокціду, хімкокціду, клінакоксу, до всіх ионофорного антибіотиків.
Специфічність. Штам Л-1-23 Е. tenella специфічний тільки для курей. Паразит може проходити повний цикл розвитку також в курячих ембріонах.
Приклад 1. Використання штаму Л-1-23 Е. tenella для напрацювання культури кокцидий для іммунохіміопрофілактікі кокцидіозів курей.
Для імунізації птиці використовуються спеціально підібрані штами кокцидий, що володіють слабкою вірулентністю і високу імуногенність, в дозах, що не викликають клінічного переболевания кокцидіозом. Такими властивостями володіє штам Л-1-23 Е. tenella. Імуногенний матеріал одержують у такий спосіб. 14-денних курчат, вільних від кокцидий, заражають перорально ооцистами штаму Л-1-23 Е. tenella з матричної расплодкі в дозі 2-3 тисячі на 1 голову. На 6-10 добу після зараження з зібраного від курчат посліду виділяють ооцисти методом флотації в насиченому розчині кухонної солі. Споруляцію ооцист проводять в 2% -ному розчині біхромату калію при температурному режіе 26 # x000B1; 2 # x000B0; С протягом 3-5 діб. Спорулірованние ооцисти штаму Л-1-23 Е. tenella використовують при виготовленні культури кокцидий, призначеної для вакцинації курчат.
Культура кокцидий є гомогенну стерильну суміш сірувато-оранжевого кольору без сторонніх домішок, плісняви, неразбівающегося осаду, нешкідливу для курчат. Пероральнезастосування культури кокцидий викликає субклінічний переболевание курчат з подальшим виділенням ооцист в зовнішнє середовище, що створює можливість природного реінвазірованія господаря і формування у нього імунітету, напруженість якого може бути визначена з імуноферментної тест-системи на основі штаму Л-1-23 Е. tenella.
Приклад 2. Вивчення в експериментальних умовах Антикокцидійний активності препаратів.
В даний час основним методом профілактики кокцидіозів курей є використання Антикокцидійний препаратів. Першим етапом вивчення ефективності (Антикокцидійний активності) знову синтезованих препаратів є проведення експериментів з використанням інтактних курчат, заражених лабораторними штамами кокцидий з відомою вірулентністю. До таких штамів відноситься штам Л-1-23 E. tenella.
Інтактних курчат заражають перорально ооцистами штаму Л-1-23 Е. tenella в дозі ЛД50 і відразу починають давати з кормом досліджувані препарати. Спостереження за птахом ведуть протягом 10 днів. Для оцінки Антикокцидійний активності препарату використовують показники летальності / виживання і приростів, які служать для визначення протівококцідіозного індексу (ПКІ).
Таблиця 2
Порівняльна оцінка ефективності різних кокцидіостатиків при зараженні курчат кокцидіями штаму Л-1-23 Е. tenella
В даному досвіді встановлено, що і хімкокцід і нікарбазін мають виражену Антикокцидійний активністю при зараженні курчат кокцидіями штаму Л-1-23 Е. tenella.
Таким чином, штам Л-1-23 Е. tenella володіє такими імунобіологічними властивостями, які дозволяють використовувати його для проведення експериментальних досліджень, а також з метою отримання антигенного і імуногенною матеріалу, використовуваного для діагностики і специфічної профілактики захворювання.
1. P.L.Long. Further studies on the patogenicity and immunogenicity of the embrio-adapted strain of Eimeria tenella. Avian Pathology, vol.3, №4, 1975.
2. T.K.Jeffers. Attenuation of Eimeria tenella through selection for precocciousness. J. Parasitol. vol.61, №6, 1975.
3. J. Johnson, W.M.Reid, T.K.Jeffers. Practical immunizatin of chickens against coccidiosis using an attenuated strain of Eimeria tenella. Poultry sciense, vol.58, №1, 1979.
4. T.C.Ivore, P.L.Long, M.Kogut and Joyce Johnson. Attenuation of Eimeria necatrix and E. tenella of U.S. origin by serial embryo passage. Avian Diseases, vol.27, №3, 1983.
5. ТУ-10-07-445-87 "Культура кокцидий для іммунохіміопрофілактікі кокцидіозів курей", затверджені Начальником Головного управління ветеринарії Державного агропромислового комітету СРСР 20.07.1987.
Штам Л-1-23 Eimeria tenella (колекція Всеросійського науково-дослідного ветеринарного інституту птахівництва, КЕ №1) для виробництва діагностикумів і вакцин і для проведення наукових досліджень.