СПОСОБИ ВИЗНАЧЕННЯ резус-фактора
Всі методи визначення резус-фактора діляться на способи, що застосовуються в клініці: в умовах приймального покою, в операційній, на відділенні біля ліжка хворого і т. д. не потребують спеціального лабораторного обладнання, і лабораторні методи.
- СПОСОБИ ВИЗНАЧЕННЯ RH-фактора В КЛІНІЦІ
Використовуються два так званих зкспресс-методу:
- Експрес-метод зі стандартним універсальним реагентом в пробірці без підігріву.
- Експрес-метод на площині без підігріву.
а) Експрес-метод визначення Rh-фактора стандартним універсальним реагентом в пробірці без підігріву
Для дослідження може бути використана свіжа несвернувшаяся кров, взята з пальця (з вени) безпосередньо перед дослідженням, або консервована кров без попередньої обробки, а також еритроцити з пробірки після формування згустку і відстоювання сироватки.
Методика проведення реакції
Дослідження проводять в центрифужних пробірках об'ємом не менше 10 мл. На дно пробірки вносять одну краплю стандартного універсального реагенту, що представляє собою антирезусну сироватку групи AB (IV), що містить 33% розчин поліглюкіну. Потім в неї додають одну краплю досліджуваної крові (або еритроцитів). Круговим обертанням пробірки вміст розмазують по її внутрішньої поверхні таким чином, щоб вміст розтеклося по стінках. Це значно прискорює агглютинацию і робить її крупнолепестковой. Аглютинація на стінках пробірки настає, як правило, протягом першої хвилини, але для утворення стійкого комплексу «антиген - антитіло» і чіткої аглютинації спостерігати слід не менше 3 хвилин. Потім для виключення неспецифічної агрегації еритроцитів в пробірку додають 2-3 мл фізіологічного розчину і перемішують шляхом однодвукратного перевертання пробірки (без збовтування!).
оцінка результатів
Наявність аглютинації (великі пластівці на тлі просвітленої жідг кістки) вказує на резус-позитивну приналежність досліджуваної крові. Відсутність аглютинації (в пробірці гомогенно пофарбована рожева рідина) свідчить про резус-негативної приналежності досліджуваної крові.
б) Експрес метод визначення Rh-фактора на площині без підігріву
Методика проведення реакції
На білій пластинці зі смачиваемой поверхнею пишуть прізвище та ініціали особи, кров якого досліджується. На лівому краю пластинки роблять напис «сироватка - антирезус», на правому - * «контрольна сироватка». Останньою служить розведена альбуміном сироватка групи АВ (IV), що не містить антитіл анти-резус. Відповідно написів на платівці поміщають по 1-2 краплі (0,05-0,1 мл) реактиву антирезус і контрольної сироватки. До обох краплях додають досліджувані еритроцити. Кров розмішують з реактивом сухою скляною паличкою, розмазуючи на пластинці до утворення краплі діаметром 1,5 см. Платівку злегка похитують. Через 3-4 хвилини для зняття можливої неспецифічної аглютинації до кожної краплі додають 5-6 крапель фізіологічного розчину. Потім пластинку похитують протягом 5 хвилин.
оцінка результатів
Результат оцінюють за наявністю або відсутністю аглютинації неозброєним оком.
Наявність добре вираженою аглютинації у краплі зліва вказує на резус-позитивну приналежність досліджуваної крові. Відсутність аглютинації в цій краплі (гомогенна забарвлення) говорить про резус негативною приналежності досліджуваної крові (Rh-). Результат вважається дійсним лише за відсутності ознак аглютинації в правій (контрольній) краплі.
- ЛАБОРАТОРНІ СПОСОБИ ВИЗНАЧЕННЯ резус-фактора
Для визначення резус-приналежності крові хворого в умовах лабораторії застосовують чотири основні методи.
а) Метод аглютинації в сольовому середовищі
Використовують спеціальні сироватки, що містять повні антитіла анти-резус. Еритроцити у вигляді 2% суспензії у фізіологічному розчині хлориду натрію з'єднують в пробірках з антирезусної сироваткою. Пробірки поміщають на 1 годину в термостат при температурі 37 ° С, після чого осад еритроцитів на дні пробірки розглядають за допомогою лупи і по його формі враховують результат. При позитивному результаті (Rh +) осад має характерний малюнок у вигляді ниток або зернистості. При негативному (Rh-) осад розміщується рівномірним шаром і має вигляд правильно окресленого кола.
б) Метод коіглютінаціі з желатином
У пробірку поміщають рівні об'єми досліджуваних еритроцитів, антирезусної сироватки і 10% розчину желатину. Пробірки інкубують при температурі 45-48 ° С, після чого додають десятикратний обсяг фізіологічного розчину. Пробірки 2-3 рази перевертають і враховують результат по наявності аглютинації, видимої неозброєним оком.
в) Непрямий антіглобуліновой тест (реакція Кумбса)
Ця реакція є найбільш чутливою для виявлення неповних антитіл до ауто- і ізоантігенамі еритроцитів. До неї, як правило, вдаються при виникненні труднощів у визначенні резус-приналежності крові, пов'язаних з нечіткими результатами, отриманими при інших методах дослідження. Реакція заснована на використанні антіглобуліновой сироватки (АГС).
При обробці резус-позитивних еритроцитів неповними антитілами анти-Rh наступає їх обволікання (сенсибілізація) по відношенню до АГС, яка і агглютинирует сенсибілізовані еритроцити, оскільки має антитіла до глобулінів.
В пробірку вносять антирезусну сироватку і відмиті фізіологічним розчином еритроцити; поміщають на 1 годину в термостат при температурі 37 ° С, після чого еритроцити ретельно відмивають. Наступний етап реакції проводять на площині. Краплю суспензії еритроцитів змішують з рівною кількістю антіглобуліновой сироватки і враховують результат. Наявність аглютинації є показником того, що досліджуваний зразок крові резус-позитивний. Якщо аглютинація відсутня, випробувана кров - резус-негативна.
г) Реакція з анти-В-моноклональнимн антитілами
На планшеті змішують велику краплю (0,1 мл) анти-В-монокло- нальних антитіл (МКА) і маленьку краплю (0,01мл) досліджуваної крові.
За реакцією спостерігають протягом 2,5 хв. При змішуванні анти-D-MKA із зразками резус-позитивних еритроцитів відзначається швидко насту * Пающіє пелюсткова аглютинація. Якщо кров резус-негативна - аглютинація відсутня.
МОЖЛИВІ ПОМИЛКИ
*
Найчастіше помилки є наслідком методичних похибок при проведенні дослідження, особливо при використанні конглютінаціонних методів. До хибним результатам може привести неправильне співвідношення між сироваткою і еритроцитами, передчасна оцінка результатів, оцінка результатів по висихає краплі, визначення резус-фактора в гемолізовані і тривало зберігається зразку крові, а також використання неактивних, інфікованих і загнили сироваток, використання сироваток з вичерпаним терміном придатності .
Причиною помилок можуть бути біологічні особливості випробуваної крові: зниження агглютінабельності резус-антигену при деяких захворюваннях печінки, нирок, системи крові, а також неспецифічна аглютинація досліджуваних еритроцитів. У разі сумнівних результатів дослідження повторюють, застосовуючи більш активні антирезусні сироватки.