Н.В.Ковалюк, кандидат біологічних наук зав. лабораторією біотехнології СКНІІЖ, проректор Краснодарського регіонального інституту агробізнесу
В.Ф.Сацук, кандидат сільськогосподарських наук, директор ТОВ ІПСХП "Астер"
Е.В. Мачульская, молодший науковий співробітник лабораторії біотехнології СКНІІЖ
ДНК - обов'язковий компонент будь-якого живого організму (виняток становлять лише РНК містять віруси на визначений-них стадіях свого існування). У миші і людини, кишкової палички та слона ДНК ус-троена по одному прінціпу- це полімерна макромолекула, що складається з ланок - нук-леотідов. Нуклеотиди бувають 4 видів: А, Т, G і С. У всіх живих істот A, T, G, C - нук-леотіди зустрічаються в складі ДНК, але в раз-особистих комбінаціях. Чим ближче один до одного види розташовані на еволюційної сходах-це, тим сильніше схожі їх последовательнос-ти ДНК, в той же час навіть у представників однієї родини можна знайти такі ділянки ДНК, які будуть строго індивідуальні.
Використання цього біологічного властивості лягло в основу методу полімерних-різному ланцюгової реакції (ПЛР), який за оцінкою американського журналу "Science" є найвидатнішим відкриттям останніх років.
У сприятливих умовах вбудований провірус формує нові віріони; кото-які відокремлюються від клітинної мембрани для інфікування нових клітин.
Для діагностики лейкозу застосовують клі-ний, патологоанатомічний, гістоло-ня, гематологічний, серологічний і молекулярно - біологічний методи.
Все розмаїття клінічних призна-ков лейкозу можна поділити на спеці-фические і неспецифічні. Більшість дослідників вказують на первинне по-явище неспецифічних ознак, а потім з'являються специфічні, за якими мож-но поставити діагноз (Н. В. Румянцева, Т.М. Шатернікова, 1963; Г.А. Симонян, 1963; Е.М. вим та ін. 1970). У міру розвитку заболева-ня у окремих тварин розвивається зниження реактивності, млявість. Порівняно рано у хворих на лейкоз тварин регис-Трір порушення серцево - судинної діяльності (глухі тони серця, іноді їх роздвоєність), пульс слабкого наповнення, можлива аритмія. До числа неспецифічних ознак лейкозу відносяться нерегулярне жуйка, проноси, 'запори.
Специфічні клінічні ознаки характеризуються прогресуючим увели-ням поверхневих (привушних, підпорядкованих-люстних, пропоз про патокових, колінної складки, надвименние), а також внутрішніх лімфаті-чеських вузлів, екзофтальм. (В. М. Лемеш і співавт. 1987).
Однак, як і будь-який діагностичний метод, РІД не позбавлений недоліків.
Так, наявність у лейкозу латентної стадії, коли в крові відсутні антитіла до вірусу) ускладнює діагностику захворювання. Експе-риментально встановлено, що після зараження прихований період інфекції (період від моменту зараження до появи антитіл до вірусних антигенів) триває від 2 цієї статті не-дель до декількох місяців, з цього, пості-пінно виводячи з стада РІД
позитивних жи-Вотня, теоретично можливо домагатися повного оздоровлення господарства від лейкозу (A. Burny, Bruck С, Cleuter Y. 1985). Проте, в оздоровлених стадах, які не мали контактів з іншими, через кілька міся-ців або навіть років виділяють тварин з анти-тілами до ВЛКРС (В. М. Нахмансон, 1986). Це можна пояснити характерним для лейкозу явищем імунологічної толерантності, коли спостерігають вірусоносійство без ан-тітелообразовані'я. Імунологічна толі-рантность
В даний час, широке застосований-ня методу ПЛР в діагностиці лейкозу, на наш погляд, стримується наступними фак-торами: високою вартістю обладнання та реактивів для ПЛР, відсутністю на ринку сертифікованих діагностикумів і не до кінця усвідомлені місцем ПЛР-діагностики в системі протіволейкозних заходів .
нега-тивних тварин, при такому комбінований-ном використанні діагностичних методів гарантовано швидке і ефективне оздо-ровленіе стада.
Важливою сферою застосування ПЛР є-ється дослідження імпортованого худоби, що знаходиться в карантині, з метою переді-твращенія завезення ВЛКРС з однієї країни в іншу.
Таким чином, можливі, по край-ней мірі, три області успішного примі-вати методу ПЛР в діагностиці лейкозу: виявлення носіїв провірусноі ДНК серед РІД і ІФА-негативних жи-Вотня, дослідження знову завозяться в хозяйствожівотних і виявлення зара-дені телят в ранньому віці.
У лабораторії біотехнології СКНІІЖ з використанням методу ПЛР досліджено 1013 зразків крові на наявність провірусноі ДНК ВЛКРС. У таблиці 1 наведені дані по інфікованості тварин різних хо-зяйств ВЛКРС.
Аналізуючи отримані результати, хотілося б відзначити наступне. Живіт-ні лише одного з господарств (СЗАО СКВО) виявилися повністю вільні від носи-тва провірусноі ДНК ЛКРС. Телиці голштинської чорно-рябої породи в це господарство було завезено з Голландії і не мали контактів з місцевими тваринами. Серед інших імпортних тварин (ВАТ "Племзавод" Кубань "п = 354, завезені з Угорщини) методом РІД були виявлені позитивно реагують, а за допомогою ПЛР вдалося виявити 1 носія прове-русноі ДНК ЛКРС. Більш того, провірусну ДНК виявили і в пробі крові теляти, по-лучанин від ПЛР - позитивного тварини. Носії провируса були видалені з стада. У господарстві ТОВ "Тваринницький комп-лекс" Ольгинській "з 97 проаналізований-них зразків 67 були отримані від РІД - від-ріцательно тварин. 15 з них виявилися ПЛР _ позитивними.
Аналізуючи дані по носія про-вірусу, встановили, що відсоток инфициро-ванних телят до 3-4 місяців (на підставі ПЛР - досліджень) практично соответс-твует відсотку РІД - позитивних тварин того ж господарства, але в більш пізньому віз
расті (до 3 років). Це, швидше за все, сві-детельствует про те, що зараження тварин відбувається в ранні терміни життя (транспла-центарно і до 3 міс), а перші імунологи-етичні ознаки хвороби з'являються у біль-шинства тварин після першої лактації. •
Отже, якщо проводити поділу-ня теличок методом ПЛР на носіїв провируса і здорових в перші 2-3 неде-ли життя тварини, можна оздоравлі-вать господарства значно швидше.
Наші партнери!
Головна Тваринництво ВРХ
Головна Тваринництво ВРХ