Тема №1: Лабораторна діагностика поліомієліту та захворювань, що викликаються вірусами Коксакі, ЕСНО.
Мета. на основі знань особливостей біології вірусів поліомієліту, Коксакі, ЕСНО, особливостей їх взаємодії з макроорганизмом вміти обгрунтувати тактику лабораторної діагностики, профілактику і терапію, що викликаються ними захворювань.
1. Класифікацію, морфобіологічні характеристику вірусів поліомієліту, Коксакі, ЕСНО.
2. Екологію, особливості епідеміології, патогенезу та імунітету при поліомієліті і захворюваннях, що викликаються вірусами Коксакі, ЕСНО.
3. Матеріал і методи лабораторної діагностики поліомієліту та захворювань, що викликаються вірусами Коксакі, ЕСНО.
4. Специфічну профілактику поліомієліту, неспецифічну профілактику при поліомієліті і захворюваннях, що викликаються вірусами Коксакі, ЕСНО.
1. Враховувати і оцінювати результати кольоровий проби (ЦП), реакції нейтралізації (РН) з метою діагностики поліомієліту.
2. Враховувати і оцінювати результати РДА, РГГА з метою діагностики інфекцій, що викликаються вірусами Коксакі, ЕСНО.
1. Класифікація, морфо-біологічна характеристика та антигенну будову вірусів поліомієліту, Коксакі, ЕСНО.
2. Програма ВООЗ щодо глобальної ліквідації поліомієліту; результати її реалізації в РФ і Красноярському краї.
3. Особливості патогенезу і імунітету при захворюваннях, що викликаються вірусами поліомієліту, Коксакі, ЕСНО.
4. Лабораторна діагностика поліомієліту та захворювань, що викликаються вірусами Коксакі, ЕСНО: матеріал і методи (вірусологічний, серологічний).
5. Специфічна профілактика поліомієліту.
6. Неспецифічна профілактика захворювань, що викликаються вірусами поліомієліту, Коксакі, ЕСНО.
Завдання, що виконуються в ході заняття (УИРС):
1. Провести вірусологічне дослідження з метою діагностики поліомієліту:
1.1. Врахувати і оцінити результати зараження культури тканини досліджуваним матеріалом від обстежуваного з діагнозом «поліомієліт» (мікроскопічно, ЦП).
1.2. Врахувати і оцінити результати РН в культурі тканини методом ЦП з полівалентною і типовими ПОЛІОМІЄЛІТНОЇ сироватками і вірусосодержащім матеріалом.
На підставі отриманих результатів зробити висновок, заповнити бланк-направлення та бланк-відповідь з вірусологічної лабораторії.
2. Провести вірусологічне дослідження з метою діагностики ентеровірусної інфекції:
2.1. Врахувати і оцінити результати РДА з вірусосодержащім матеріалом, отриманим при зараженні культур тканини СМЖ обстежуваного з клінічним діагнозом «Менінгіт. Ентеровірусна інфекція? ».
2.2. Врахувати і оцінити результати РГГА з полівалентною, типовими діагностичними сироватками Коксакі А і В, ЕСНО та отриманої культурою вірусу.
На підставі отриманих результатів зробити висновок, заповнити бланк-направлення та бланк-відповідь з вірусологічної лабораторії.
3. Вивчити і описати біопрепарати: жива поліомієлітної вакцина, діагностичні полівалентні і типові сироватки поліомієлітної, Коксакі, ЕСНО.
Методичні вказівки до виконання дослідницького завдання:
I. Проведіть вірусологічне дослідження з метою діагностики поліомієліту:
1.1. Врахуйте і оціните результати зараження культури тканини досліджуваним матеріалом від обстежуваного з діагнозом «поліомієліт» (мікроскопічно, ЦП).
Матеріалом для вірусологічної діагностики поліомієліту є: фекалії в перші 10 днів захворювання, виділення носоглотки - в перші 3 дні захворювання; із спинномозкової рідини - поліовірус виділяють рідко. Після приготування проб і перевірки їх на відсутність бактерій заражають культури клітин (фібробластів людського ембріона або нирок мавп, HeLa та ін.).
Індикацію вірусу проводять по ЦПД, для поліовірусу - це повна або часткова дегенерація клітин, що виявляється на 2-3 день інкубації.
Облік результатів здійснюється мікроскопічно або методом ЦП (див. Заняття №25).
Контролем служить интактная культура клітин тканини.
1.2. Врахуйте і оціните результати РН в культурі тканини методом ЦП з полівалентною і типовими ПОЛІОМІЄЛІТНОЇ сироватками і вірусосодержащім матеріалом.
Ідентифікацію отриманої культури цитопатогенного вірусу здійснюють в РН з полівалентною, а потім з типоспецифічними сироватками I, II, III.
Як культури вірусу використовують культуральну рідину первинно зараженої культури тканини, яку змішують з рівним об'ємом діагностичної сироватки, розведеної 1: 5 або 1:10, залишають на 1-1,5 год при кімнатній t ° і після цього заражають культуру тканини. Для цього в пробірку з культурою тканини вносять 0,2 мл суміші і 0,8 мл живильного середовища 199.
Критерієм достовірності результатів РН є контролі:
- контроль тканинних культур (незаражених культура тканини з додаванням 1 мл середовища 199) для виявлення можливої неспецифічної дегенерації клітин;
- контроль токсичності сироватки (найменше розведення сироватки, яке використовується в досвіді, в обсязі 0,1 мл вносять в пробірку з культурою тканини і додають 0,9 мл середовища 199);
- контроль вірусу (0,1 мл культури вірусу вносять в пробірку з культурою тканини і додають 0,9 мл середовища 199).
Облік результатів РН здійснюється на 5-7 день. При цьому слід мати на увазі, що у флаконах з вірусом культура тканини гине і колір середовища 199 не змінюється (залишається червоним). Там же, де вірус нейтралізується, середа 199 стає жовтою. Позитивний і достовірний результат РН свідчить про приналежність вірусу до відповідного виду і типу.
На підставі отриманих результатів зробіть висновок, заповніть бланк-направлення та бланк-відповідь з вірусологічної лабораторії.
II. Проведіть вірусологічне дослідження з метою діагностики ентеровірусної інфекції:
2.1. Врахуйте і оціните результати РДА з вірусосодержащім матеріалом, отриманим при зараженні культур тканини СМЖ обстежуваного з клінічним діагнозом «Менінгіт. Ентеровірусна інфекція? ».
Віруси Коксакі А типів 1-11, 14, 16-18, 22, 24; Коксакі В типів 1-6 та ЕСНО 1-7, 9, 11-23, 25, 27, 30, 31 є збудниками серозного менінгіту, одного з поширених захворювань ентеровірусної етіології. Діагноз ставиться на основі використання вірусологічного методу. Матеріалом служить спинномозковій рідині. Для індикації вірусів, що володіють здатності агглютинировать еритроцити людини I (0) групи крові (Коксакі А 20, 21; Коксакі В 1-5, ЕСНО 3, 6, 7, 11-13, 15, 16, 19, 20, 25, 29 ), використовують РДА (див. заняття №31).
2.2. Врахуйте і оціните результати РГГА з діагностичними сироватками Коксакі А і В, ЕСНО та отриманої культурою вірусу.
Для сероідентіфікаціі культури гемагглютинирующих вірусу використовують РГГА з діагностичними сироватками, розведеними 1:10 і культурою вірусу в дозі 4 АЕ.
Для перевірки достовірності результатів РГГА ставлять контролі:
- контроль еритроцитів на відсутність спонтанної аглютинації;
- контроль сироваток на відсутність неспецифічних факторів аглютинації;
- контроль гемагглютинирующих властивостей отриманої культури вірусу.
З огляду на, що ентеровіруси представлені великою кількістю сероварів, для їх типування використовують суміші діагностичних сироваток. Схема Ліма і Беньшу-Мельника передбачає застосування 8 сумішей сироваток для типування 42 серотипів ентеровірусів (див. Таблицю 1). Якщо штам НЕ нейтралізується цими сумішами, використовують сироватки до інших ентеровірусів. Наприклад. виділений вірус нейтралізується сумішами В і D і не нейтралізується сумішшю F. Спільними для сумішей В і D є тільки сироватки до вірусів Коксакі В2 і ЕСНО 26. З огляду на, що суміш F, що містить тільки сироватку до вірусу ЕСНО 26, не робить нейтралізуючого дії, слід , що виділений вірус є вірусом Коксакі В2.
На підставі отриманих результатів зробіть висновок, заповніть бланк-направлення та бланк-відповідь з вірусологічної лабораторії.
Склад сумішей діагностичних сироваток для типування ентеровірусів