G01N33 / 48 - біологічних матеріалів, наприклад крові, сечі (G01N 33/02-G01N 33/14, G01N 33/26, G01N 33/44, G01N 33/46 мають перевагу; визначення схожості насіння A01C 1/02); прилади для підрахунку і вимірювання клітин крові (гемоцітометри) (підрахунок клітин крові, розподілених по поверхні, шляхом сканування цієї поверхні G06M 11/02)
Власники патенту RU 2379683:
Державна наукова установа Всеросійський науково-дослідний інститут бруцельозу і туберкульозу тварин Сибірського відділення Россельхозакадеміі (ГНУ ВНІІБТЖ СО Россельхозакадеміі) (RU)
Винахід відноситься до ветеринарії та може бути використано для виявлення хворого і інфікованого вірусом лейкозу великої рогатої худоби.
Існує метод діагностики за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Даний метод дозволяє виявити провірусну ДНК вірусу лейкозу великої рогатої худоби через 1-2 тижні після зараження і визначити тварин, які в серологічних тестах реагують негативно. Однак метод ПЛР вимагає дорогого устаткування і використовується в Росії в основному в наукових цілях.
Використовуваний для прижиттєвої діагностики гематологічний метод дозволяє виявити тільки 60 - 65% хворих на лейкоз. 35 - 40% тварин не мають лейкозних змін, і це ускладнює ефект проведених оздоровчих заходів. З господарств вибувають тварини з лейкемоїдними реакціями, а хворі на лейкоз нерідко залишаються (Нахмансон В.М. Заходи профілактики та боротьби з лейкозом великої рогатої худоби з генетично стійких ліній і сімейств / В.М. Нахмансон, Е.А. Дун і ін. / / Праці ВІЕВ. - 1986. - Т. 59. - С.82-86).
Однак вказаний метод і інші методи, передбачені методичними вказівками, не передбачають диференціацію субпопуляцій лімфоцитів, зведення про зміст яких в крові тварин дозволило б більш точно оцінити імунний статус при лейкозної інфекції великої рогатої худоби.
Завданням винаходу є підвищення точності і достовірності діагностики лейкозу великої рогатої худоби.
Збільшення цього коефіцієнта вказує на імунну недостатність і є найбільш стабільним ознакою в імунній системі у інфікованих або хворих на лейкоз великої рогатої худоби. Якщо Ко ≤4,2, то тварина вважають здоровим, якщо До ≥4,3, то тварина вважають хворим і з підвищеним ризиком до захворювання.
Пропонований спосіб діагностики виявляє на 46,6% більше тварин хворих і з підвищеним ризиком до захворювання вірусом лейкозу великої рогатої худоби, є більш точним і підвищує достовірність.
Суть винаходу пояснюється на конкретних прикладах виконання способу.
Приклад 1. Досліджують 30 корів, з яких 10 здорових з благополучного щодо лейкозу великої рогатої худоби стада, 10 корів, інфікованих вірусом лейкозу великої рогатої худоби (РІД-позитивні) з неблагополучного по лейкозу стада, 10 хворих корів, позитивно реагують в РІД, і підтверджені гематологічним методом дослідження. У периферичної крові визначають кількість лейкоцитів, лімфоцитів, Т-лімфоцитів за допомогою спонтанного розеткоутворення з еритроцитами барана, Т-кілерів - непрямого глобулинового розеткоутворення з еритроцитами бика, Т-лімфоцитів, які розпізнають антигени вірусу лейкозу великої рогатої худоби і В-лімфоцитів - комплементарного розеткоутворення з еритроцитами бика в процентах (Бажин М.А. Мироненко В.А. та інші. Методи оцінки Т- і в-систем імунітету у великої рогатої худоби при бруцельозі і туберкульозі: методичні рекомендації // Омськ . - 1989. - 34 с.) (Таблиця 1).
Середні показники імунологічних параметрів в крові великої рогатої худоби, М ± m
Ці результати узгоджуються з даними В.Н.Шабаліна і Л.Д.Серовой, на думку яких лімфобластів більшості хворих на гострий лімфобластний лейкоз не утворюють Е-розетки (В.Н.Шабалін, Л.Д.Серова. Клінічна імуногематологія. - Л. Медицина, 1988. - С.171-173). Мабуть, у Т-лімфоцитів, уражених вірусом лейкозу великої рогатої худоби, знижується експресія рецепторів Т-лімфоцитів до еритроцитів барана, в той же час антитіла до вірусу лейкозу і циркулюючі імунні комплекси блокують ці рецептори, що перешкоджає реакції спонтанного розеткоутворення.
Проводять досліди з визначення коефіцієнта відносини процентного вмісту лімфоцитів до різних субпопуляцій лімфоцитів (Т-, В-лімфоцити, Т-лімфоцити, що розпізнають антигени, і Т-кілери) для встановлення найбільш стабільної ознаки, що відображає імунний статус тварин (таблиця 2).
Коефіцієнти відносин лімфоцитів у відсотках до субпопуляцій імунокомпетентних клітин, M ± m
З таблиці 2 видно, що Ко лімфоцитів до Т-кілерам у інфікованих і хворих по відношенню до здорових тварин не досягає достовірного відмінності. До лімфоцитів до В-лімфоцитів у інфікованих достовірно зменшується, тоді як у хворих збільшується. До лімфоцитів до Т-лімфоцитів, що розпізнають антигени вірусу лейкозу, у інфікованих достовірно зменшується, а у хворих не досягає достовірного відмінності. Експериментально встановлено, що найбільш стабільним, інформативним ознакою, що відображає імунний статус тварин, є процентне відношення числа лімфоцитів до числа Т-лімфоцитів.
Аналізують імунологічні параметри кожної окремої тварини і встановлюють, що ставлення лімфоцитів до Т-лімфоцитів серед здорових не перевищує 3,5, серед інфікованих від 4,3 і вище і серед хворих варіює від 4,88 до 16,4.
Наприклад, у хворої корови в крові визначено 96% лімфоцитів, методом спонтанного розеткоутворення 9% Т-лімфоцитів підставляємо отримані дані в формулу
Ставлення лімфоцитів до В-лімфоцитів серед здорових та інфікованих не має істотних відмінностей і варіює від 0,77 до 4,55, в той час як у більшості хворих цей показник збільшується. Ставлення лімфоцитів до Т-кілерам і лімфоцитів до Т-лімфоцитів, що розпізнають антигени вірусу лейкозу, серед здорових, інфікованих і хворих тварин варіює в одних межах і не представляється можливим виділити будь-якої ознака відмінностей.
Отже, диференціація субпопуляцій лімфоцитів в крові тварин дозволяє більш точно оцінити імунний статус при лейкозної інфекції великої рогатої худоби. Найбільш стабільним ознакою в імунній системі хворого і інфікованого лейкозом великої рогатої худоби, що свідчить про імунної недостатності, є зміна загального числа лімфоцитів і Т-лімфоцитів з рецептором до еритроцитів барана, при цьому інші імунологічні показники (число В-лімфоцитів, Т-кілерів і Т лімфоцитів, які розпізнають антигени вірусу лейкозу) менш інформативні і не дозволяють з високою точністю виявити хворий або з підвищеним ризиком до захворювання на лейкоз велика рогата худоба.
Приклад 2. В умовах господарства, неблагополучного по лейкозу великої рогатої худоби, досліджують телят, отриманих від матерів-вірусоносіїв, у віці 4-6 місяців, 12-14 місяців в порівнянні з телятами цих же вікових груп з благополучного щодо лейкозу великої рогатої худоби господарства (таблиця 3). Телята всіх вікових груп не реагували в РІД. У крові визначають коефіцієнт відношення процентного вмісту лімфоцитів до Т-лімфоцитів.
У віці 4-6 місяців у одного з 15 тварин, отриманих від матерів-вірусоносіїв, Кo = 17,0, у інших - до 3,42. Надалі цих телят піддали гематологічному методу дослідження і виявили того ж самого тваринного, що підтверджує діагноз. У 15 телят з благополучного господарства Кo варіював в межах від 1,08 до 3,6 і вказував на відсутність у тварин вірусу лейкозу.
У 14 тварин у віці 12-14 місяців з неблагополучного господарства Кo склав від 4,35 і вище (93,3%). Подальше гематологічне дослідження дозволило виявити 7 хворих, з числа 14 тварин, у яких Ko склав вище 4,3. У 15 телят цього ж віку з благополучного господарства Кo варіював в межах від 1,10 до 2,31.
Також досліджують 20 корів, які містилися в пункті по перетримці інфікованого вірусом лейкозу великої рогатої худоби, зараження якого було виявлено серологічно (РІД). До змісту лімфоцитів до числа Т-лімфоцитів у 18 корів склав від 4,31 до 41,5, що свідчило про підвищений ризик до захворювання на лейкоз, у 2-х - 2,96 і 2,62 відповідно. В подальшому при дослідженні гематологічним методом діагноз на лейкоз підтверджений у 11 корів. У 20 корів з благополучного господарства цей показник варіював в межах від 2,50 до 3,93 (таблиця 3).
Результати дослідження тварин різних вікових груп в неблагополучному господарстві
З таблиці 3 видно, що у віковій групі 12-14 місяців з 15 тварин в РІД не виявлено інфікованих тварин, гематологічним методом виявлено 7 тварин, пропонованим методом 14 тварин, що дозволило виявити додатково 7 тварин (46,66%). Серед 20 корів в РІД виявлено 20 інфікованих тварин, гематологічним методом 11, пропонованим методом - 18, в результаті чого виділено 2 (10%) тварин, які не є інфікованими та гематологічно хворими, а позитивна реакція в РІД, ймовірно, пов'язана з неспецифічними реакціями. Таким чином, пропонований спосіб діагностики дозволяє додатково виявити до 46,66% хворих і з підвищеним ризиком до захворювання на лейкоз великої рогатої худоби, є більш точним і достовірним.
Винахід відноситься до лабораторних методів дослідження і може бути використано для кількісного визначення катехоламін- і серотонін-рецепторних комплексів на поверхні лейкоцитів в мазках крові або в зрізах тканин людини і тварин.
Винахід відноситься до медицини, а саме до неврології.
Винахід відноситься до галузі медицини, а саме до клінічної лабораторної діагностики, і може бути використано для визначення локалізації білків в висохлої краплі сироватки (плазми) крові.
Винахід відноситься до клінічної фармакокінетики і може бути використано для визначення вмісту антибіотиків в крові методом високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ).
Винахід відноситься до медицини і біології, а саме до онкології, і молекулярної біології.
Винахід відноситься до галузі медицини, а саме до неонатології.
Винахід відноситься до медицини, а саме до області клінічної імунології та мікробіології, і стосується способу визначення антимікробної активності імунної плазми крові.
Винахід відноситься до способів і пристроїв для вимірювання і визначення вмісту сечовини в крові людини.
Винахід відноситься до експериментальної медицини.