Головна / Продукція / Медичні вироби для діагностики IN VITRO / Сироватки діагностичні ботулінічним ти-пов А, В, С, Е, F нативні кінські сухі для реакції біологічної нейтралізації призначений для діагностики та ідентифікації типу збудника ботулізму в реакції нейтралізації токсину.
Медичні вироби для діагностики IN VITRO
Медичні вироби для діагностики IN VITRO
Філія ФГУП «НВО« Мікроген »МОЗ Росії; Росія, 355019, Ставропольський край, м Ставрополь, вул. Біологічна, 20
Набір реагентів виявляє специфічні антитоксини, що нейтралізують ботулінічного токсину однойменного типу збудника ботулізму в реакції нейтралізації токсину.
За 5 ампул сироватки.
За 5 ампул сироватки одного типу в обсязі, що залежить від специфічної активності набору реагентів (не менше 200 МО для типів А і Е, 100 для типу В, 150 для типу С, 50 для типу F) в пачці з інструкцією по застосуванню.
Показання для застосування
Набір реагентів є сироватки, отримані з крові коней, гіперімунізованих ботулінічним моноанатоксінамі і токсинами відповідних типів. В 1 мл ботулінічного сироватки типу А міститься не менше 200 МО (міжнародні одиниці активності), сироватки типу В - не менше 100 МО, типу С - не менше 150 МО, типу Е - не менше 200 МО, типу F - не менше 50 МО .
Режим дозування і спосіб застосування
Приготування екстрактів для реакції.
Дослідженню на присутність ботулінічного токсину можуть бути піддані промивні води шлунка, залишки їжі зі шлунка, сеча і випорожнення хворого, різні органи трупів (2-3 шматочки по 5-10 г з серця, печінки, селезінки, нирок, головного мозку, стінки шлунка, товстого і тонкого кишечника), кров, харчові продукти, фураж, силос та інші об'єктивним ти.
З органів трупів (найбільш часто токсин виявляється в печінці), з згустків крові, вмісту шлунка, кишечника і випорожнення роблять
екстракти. Екстрагування токсинів з продуктів, що містять кухонну сіль, проводять дистильованою водою. Наполягання досліджуваного матеріалу проводять 1-2 години, після чого фільтрують через вату. Отримана після фільтрації рідина, а також сироватка крові і сеча можуть бути використані для постановки реакції біологічної нейтралізації.
Для виявлення токсину в харчових продуктах, враховуючи мож-ливість гніздового розташування токсину, проби матеріалів беруть в кількості 20-25 г з місць, найбільш підозрілих за органолептичними властивостями, розтирають у ступці і заливають подвійним об'ємом фізіологічного розчину. Після двогодинного витримування екстракт центрифугируют, а потім з ним ставлять реакцію нейтралізації.
Примітка. З огляду на, що значна частина токсину типу Е продукції-ціруется у вигляді протоксін, активується під дією травного них ферментів, для виявлення токсину типу Е екстракт з продуктів перед постановкою реакції нейтралізації рекомендується піддати активації панкреатином або трипсином (1 мл 1% розчину ферменту на 10 мл екстракту). Суміш екстракту з ферментом витримують при температурі 37 ° С протягом 2 год.
Для постановки реакції нейтралізації може бути використана рідина з овочевих, рибних, м'ясних консервів після центрифугування.
Присутність ботулинических токсинів в отриманих екстрактах або в рідких досліджуваних матеріалах визначають шляхом постановки реакції біологічної нейтралізації з типоспецифічними діагності¬ческімі ботулінічним сироватками.
Методика постановки реакції нейтралізації.
У зв'язку з тим, що в досліджуваному матеріалі можуть бути два і навіть три токсину, попередньо реакцію необхідно ставити з сумішшю моновалентних ботулинических сироваток типів А, В, С, Е, F. Суху сироватку кожного типу розчиняють в 1 мл дистильованої води при легкому струшуванні . Після розчинення складають суміш з рівної кількості сироваток кожного типу. До 1 мл суміші сироваток типів А, В, С, Е, F додають 4 мл випробуваного матеріалу, витримують при кімнатній температурі не менше 45 хв, після чого по 1 мл суміші з випробуваного матеріалу і сироваток вводять чотирьом мишам внутрішньоочеревинно. Чотирьом контрольним мишам вводять по 0,8 мл випробуваного матеріалу без сироватки.
Реакцію можна проводити також на двох морських свинках. Однією з них підшкірно або внутрішньочеревно вводять 3,5 мл суміші сироваток і випробуваного матеріалу (готують суміш так само, як для мишей), інший - 3 мл випробуваного матеріалу без сироватки.
Спостереження за тваринами ведуть протягом чотирьох днів. Якщо живіт-ні, отримали випробуваний матеріал без сироватки, за цей час гинуть, а отримали цей же матеріал з сироваткою залишаються живими, то це вказує на присутність ботулінічного токсину в досліджуваному матеріалі. Орієнтовний відповідь може бути отриманий на другу добу.
Для визначення типу токсину в 6 пробірок розливають по 2,4 мл досліджуваної рідини, потім в кожну пробірку доливають 0,6 мл сироватки: в першу пробірку доливають сироватку типу А, у другу-типу В, в третю - типу С, в четверту - типу Е, в п'яту - типу F, в шосту доливають 0,6 мл 0,9% розчину натрію хлориду. Суміш пос¬ле витримування 45 хв при кімнатній температурі вводять внутрішньочеревно або підшкірно по 1 мл двом мишам з кожної пробірки.
Для кожної сироватки беруть окремий шприц.
Для швидшої ідентифікації типу токсину реакцію з дослі-дуємо матеріалом ставлять одночасно з сумішшю діагностичних сироваток і з окремими типоспецифічними сироватками.
РЕЄСТРАЦІЯ РЕЗУЛЬТАТІВ
Облік проводять попередньо через 4-6 год, через 24 год і остаточно через 4 дня.
Миші, які отримали суміш гомологичного токсину і сироватки, виживають при загибелі всіх інших мишей. Якщо випробуваний субстрат нейтралізується одночасно сироватками типів Е і F, що пов'язано з наявністю загальних антигенів, додатково ставлять реакцію нейтралізації з сироватками, розведеними в 40 разів. Останні нейтралізують тільки однойменний токсин.
Запобіжні заходи при застосуванні
Набір реагентів безпечний. Всі стічні розчини, проби, реагенти біологічного походження і обладнання, що знаходилося в контакті з сироватками, слід обробляти відповідно до СП 1.3.2322-08 «Безпека роботи з мікроорганізмами III-IV груп патогенності (небезпеки) і збудниками паразитарних хвороб».