Після ідентифікації збудника захворювання і виділення чистої культири Actinomyces bovis, нашої наступним завданням було визначення чутливості збудника актиномікозу Actinomyces bovis до антибактеріальних препаратів і встановлення його найнижчий рівень концентрації, гнітючої зростання виділеної культури цього мікроорганізму.
З метою з'ясування можливості застосування найбільш ефективних антибіотиків при лікуванні актиномікозу великої рогатої худоби нами було вивчено фунгістіческое дію антибактеріальних препаратів в ін'єкційних формах, таких як цефтриаксон (цефолоспорини # 921; # 921; # 921; покоління), Бровасептол (сульфаніламідні препарати), а також препарат фторхінолонового ряду - енрофлокс.
Бровасептол. БРОВАСЕПТОЛ® для ін'єкцій
Опис. Однорідний порошок світло-жовтого кольору зі слабким специфічним запахом в комплекті з флаконом стерильного розчинника (розчин хлориду натрію 0,9%).
Склад. 1 мл3 препарату (готового ін'єкційного розчину) містить діючі речовини:
- сульфадиметоксину натрієва сіль - 100 мг;
- сульфадиазина натрієва сіль - 100 мг;
- триметоприм - 40 мг.
Розчинник - розчин хлориду натрію 0,9%.
Фармакологічні властивості. Механізм дії сульфаніламідів і триметоприму полягає в блокуванні двох різних етапів біосинтезу фолієвої кислоти. Це призводить до пригнічення росту бактерій, припинення їх розмноження і загибелі.
Комбінація двох сульфаніламідів і похідного диаминопиримидина (триметоприму) дає синергічний ефект, що розширює антимікробний спектр дії препарату. Бровасептол® для ін'єкцій активний проти грампозитивних (Staphylococcus spp. Streptococcus spp. Clostridium spp. Corynebacterium spp. Та ін.) І грам негативних мікро (Е. coli, Salmonella spp. Klebsiella spp. Proteus spp. Pasteurella spp. Bordetella spp. Та ін. ). До препарату чутливі деякі види найпростіших (Pneumocystis carinii, Coccidia і Toxoplasma). Комбінація сульфаніламідів і триметоприму зменшує ймовірність появи резистентних форм патогенної мікрофлори.
Показання. Лікування великої рогатої худоби, овець, кіз, свиней, собак, котів, кролів і птиці при захворюваннях бактеріальної етіології:
- органів дихання (ангіни, трахеїту, фарингіту, бронхопневмоній, плевриту);
- органів травлення (гастроентериту, диспепсії, колібактеріозу);
- сечостатевих органів (післяпологового сепсису, циститу, пиелита, уретриту, ендометриту):
- специфічних інфекцій (актиномикоза, дизентерії, діплококкоза, пики, ентеротоксемії, еймеріоза, пастерельозу, пуллороза, набрякової хвороби, респіраторного мікоплазмозу, сальмонельозу), а також післяопераційних ускладнень.
Дози і спосіб застосування. Внутрішньом'язово в дозі:
- велика рогата худоба, вівці, свині, собаки великих порід - 0,6 - 0,8 мл на 10 кг м. Ж .;
- собаки середніх і дрібних порід, коти - 0,10 - 0,15 мл3 на 1 кг м. Т .;
- птах, кролі: внутрішньом'язово - 0,1 мл3 на 1 кг м. Ж. або орально з водою - 1 мл3 на 1 л води.
Молодняку і дрібним тваринам в одне місце ін'єкції слід вводити не більше 10 мл3, а дорослим тваринам - 20 мл3 препарату.
У всіх випадках застосування Бровасептола® першу дозу препарату треба збільшувати на 30-100% (в залежності від перебігу захворювання). Препарат вводять 1-2 рази з інтервалом 24 - 36 годин.
Протипоказання. Підвищена чутливість до компонентів препарату.
Застереження. Для розведення не застосовувати розчин новокаїну.
Забій тварин і птиці на м'ясо дозволяється через 10 діб після останнього застосування препарату. Вживання в їжу яєць і молока людям дозволяється через 4 дні після останнього застосування препарату. До зазначеного терміну м'ясо, молоко і яйця згодовують непродуктивним тваринам або утилізують (залежно від висновку ветлікаря).
Кози мають підвищену чутливість до сульфаніламідів, тому розчин препарату слід давати їм з особливою обережністю.
Енрофлокс 5%. Антибіотик відноситься до групи фторхінолонових препаратів. Це група найбільш сучасних антибіотиків з широким спектром антибактеріальної активності. Вони активні щодо як грампозитивних, так і грамнегативних бактерій. Будучи нетоксичними і дуже ефективними препаратами, фторхінолони грають найважливішу роль при лікуванні в першу чергу важких, які загрожують життю, інфекцій. Недостатня активність препаратів цього ряду відносно анаеробів легко компенсується застосуванням їх в поєднанні з метронідазолом, спектр антибактеріальної дії якого охоплює анаеробну мікрофлору. Така комбінація високоефективна при лікуванні важких захворювань.
Фармакологічні властивості Гальмує активний фермент гіразу, який бере участь в каталізі ДНК мікробної клітини, в результаті чого настає швидка бактерицидна дія, особливо на мікроорганізми, резистентні до # 946; -лактамних антибіотиків, тетрациклінів, макролідів та аміноглікозидів. Препарат ефективний проти грампозитивних і грамнегативних мікроорганізмів.
Цефтриаксон. Відноситься до препаратів цефалоспоринового ряду. Цефалоспорини мають широкий спектр антимікробної дії. Вони активні як щодо грампозитивних, так і грамнегативних мікроорганізмів. Багато антибіотики цефалоспоринового ряду високоактивні щодо анаеробів. У порівнянні з антибіотиками пеніцилінової групи все цефалоспорини мають високу стійкість до лактамазам мікробної клітини. Вони мають бактерицидну дію, пов'язаних з пригніченням біосинтезу клітинної мембрани бактерій []. Цефалоспорини діляться на чотири покоління. У нашій клініці застосовувалися такі препарати:
I покоління: цефазолін. Володіє середнім спектром дії. Чи не активний відносно анаеробів і протея.
II покоління: цефамандол, цефуроксим. Мають широкий спектр дії. Активні відносно анаеробів і протея. Цефуроксим подібно лінкоміцину має властивість накопичуватися в кістковій тканині і застосовується при лікуванні кісткових патологій.
III покоління: цефотаксим, цефоперазон, цефтазидим, цефтизоксим, цефтриаксон. Мають широкий спектр дії. Активні відносно анаеробів, протея. II і III покоління вельми ефективні по відношенню до лептоспір, що в поєднанні з їх низькою токсичністю вигідно відрізняє їх від стрептоміцину. При захворюванні спинного і головного мозку концентрація цефуроксиму досягає 88% від концентрації в плазмі крові (для порівняння, у пеніциліну-5%) []. Цефтриаксон - це напівсинтетичний антибіотик групи # 946; -лактамів, цефалоспорин III покоління, має бактерицидний ефект, механізм дії якого пов'язаний з пригніченням активності ферменту трансептідази, порушенням біосинтезу пептидоглікану клітинної стінки мікроорганізму. Препарат має широкий спектр дії: активний відносно аеробних грампозитивних мікроорганізмів, факультативних анаеробів, грамнегативних мікроорганізмів.
Причиною вибору саме цих препаратів послужило наступне:
Дані препарати є одними з останніх у своїй групі;
Всі вони мають досить широким спектром діяльності проти мікроорганізмів, таких як E. Coil, Haemophilus, Klеbsiella, Pasteurella, Pseudomonas, Bordetella, Campylobacter, Erysipelothris, Corinebacterium, Staphylococcus, Streptococcus, Actinobacillus, Bacteroides, Clostridium, а також мікоплазм.
Ці препарати відносно рідко застосовуються в господарстві, тому ступінь звикання патогенної і умовно мікрофлори зводиться до мінімальної.
З антибактеріальних препаратів in vitro готували робочі розведення таким чином, щоб в першій пробірці концентрація препарату склала 400 мкг / мл3; в другій - 200 мкг / мл3; в третій - 100 мкг / мл3; в четвертій - 50 мкг / мл3; в п'ятій - 25 мкг / мл3; в шостий - 12,5 мкг / мл3.
Також матеріалом для досліджень служила 4-х добова бульйонна культура збудника захворювання, яка була виділена від лабораторних тварин (білі миші) в результаті проведення ряду дослідів з експериментального відтворення актиномикоза великої рогатої худоби. Бульйонну культуру розводили в фізіологічному розчині до концентрації мікробних клітин 5 × 106 / мл3. Крім бульонной культури, в досвіді також використовувався нативний матеріал, який був отриманий з актіномікоми корови, хворої актиномикозом. Вміст актіномікозного вузла досліджували, як на присутність самого збудника безпосередньо, так і на супутню мікрофлору, яка, практично, завжди присутній у вмісті патологічного матеріалу.
Для визначення чутливості збудника захворювання використовували метод серійних розведень на щільному живильному середовищі []. В якості поживного середовища застосовували агар Сабуро. Приготований основний розчин антибіотиків розводили в щільному живильному середовищі. Для цього розплавлений і охолоджений до 55 # 730; С агар розливали по 18 мл3 в широкі колби і сюди ж додавали по 2 мл3 відповідного розведення випробуваного антибіотика, ретельно перемішували і переливали в чашки Петрі. До контрольної чашку Петрі розчин антибіотиків не додавався. Після підсушування в термостаті протягом 1-го години на поверхню живильного середовища проводили посів культури і нативного матеріалу за допомогою бактеріальної петлі. Результати поставлених дослідів враховували через 72 год інкубації при 37 ° С. Мінімальну переважну концентрацію (МПК) антибіотика визначали як найнижчу (в микрограммах-мілілітрах), повністю гнітючу зростання культури Actinomyces bovis.
Результати проведених досліджень, представлені в таблицях 3.8; 3.9; 3.10. показують, що культура Actinomyces bovis виявилася високочутливої до Енрофлоксу 5%. Мінімальна переважна концентрація даного препарату склала 12,5 мкг / мл3, в дещо меншій мірі до Бровасептол, МПК якого склала від 25 мкг / мл3 до 50 мкг / мл3. І найменша чутливість культури виявилася до цефтриаксону - від 200 мкг / мл3 до 400 мкг / мл3.
На тих поживних середовищах, де відзначалося зростання виділеної культури, колонії були безбарвні, з часом набували кремовато-білий колір з коричневим відтінком. Відзначали також шкірясто-горбисті колонії з рівними і хвилястими краями, і, в окремих випадках - присутністю білого повітряного міцелію.
Визначення мінімальної переважної концентрації Енрофлокса 5% для виділеної культури Actinomyces bovis
Примітка: «-» - відсутність зростання на поживних середовищах;
«+» - наявність росту на поживних середовищах.
Як видно з таблиці 3.8 в результаті дії енрофлокса зростання колоній актиноміцетів почав з'являтися лише на третій день спостереження при мінімальній концентрації препарату 12,5 мкг / мл3.
Визначення мінімальнойПодавляющей концентрації БровасептолаДля виділеної культури Actinomyces bovis
Концентрація Бровасептол, мкг / мл3
Примітка: «-» - відсутність зростання на поживних середовищах;
«+» - наявність росту на поживних середовищах.
З таблиці 3.9 видно, що бактерицидну дію Бровасептол на культуру Actinomyces bovis слабкіше ніж у енрофлокса. Зростання актиноміцетів відзначався вже з другого дня при концентрації препарату 12,5 мкг / мл3. Зростання колоній збудника спостерігався і на третій день при концентрації 50 мкг / мл.3.
Визначення мінімальнойПодавляющей концентрації цефтриаксону для виділеної культури Actinomyces bovis
Концентрація цефтриаксону, мкг / мл3
Примітка: «-» - відсутність зростання на поживних середовищах;
«+» - наявність росту на поживних середовищах.
Виходячи з результатів проведеної роботи видно, що збудник актиномікозу найменш чутливий до цефтриаксону. Слабка чутливість культури Actinomyces bovis до цефтриаксону обумовлюється тим, що цефтриаксон ставитися до групи # 946; -Лактамних антибіотиків. Отримані нами дані узгоджуються з результатами досліджень Bryan L. E. [], який встановив низьку лікарську чутливість актиноміцетів до # 946; - лактамних, аміноглікозиднихантибіотиків і тетрацикліну, пояснюючи це наявністю генів резистентності до антибіотиків, які локалізуються на хромосомі і плазмидах бактеріальної клітини.
В результаті проведених досліджень встановлено, що найбільш ефективним препаратом, що володіє бактерицидною дією на культуру Actinomyces bovis, є енрофлокс, МПК якого становить 12,5 мкг / мл3. Найменш ефективним - антибіотик цефтриаксон. МПК в його випадку становила 400 мкг / мл3