Протективний ефект T-активіну при експериментальному цукровому діабеті
В.І. Новиков, О.В. Молотков, А.П. Подчеко
Кафедри ендокринології (зав. - доц. В.І. Новиков) і патофізіології (зав. - проф. О.В. Молотков) Смоленської державної медичної академії
До ак відомо, інсулінозалежний цукровий діабет (ІЗЦД) є аутоімунним захворюванням, з прогресуючою деструкцією b-клітин і розвитком абсолютної інсулінової недостатності. Підтвердженням даної концепції є виявлення у хворих ІЗСД і на моделях експериментального діабету (миші лінії NOD, С57В1, ВВ-щури, стрептозотоцініндуцірованний діабет) інфільтрації острівців Лангерганса мононуклеарними клітинами (інсуліт); аутоантитіл до інсуліну, цитоплазматическим і поверхневих антигенів b-клітин; дисфункції тимуса (розвиток хронічної тимической недостатності) з порушенням механізмів регуляції імунної системи і зокрема, освіту аутореактівних клонів цитотоксичних Т-лімфоцитів, Т-супресорний дефіцит і т.д. [2-5, 8, 11].
В ініціації і прогресуючої загибелі b-клітин істотну роль відводять активації процесів вільнорадикального окислення, що виникає в результаті дії факторів навколишнього середовища (віруси, хімічні речовини, харчові фактори, цитокіни і т.д.), з наступною появою "нових" модифікованих антигенів та імунної атакою проти инсулинпродуцирующих клітин [5, 7, 11, 12]. Названі иммунометаболическая порушення тривало передують клінічній маніфестації ІЗСД, що спостерігається тільки після загибелі 80-90% b-клітин [5].
Актуальним є пошук методів і засобів патогенетичної терапії, спрямованих на блокаду імуно-метаболічної агресії b-клітин на ранніх стадіях розвитку ІЗСД. Перспективним напрямком профілактики ІЗЦД є антиоксидантний і імунотерапія, що включає в себе імуносупресію і імуномодуляцію [5, 7, 12].
Експериментальні дослідження показали позитивний ефект превентивного застосування антиоксидантів (a-токоферолу) і нікотинаміду, які блокують індукцію ІЗСД [5, 6, 11. 12].
На підставі цих даних проводиться Європейське дослідження з вивчення ефективності високих доз нікотинаміду в якості профілактичного засобу серед родичів I ступеня спорідненості хворих ІЗСД, що мають діабетичні предиктори захворювання (наявність аутоантитіл до антигенів b-клітин, зниження 1-ї фази секреції інсуліну). Великі надії на можливість блокади розвитку ІЗСД на доклінічних стадіях пов'язують з імунотерапії. Одним з перспективних підходів є селективна імунотерапія із застосуванням анти-CD4-, анти-CD2-, анти-ІЛ-2 рецепторів і т.д. [5].
Є нечисленні повідомлення про можливість блокади розвитку ІЗСД пептидами тимуса (5-я фракція тимозина, a1- і a7-тимозин, тимических сироватковий фактор) [9, 10, 13]. Інтерес до пептидів тимуса посилюється в зв'язку з відкриттям не тільки їх иммунотропного, а й широкого спектрального метаболічного дії: мембраностабілізірующего, гіпохолестеринемічного, інсуліноподібного. Показано їх вплив на стан ендокринної системи, активність циклу Кребса, пентозного циклу, монооксигеназной системи, на процеси репаративної регенерації і ін. [1, 8, 10].
Метою цього дослідження було вивчення впливу Т-активіну на розвиток стрептозотоцініндуцірованного діабету.
матеріали та методи
Робота виконані на 53 білих щурах-самцях лінії WISTAR масою тіла 130 ± 11 г (вік 90 днів). Діабет викликали 3-кратним внутрішньоочеревинному введенням стрептозотоцином (SIGMA, США) в 0,1 М цитратному буфері рН 4,5 в дозі 30 мг / кг маси тіла з інтервалом в 1 день. Перед початком експерименту тварини методом випадкової вибірки розділені на 3 групи: 1-а група (n = 19) отримувала підшкірно 0.1 мл фізіологічного розчину протягом 10 днів; 2-я група (n = 22) отримувала Т-активін в дозі 2 мкг / кг маси тіла 1 раз на добу підшкірно протягом 10 днів; 3-тя група (n = 12) - інтактні тварини.
Введення фізіологічного розчину і T-активіну починали за 5 днів до першої ін'єкції стрептозотоцином. Початком діабету вважали день появи глюкозурії. Визначення концентрації глюкози крові з хвостової вени проводили глюкозооксидазним методом. Після 12-годинного голодування визначали рівень глюкози натще і через 60 і 120 хв після внутрішньочеревно введення глюкози в дозі 1 г / кг маси тіла. Концентрацію інсуліну в плазмі крові визначали радіоімунного методом з використанням стандартних наборів. Оцінку стану сумарної активності процесів перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) проводили методом індукованої Fe2 + -H2O2 - хемілюмінесценції сироватки крові з використанням хемілюмінометре "Діалог". Гістологічне дослідження підшлункової залози проводили після її видалення під ефірної анестезією і фіксації в 15% розчині формальдегіду. Парафінові зрізи фарбували гематоксиліном і еозином, альдегідфуксіном.
Тварини містилися на стандартному лабораторному харчовому раціоні при температурі 220С. Забій щурів виробляли під ефірним наркозом. Статистичну обробку отриманих даних проводили з використанням непараметричних критеріїв Колмогорова-Смирнова, Mann-Whytney, Пірсона.
Результати та їх обговорення
У 16 з 19 тварин, які отримували до введення стрептозотоцином 0,1 мл фізіологічного розчину, розвинувся цукровий діабет. В день виявлення діабету глікемія в ході проведення глюкозотолерантного тесту ГТТ склала: початково - 12,1 ± 2,6 ммоль / л, на 60-й хвилині 16,9 ± 1,8 ммоль / л, на 120-й - 16,0 ± 0,6 ммоль / л; у інтактних тварин відповідно - 3,9 ± 0,84 і 5,51 ± 1,37 ммоль / л, 4,5 ± 0,44 ммоль / л, (p