Методичні рекомендації до практичного заняття №12
По темі: «Сімейство кишкових бактерій (ешерихії, сальмонели)».
1.Закрепіть знання з вивчення морфології, біології та резистентності ешерихій, сальмонел, методів лабораторної діагностики та профілактики захворювань, що викликаються ними.
2. Вивчити правила взяття, напрямки, реєстрації і доставки матеріалу в бактеріологічну лабораторію при кишкових інфекціях.
3. Оволодіти методикою і технікою проведення першого етапу мікробіологічного дослідження випорожнень з метою виділення ентеробактерій.
4. Вивчити засоби специфічної профілактики і терапії захворювань, викликаних ешеріхіями, сальмонелами.
Вивчіть морфологічні і тинкторіальних властивості ешерихій, сальмонел шляхом мікроскопії готових препаратів та по таблиці, замалюйте, підпишіть.
o гострі кишкові інфекції (або підозра);
o у дітей до 2-х років при надходженні до стаціонару;
o у контактних з хворими кишковими інфекціями;
· Склографом на пробірці поставити номер, що відповідає номеру в напрямку;
· Витягують з пробірки стерильний тампон, змочують тампон (30% гліцерину + 70% їхн) надлишок його відмочують об стінку пробірку.
· Обертальними рухами вводять в пряму кишку тампон обстежуваному, який лежить на лівому боці з приведеними до живота ногами на кушетці;
· Витягають тампон, поміщають в суху стерильну пробірку, не торкаючись її країв;
· До відправлення її в лабораторію пробірки поміщають на дві години в холодильник.
Крім того випорожнення збирають відразу після дефекації з судна, горщика, спеціального лотка або за допомогою скляної палички, дротяної петлі, дерев'яного шпателя. При наявності в випорожненнях патологічних домішок (слиз, кров, гній) їх слід включити в відбирається пробу. Екскременти, що не поміщені в консервант, суспензії в стерильному їхн в співвідношенні 1: 5 або 1:10 і засівають не пізніше 2-х годин після взяття. Матеріал поміщають в консервант зберігають до початку дослідження при температурі 4-6 0 С в холодильнику.
1. Вивчіть правила напрямки, прийому і реєстрації матеріалу, що надходить для дослідження в бак. лабораторію (див. Додаток №2).
2. Вивчіть правила взяття і доставки матеріалу при кишкових інфекціях (див. Додаток №1).
Проведіть перший етап бактеріологічного дослідження нативного матеріалу (випорожнень) з метою виділення ентеробактерій.
· Краплю посівного матеріалу за допомогою бактеріологічної петлі (скляної палички, трубочки, піпетки) наносять на поверхню однієї з пластинчастих середовищ в чашці Петрі, відступаючи 1,5- 2 см від краю чашки;
· Посів роблять шпателем, втираючи матеріал по всій поверхні живильного середовища за загальноприйнятою методикою;
· Увага! При дослідженні випорожнень матеріал від одного обстежуваного засівають на чашки Петрі з наступними середовищами.
З метою виділення ешерихій (37 0 С, 18-20 годин).
З метою виділення шигел (37 0 С, 18-20 годин).
- Плоскирева з антибіотиками;
- Плоскирева без антибіотиків.
З метою виділення сальмонел (37 0 С, 18-20 годин).
· Одну петлю досліджуваного матеріалу засівають в пробірку з селенітовий бульйоном (середа накопичення для шигел і сальмонел 37 0 С, не більше 18часов.
Заповніть таблицю, вказавши засоби специфічної профілактики і терапії ешеріхіозов, черевного тифу, паратифів А верб.
Алгоритм БАКТЕРІОЛОГІЧНОГО ДОСЛІДЖЕННЯ МАТЕРІАЛУ
- З матеріалу роблять мазок, фарбують за Грамом, микроскопируют і дають попередню відповідь.
- Матеріал від одного обстежуваного засівають на 6 чашок Петрі з середовищами: Ендо і Левіна - для виділення ЕПЕ; Плоскірёва з антибіотиком і Плоскірёва без антибіотика - для виділення шигел; ВСА - для виділення сальмонел; СПА - для виділення иерсиний. Всі посіви інкубують при 37 ° С протягом 24 год, крім чашки з ВСА, яку інкубують протягом 48 год.
- Матеріал засівають в селенітовий бульйон і інкубують при 37 ° С 14-16 годину.
- З матеріалом проводять фагодіагностіку (з чумних, черевнотифозні, сальмонельозної, полівалентним шігеллёзним бактеріофагами), тобто прискорений метод ідентифікації, що дозволяє дати попередню відповідь, але не виключає проведення бактеріологічного дослідження.
- На чашці Петрі з середовищем Ендо (Левіна) відбирають 10 ізольованих типових щодо ЕПЕ колоній.
- 1/3 кожної колонії перевіряють на приналежність до E. coli. за допомогою РА на склі з полівалентною ешеріхіозной ОКА-сироваткою.
- Другу третину тієї ж колонії пересівають на одну із середовищ первинної ідентифікації: Кліглера або Ресселя або Олькеницкого з метою визначення родової приналежності культури і інкубують при 37 ° С 24 год.
- Частину, що залишилася (третю) частину цієї ж колонії пересівають на скошений СПА з метою виділення та накопичення чистої культури і її серологічної ідентифікації і інкубують при 37 ° C 24 години.
- Проводять первинну ідентифікацію культури (визначають її родову приналежність) за характером росту на середовищі Кліглера (Ресселя, Олькеницкого)
- Роблять посів чистої культури на середовища Гіссен і СПБ з двома індикаторними папірцями (на індол і сірководень) і інкубують при 37 ° С 24 год.
- Посів на середу Сіммонса і інкубують при 37 ° С 24 год.
- Посів в стовпчик напіврідкого агару і інкубують при 37 ° С 24 год.
- Проба на оксидазу.
РS. Перші 5 тестів ставляться до тестів мінімального диференціального ряду ентеробактерій.
- Ставлять РА на склі з полівалентними ешеріхіозной ОКА, ОКВ, ОКС, ОКЛ, СКЕ сироватками (підтверджують приналежність до роду і визначають кількість сироваток для визначення серовара ЕПЕ).
- Ставлять РА на склі з живою культурою і ОК-імуноглобулінами для визначення К-антигену і РА на склі з Гретою культурою (при 100 ° 30 хв на водяній бані) і груповими і факторними Про - сироватками для визначення О - антигену ЕПЕ.
- Якщо немає ОК - імуноглобулінів і групових і факторних 0-сироваток, можна визначити серовар ЕПЕ шляхом постановки розгорнутої РА з живою і гріти культурами (при 100 ° С протягом I години) і груповими ОК - сироватками.
- Проба на чутливість виділеного штаму до антибіотиків і інкубують при 37 ° С 24 год.
- Облік результатів всіх тестів.
- У рухливих штамів додатково визначають Н-антиген в РА на склі з ешеріхіозной Н-сироватками.
- Виписують відповідь (висновок):
"Виділено Е. coli. 020: До 84, чутливі до левоміцетину і канаміцину, проміжні до тетрацикліну, стійкі до пеніциліну і ампіциліну".
