Головна / Сервіс / Статті та методичні матеріали / Авідність антитіл. Застосування в діагностиці
Авідність антитіл. Застосування в діагностиці
За властивостями антитіл розрізняють два поняття аффинность (або афінітет) і авідності (або авідітет). Афінність - це ступінь специфічного спорідненості активного центру до антигенної детермінанті, авідності - це ступінь міцності зв'язування молекули антитіла з молекулою антигену. Чим вище аффинность (ступінь сpодства), тим виражено і авідітет (пpочности зв'язування). Крім того, авідітет тим сильніше, чим більше зв'язуються центрів.
Термін аффинность відноситься до зв'язування антитіла з моновалентний гаптеном або з однієї антигенної детермінантою. У більшості випадків, однак, ми маємо справу із взаємодією антисироватки, тобто сироватки імунізованих тварини або людини. Для опису зв'язування АТ з полівалентним антигеном використовують термін "авідності". Авідність визначається багатьма складними факторами, зокрема, гетерогенність антитіл в даній сироватці, спрямованих до певної антигенної детермінанті, а також гетерогенність самих детермінант. Необхідно враховувати і таку обставину. Полівалентність більшості антигенів призводить до своєрідного "посилює" ефекту: величезне збільшення константи рівноваги, що виникає через те, що складові аффинности не складаються, а перемножуються, і забезпечує цей підсилює ефект.
Таким чином, термін авідності використовується для опису загальної кількості всіх внутрішніх Аффинной виявлених в поликлональной антисироватки.
Первинна імунна відповідь на раніше не що їх надибуємо організмом антигени починається з продукції IgM. IgG - це пізні антитіла в філогенетичному і онтогенетичному відношенні. При первинному імунній відповіді вони змінюють ранні антитіла IgM і накопичуються в організмі в значно більших кількостях. IgG мають найвищими аффинностью і авідності.
Аналіз сироватки крові пацієнта включає в себе визначення антитіл, що утворюються в організмі в відповідь на проникнення збудника. Про гострій фазі захворювання говорить наявність вірусоспецифічні антитіл IgM. Але термін їх присутності в організмі варіює від декількох тижнів до місяців і навіть років. Наростання рівня IgG відбувається протягом декількох тижнів. При цьому спочатку утворюються нізкоафінние антитіла, що утворюються на початку імунної відповіді при розмноженні вірусу в організмі і зберігаються протягом 1-15 міс. від початку захворювання. Пізніше, в процесі дозрівання імунної відповіді, в організмі з'являються високоафінними IgG антитіла. Високоафінними антитіла залишаються в організмі тривалий час. За рахунок цих антитіл розвивається швидкий вторинна імунна відповідь в разі повторного потрапляння збудника в організм. У разі латентної інфекції в крові виявляються IgM при загостренні або реактивації інфекційного процесу.
У випадках, коли виявляються IgM в крові, необхідно розділяти первинну інфекцію і загострення, так як первинна інфекція у вагітних жінок веде до тяжких наслідків для плода. Крім того, розрізняються схеми лікування первинної та латентної інфекції. Для цього рекомендується визначати авідності антитіл IgG. Якщо в крові при наявності IgM виявляються IgG з низькою авідності, то це свідчить про первинну (недавньої) інфекції. Наявність же високоавідних антитіл IgG (в присутності IgM) говорить про вторинному імунній відповіді в разі потрапляння збудника в організм або загострення (реактивації).
В ІФА тест-системах використовують показник індексу авідності антитіл (ІА). Суть методу полягає в наступному. При інкубації тестованих сироваток з адсорбованими антигенами утворюються імунні комплекси. Після промивання планшет в частину лунок додають розчин, який сприяє видаленню "ранніх" IgG, що відрізняються низькою авідності. Після внесення кон'югату контролюють його зв'язування з комплексом антиген-антитіло за допомогою розчину хромогену. Інтенсивність забарвлення пропорційна кількості антитіл до антигену в зразку. Після зупинки ферментативної реакції вимірюють оптичне поглинання забарвленого розчину за допомогою спектрофотометра. Присутність в досліджуваному зразку вирусспецифических антитіл з низькою авідності визначається зниженням інтенсивності фарбування в порівнянні з лунками без розчину, що видаляє "ранні" IgG.
Індекс авідності (ІА) антитіл досліджуваних сироваток розраховують (у%) за формулою:
де:
ОП1 - ОП в лунках з антигенами після обробки розчином, що видаляє низькоавідних IgG;
ОП2 - ОП в лунках з тієї ж сироваткою, що не оброблених розчином.
Виявлення в випробуваної сироватці антитіл з індексом авідності нижче 30-35% (у різних виробників) вказує на свіжу первинну інфекцію обстеженого пацієнта. Виявлений показник авідності, рівний або перевищує 40%, вказує на те, що в сироватці містяться анамнестические високо-Авідність антитіла, які свідчать про інфекцію в минулому. Показник авідності антитіл в інтервалі 31-39% може свідчити про пізній стадії первинної інфекції або недавно перенесеної інфекції тільки за умови виявлення антитіл у високій концентрації.
Таким чином, визначення авідності антитіл до даного збудника дозволяє виділити первинну інфекцію, диференціювати її від періоду реактивації або вторинного проникнення антигену в організм. Але даний тест рекомендується застосовувати для пацієнтів, у сироватці крові яких виявлено IgM.