Базофільними ТЕСТ (грецький basis основа + philia схильність; синонім тест Шеллі) - метод діагностики специфічної сенсибілізації організму, заснований на дегрануляции базофілів після додавання до них специфічного алергену (рис.). Запропоновано Шеллі (W. В. Shelley) в 1962 році. У наступні роки базофільний тест використаний різними дослідниками для вивчення пилкової, лікарської і харчової алергії. Базофільний тест отримав визнання як додатковий тест для діагностики алергічних захворювань і як метод виявлення алергічних антитіл людини. Базофільні лейкоцити крові подібно тканинним огрядним клітинам беруть участь у звільненні гістаміну, гепарину, повільно реагує субстанцій і серотоніну. Вважають, що реакція дегрануляції базофілів крові свідчить про наявність реакції алерген - антитіло (див. Антиген-антитіло реакція). Природа антитіл, що обумовлюють реакцію дегрануляції, залишається неясною. Найбільш ймовірно, що це реагіни (див. Антитіла. Алергічні).
Пряма реакція дегрануляції базофілів при алергії до пеніциліну (зліва - незмінений базофил).
Існує два різновиди базофільною тесту: 1) прямий тест, при к-ром реакція дегрануляції відтворюється на спонтанно сенсибілізованих базофилах хворого (лейкоцити хворого + алерген); 2) непрямий тест, при якому реакція дегрануляції відтворюється на базофилах кролика або здорової людини (лейкоцити + досліджувана сироватка хворого + алерген); в реакції краще використовувати лейкоцити кролика, що містять багато базофілів (4-12%). Непрямий тест отримав більшого поширення.
Матеріали, використовувані для прямого базофільною тесту: 1) свіжа кров хворого; 2) алерген, підвищену чутливість до якого передбачається дослідити; 3) фіксуючий розчин (6 мл етанолу, 2 мл хлороформу і 2 мл ацетону); 4) целюлозні мембранні фільтри.
Методика прямого базофільною тесту
Змішують 025 мл гепаринизированной крові хворого і 0,025 мл алергену. Через 5 хвилин до 0,1 мл суміші додають охолоджений фіксуючий розчин, який руйнує еритроцити, залишаючи інтактними лейкоцити. Після фіксації протягом ночі при t ° 4 ° лейкоцити ресуспензіруют і фільтрують через целюлозні мембранні фільтри протягом 20 хвилин. При цьому базофіли залишаються на фільтрах. Фільтри забарвлюють протягом 30 секунд розчином толуїдинового синього, зневоднюють в етанолі і прояснюють в ксилолі. Підраховують 20 базофілів. Їх класифікують за розміром, забарвленням, числу і локалізації базофільних гранул. Для «виснажених» базофілів характерно: 1) невелика кількість гранул; 2) невеликі слабо забарвлені гранули; 3) значна кількість гранул, розташованих за межами клітини. Тест вважається позитивним, якщо «виснажене» (дегранулюють) більше половини базофілів.
Матеріали, використовувані для непрямого базофільною тесту: 1) свіжа або зберігається при t ° -20 ° сироватка крові хворого; 2) алерген; 3) концентрована суспензія лейкоцитів кролика, отримана при центрифугуванні гепаринизированной крові зі швидкістю 3000 об / хв протягом 5 хвилин в тонких скляних пробірках або поліетиленових трубочках; 4) предметні скельця, пофарбовані розчином нейтральрота. Для кожного алергену досвідченим шляхом підбирають ту концентрацію, яка не викликає неспецифічних змін базофілів.
Методика непрямого базофільною тесту
На забарвлене нейтральротом предметне скло наносять однакову кількість (по 0,005 мл) лейкоцитарної суспензії, досліджуваної сироватки хворого і алергену. Предметне скло накривають покривним, краї якого змазані вазеліном, і ставлять на 10 хвилин у термостат (при 37 °). Паралельно ставлять контрольні проби: 1) досліджувана сироватка з суспензією лейкоцитів (щоб виключити неспецифічну дегрануляцію); 2) суспензія лейкоцитів з алергеном. Реакцію спостерігають під мікроскопом з иммерсией. Вважають не менше 20 базофілів. Основні ознаки пошкодження базофілів наступні: розбухання і втрата сферичності, гранулолізіс, вихід гранул з клітин. Повне руйнування клітини з виходом гранул в навколишнє середовище ( «вибухова» дегрануляция) спостерігається вкрай рідко.
Виділяють три ступені реакції дегрануляції: 1) слабка реакція (+) - дегрануляция при базофільними тесті перевищує таку в контролі на 10%; 2) помірна реакція (+ +) - перевищення дегрануляции в контролі на 15%; 3) різко позитивна (+ + +) - перевищення дегрануляции в контролі на 20% і більше. Критерієм позитивного базофільною тесту можна вважати зникнення гранул більш ніж у 70% базофілів. Цінність представляють тільки чітко позитивні результати, а негативні не виключають стану підвищеної чутливості до даного алергену.
Бібліогр .: Ишимова Л. М. та 3 еліченко Л. І. Алергічні реакції формених елементів крові і їх значення для діагностики, в кн. Аллергіч. захворювання у дітей, під ред. М. Я. Студії-Нікина і Т. С. Соколової, с. 144, М. 1971; Польнер А. А. Реакція дегрануляції базофільних лейкоцитів при алергії до рослинної пилку, Тер. арх. м 40, № 2, с. 103, 1968; Shelley W. В. New serologicai test for allergy in man, Nature (Lond.), V. 195, p. 1181, 1962; він ж e, Indirect basophil degranulation test for allergy to penicillin and other drugs, J. Amer. med. Ass. v. 184, p. 171, 1963.