метод Пєшкова
- мазки фіксувати жаром, налити розчин метиленового синього і підігріти препарат над полум'ям спиртівки, доводячи барвник до кипіння. Кип'ятити 15-20 с, у міру випаровування додати нові порції фарби;
- препарат ретельно промити водою, при цьому цитоплазма знебарвлюється, а спору утримує барвник;
- цитоплазму контрастно докрасіть протягом 30 з 0,5% -м розчином нейтрального червоного;
- препарат промити водою, висушити фільтрувальним папером і микроскопировать з об'єктивом 90 Х. В поле зору видно рожеві вегетативні клітини, що містять ендоспори, пофарбовані в темно-синій (молоді суперечки) або блакитний (сформувалися суперечки) колір.
Метод Пєшкова-Трухільо
- мазки зафіксувати жаром, налити насичений водний розчин малахітового зеленого і підігріти препарат над полум'ям спиртівки, не доводячи його до кипіння протягом 3 хв;
- препарат промити водою, при цьому Ендоспори утримує барвник. Цитоплазму контрастно докрасіть 0,25% -м водним розчином фуксину протягом 1 хв;
- препарат промити водою, висушити фільтрувальним папером і микроскопировать з об'єктивом 90 Х. В поле зору видно рожеві (зрілі) або червоні (молоді) вегетативні клітини, що містять зелено-фіолетові (молоді) або зелені (зрілі) суперечки.
метод Омелянського
- на предметне скло нанести краплю наполовину розведеного водою карболового фуксину Циля;
- в краплю фарби внести краплю бактеріальної суспензії;
- через 2-3 хв додати краплю рідкої чорної туші або 10% -й водного розчину нігрозину;
- краплі швидко змішати і, користуючись другим предметним склом, приготувати мазки по типу мазків крові - підвести предметне (покривне) скло до краплі суспензії під кутом 45 0 і пересунути його вперед до кінця предметного скла;
- препарат висушити на повітрі і микроскопировать з об'єктивом 90 Х. В поле зору на темному тлі туші видно яскраво-червоні клітини бактерій, оточені безбарвними капсулами.
метод Гінса
- на кінець предметного скла бактеріологічною петлею нанести краплю чорної туші і внести в неї досліджуваний матеріал. Рідина перемішати і ребром другого предметного або покривного скла зробити мазок по всій поверхні препарату;
- мазок висушити на повітрі, зафіксувати сумішшю Никифорова протягом 5-10 хв;
- мазок забарвити карболовим фуксином Циля, розведеним водою у співвідношенні 1 3, протягом 2-3 хв;
- препарат промити водою, висушити на повітрі і микроскопировать з иммерсией. На темно-сірому тлі контрастно виділяються рожево-малинові клітини бактерій, оточені безбарвними капсулами.
метод Антоні
- висушений на повітрі мазок досліджуваної культури фіксують парами 40% -го формаліну протягом 3-4 хв, для чого препарат поміщають в чашку Петрі на обрізки скла мазком вниз над краплею формаліну;
- фіксований мазок забарвлюють 1% -м розчином кристалічного фіолетового 2-3 хв, після чого промивають 2% -м розчином мідного купоросу;
- препарат висушити на повітрі і микроскопировать з иммерсионной системою. На світло-бузковому тлі, особливо по краях мазка, видно фіолетові клітини бактерій, оточені безбарвними капсулами.
Фарбування бактерій за Грамом
Промікроскопувати і замалювати клітинну стінку у Saccharomyces cerevisiae і Azotobacter chroococcum, забарвлених за методом Гутштейна:
- мазки фіксують 15 хв в рідини Карнуа (10 мл крижаної оцтової кислоти, 60 мл 96 0 етилового спирту, 30 мл хлороформу);
- препарати занурюють в 10% -й водний розчин таніну для зниження спорідненості цитоплазми до основних фарбників;
- препарати промивають водою 20-30 с, фарбують 0,02% -м водним розчином кристалічного фіолетового або розведеним водою 1:40 фуксином Циля (модифікація Пєшкова) протягом 30 с (дріжджі) і 60 с (бактерії);
- препарат промивають, висушують і проводять мікроскопію з об'єктивом 90 Х. В поле зору видно яскраво-червона клітинна стінка, навколишнє слабо-рожеву або безбарвну цитоплазму.
- фіксований мазок забарвлюють 1-2 хв карболовим генціановий фіолетовим;
- барвник зливають і, не промиваючи препарат водою, обробляють мазок 1-2 хв розчином Люголя до почорніння;
- зливають розчин Люголя, препарат промивають водою і знебарвлюють препарат 0,5-1,0 хв 96 0 -му етиловим спиртом, при цьому спирт наливають на мазок, злегка похитуючи скло, і змінюють його кілька разів. Щоб виключити зайве знебарвлення клітин, до спирту додають йод (2 мл 10% -ого розчину йоду на 100 мл етанолу). Спирт можна замінити ацетоном, який діє майже миттєво;
- препарат промивають водою і додатково фарбують 2-3 хв водним фуксином;
- барвник зливають, препарат промивають водою, висушують і проводять мікроскопію з иммерсионной системою.
- на зафіксовані жаром мазки покласти смужку фільтрувального паперу, просоченої генціановий фіолетовим (кристалічним фіолетовим, метиловим фіолетовим), фарбувати 1-2 хв. Краще використовувати модифікацію Синьова: з спиртового розчину генціановий фіолетового (1 г кристалів генціановий фіолетового, 100 мл 96 0 -го етилового спирту, 5 мл гліцерину) або розчину карболового генціановий фіолетового готують папірці по Синяву - смужки фільтрувального паперу занурюють в спиртовий розчин барвника, висушують на повітрі або в термостаті при 37 0 С (гарний папір забарвлюється рівномірно). Смужку пофарбованої паперу кладуть на мазок, наливають на неї 2-3 краплі води і щільно притискають папір до мазку. Фарбувати 1-2 хв;
- зняти папірець, злити фарбу і, не промиваючи препарат водою, налити на мазок розчин Люголя на 1-2 хв до почорніння мазка;
- злити розчин Люголя і на препарат налити 1-2 краплі 96 0 -го етилового спирту на 30-60 с, злегка похитуючи препарат;
- препарат промити водою і додатково контрастно забарвити водним розчином фуксину протягом 1-2 хв;
- препарат промити водою, висушити фільтрувальним папером і микроскопировать з об'єктивом 90 Х.
- фіксований мазок забарвлюють 1 хв кристалічним фіолетовим;
- протягом 3-4 с змивають барвник водою, надлишок якої видаляють;
- препарат фарбують 1 хв розчином Люголя;
- Люголь зливають, препарат промивають водою і знебарвлюють 96 0 -му етиловим спиртом протягом 30 с, наносячи його по краплях, поки він не перестане забарвлюватися;
- спирт змивають водою і препарат обробляють розчином сафраніну 30 с;
- барвник змивають, препарат промивають водою, висушують і проводять мікроскопію.
модифікація Хукера
- фіксований мазок забарвлюють 1 хв кристалічним фіолетовим;
- протягом 3-4 с змивають барвник водою, надлишок якої видаляють;
- препарат фарбують 1 хв розчином Люголя;
- Люголь зливають, препарат промивають водою і знебарвлюють 96 0 -му етиловим спиртом протягом 30 с, наносячи його по краплях, поки він не перестане забарвлюватися;
- спирт змивають водою і препарат обробляють розчином сафраніну 30 с;
- барвник змивають, препарат промивають водою, висушують і проводять мікроскопію.
модифікація Г.П.Каліни
- на чисте знежирене предметне скло нанести краплю бактеріальної суспензії і 1 краплю реактиву I. Суміш рівномірно розподілити на площі 1 см 2;
- мазок висушити при кімнатній температурі, зафіксувати жаром;
- на препарат нанести розчин II на 1-2 хв;
- препарат промити водою, висушити фільтрувальним папером і микроскопировать з об'єктивом 90 Х. В поле зору чорно-фіолетові (зелені) грампозитивні і світло-червоні грамнегативнібактерії.
(Діамантовий зелений) - 0,5 г;
Етиловий спирт, 96 0 - 100 мл.
0,5% -й спиртовий розчин йодиду калію - 96 мл;
0,5% -й спиртовий розчин основного фуксину - 2 мл;
5% -й спиртовий розчин йоду - 2 мл.
метод Омелянського
- на зафіксовані жаром мазки налити фуксин Ціля і пофарбувати клітини протягом 30-60 с;
- препарат промити водою і занурити в стаканчик з 1% -й Н2 SО4 на 20-30 с, при цьому клітини знебарвлюються, а волютин зберігає забарвлення;
- препарат промити водою і додатково контрастно докрасіть метиленовим синім (1. 40) протягом 15-30 с;
- фарбу змити водою, препарат висушити фільтрувальним папером і микроскопировать з об'єктивом 90 Х. В поле зору в клітинах видно червоні гранули волютина і синя цитоплазма.
метод Нейссера
- на зафіксовані жаром мазки нанести суміш розчинів 1 і 2 на 1-5 хв;
Розчин 1 Розчин 2
Метиленовийсиній - 0,1 г; Кристал. фіолетовий - 1г;
Етиловий спирт, 96 0 - 2 мл; Етиловий спирт, 96 0 - 10 мл;
Крижана оцтова дистилюється. вода - 300 мл.
Дистилюється. вода - 100 мл.
- фарбу злити і нанести розчин Люголя на 1 хв;
- препарат промити водою і докрасіть розчином хрізоідіна (1 г хрізоідіна, 300 мл дистильованої води) протягом 2 хв;
- препарат промити водою, висушити і микроскопировать з об'єктивом 90 Х. В поле зору видно чорно-сині зерна волютина в желтоокрашенних клітинах бактерій.