К.В. Шумилов, О.Д. Скляров, А.І. Климанов, Д.С. Звєрєв
И.Л. Никифоров
Всеросійський державний центр якості і стандартизації лікарських засобів для тварин і кормів (ФДМ "ВГНКИ"), м Москва
Алтайський державний аграрний університет, м Барнаул
Зараження бруцельозом піддаються всі види ссавців, в тому числі осіб. Бруцельоз має тенденцію до широкого поширення і проявляється у вигляді масових абортів, безпліддя і яловості маточного поголів'я, зниження життєздатності приплоду, зменшення продуктивності тварин. Це обумовлено пристосованістю і здатністю збудника бруцельозу розмножуватися в організмі тварин і довго зберігати життєздатність у зовнішньому середовищі.
У Росії бруцельоз великої рогатої худоби вперше зареєстрували в 1902 році. Захворювання тварин було пов'язане з імпортом хворого племінної худоби.
Аналіз епізоотологічних даних з 1946 року по теперішній час показує, що бруцельоз великої рогатої худоби на території Росії не реєструвався лише в Камчатської області.
До 1952 року боротьба з бруцельозом в країні зводилася до проведення діагностичних досліджень і видалення з стад хворих тварин, без застосування протівобруцеллез-них вакцин. У зв'язку з ускладненням епізоотичної ситуації в 1953 році в систему протівобруцеллезного заходів була включена імунізація тварин вакциною з штаму В. аЬогт.і5 19. Вакцину застосовували до 1970 року. За час застосування вакцини багато господарств, і навіть цілі області, було оздоровлено від хвороби. Однак, в регіонах з широким розповсюдженням бруцельозу ефективність оздоровчих заходів виявилася недостатньою. В першу чергу це було обумовлено високою агглютіногеном вакцини. Аглютиніни і комплементсвязивающіе антитіла зберігаються в організмі імунізованих тварин до 5-8 років, що надзвичайно ускладнює диференціацію таких тварин від хворих на бруцельоз.
Вакцина проти бруцельозу великої рогатої худоби з штаму В.аЬогШз 75/79-АВ суха жива (ФДМ "ВГНКИ" і Алтайська НІВС) і інактивована ад'ювант-вакцина проти бруцельозу великої рогатої худоби з штаму В.аоогтіз КВ 17/100 (ФДМ "ВГНКИ ") були розроблені з урахуванням формування нових форм власності і складається епізоотичної ситуації по бруцельозу, що зумовили необхідність імунізувати які раніше не вакцинованих тільних корів і нетелів.
Вихідна культура вакцинного штаму В.аоогтіз 75/79-АВ була виділена в 1979 році від корови, в 1974 р імунізованих і в 1976 р реіммунізірованной вакциною з штаму В.аЬогтіз 82. В результаті цілеспрямованої селекції виділеної культури шляхом багаторазових пасажів через організм морських свинок і телиць і на поживних середовищах було отримано штам В.аЬоПіз 75/79-АВ.
В ході комісійного вивчення на морських свинках і великій рогатій худобі різного віку було встановлено, що культура вакцинного штаму приживляється в організмі щеплених тварин в порівняно короткі терміни, розміщуючись в генералізованої формі протягом 60 днів у морських свинок і 30 днів у телиць. Штам не викликає в лімфатичних вузлах і внутрішніх органах морських свинок патологічних змін, характерних для бруцельозу, що не мігрує від імунізованих на неімунізованих тварин.
За результатами дослідження сироваток крові в РА і РСК з 5 -бруцеллезним антигеном велику рогату худобу до 90-го дня після імунізації вакциною з штаму В. аЬоПіз 75/79-АВ майже повністю втрачає аглютиніни і комплементсвязивающіе антитіла.
Чи не зареєстровано випадків виділення культури вакцинного штаму з молока від корів періодично досліджених протягом 3 місяців після імунізації.
З метою вивчення абортогенних властивостей за 1004 коровами і нетелями (тільними тьолками) з різним терміном тільності, імунізованих вакциною 75/79-АВ спостерігали до отелення. З вказаної кількості абортованих 2 корови на 7 і 30 добу після імунізації, що було не пов'язане з введенням вакцини.
Імуногенні властивості вакцини були вивчені на морських свинках і телиць.
У першому досліді використовували 74 морські свинки живою вагою 350-400 г. сформовані в групи, в тому числі три досвідчені - по 20 тварин в кожній і одна - контрольна, яка налічує 14 тварин. Морських свинок першої групи імунізували культурою штаму 75/79-АВ, другий - штаму 19, третьої - штаму 82, четвертого - не імунізували. Через 90 днів після імунізації всіх тварин заразили вирулентной культурою В. аЬоПіз 54, а через 35-37 днів убили для бактеріологічного дослідження. Згідно з отриманими результатами, зараження протистояли 88,8% тварин, імунізованих вакцинної з штаму В. аЬогтіз 75/79 - АВ, 65,0% - з штаму 82 і 84,2% - з штаму 19. Всі контрольні морські свинки заразилися.
Три досвіду було проведено з використанням 95 телиць. У першому - на телиць 4-х місячного віку, сформованих в 3 досвідчені і одну контрольну групи, була визначена оптимальна імунізують доза вакцини (табл. 1).
Тваринам дослідних груп ввели вакцину в різних дозах. Через 6 місяців телиць досвідчених і контрольної груп заразили стандартної культурою вирулентного штаму В. abortus 54-М-ВГНКИ, суспендованих в фізіологічному розчині, кон'юнктивальні в дозі 15 млн. Мікробних клітин з розрахунку по 7,5 млн. М. Кл. в кожен
очей в обсязі 0,1 мл.
Через 48 днів після зараження тварин убили. Для бактеріологічного дослідження були відібрані лімфатичні вузли і внутрішні органи, по 21 пробі патологічного матеріалу від кожної.
Як видно з матеріалів таблиці, оптимальна імунізують доза вакцини становить 100 млрд. М. К. Вакцина в зазначеній дозі забезпечила захист від зараження культурою вирулентного штаму бруцелл 100% імунізованих тварин при зараженні всіх контрольних неімунізованих телиць.
Другий досвід був присвячений порівняльному вивченню імуногенних властивостей вакцини з штаму В. abortus 75/79-АВ, ад'ювантвак-цини з штаму В. melitensis "Невський-13" і вакцини з штаму В. abortus 82. Для досліджень з 26 телиць 15-18 -ти місячного віку сформували 4 групи тварин. У перших трьох групах було по 7 голів і в четвертій (контрольної) - 5 голів. Схема і результати досвіду наведені в таблиці 2.
Телиць першої групи імунізували суспендованих в фізіологічному розчині дводобовій агаровой культурою штаму В. abortus 75/79-АВ, підшкірно в область середньої третини шиї в дозі 100 млрд. М. К. В обсязі 5 мл, тварин другої групи - такий же культурою з штаму 82. Ад'ювантвакціну ввели телицям третьої групи підшкірно в область подгрудка в дозі 450 млрд. м. к. в обсязі 3 мл. Телиць контрольної групи цього не імунізували.
Через 35 днів після імунізації всіх тварин заразили шляхом нанесення на кон'юнктиву кожного ока по 0,1 мл суспензії стандартної культури вирулентного штаму В. abortus 54-М-ВГНКИ в дозі 15 млн. М. К.
Забій і бактеріологічне дослідження патологічного матеріалу від піддослідних і контрольних тварин провели через 39 днів після зараження.
Згідно з результатами досвіду, вакцини з штамів В. abortus 75/79-АВ і 82 забезпечили захист від зараження культурою вирулентного штаму бруцелл 28,6% імунізованих тварин, а ад'ювантвакціна з штаму В. melitensis "Невський-13" - 42,8%, при 100% -ному зараженні неімунізованих тварин.
У третьому досвіді проведено порівняльний контроль імуногенних властивостей виробничих серій вакцин із штамів KB 17/100, 75/79-АВ, 19, виготовлених на Щелковском біокомбінате.
Штам В. abortus KB 17/100, що знаходиться в R - формі, отриманий шляхом цілеспрямованої селекції по культуральним, морфологічним, біохімічними та антигенними властивостями з культури вакцинного штаму В. abortus 104-М в S - формі.
Штам нешкідливий для лабораторних тварин. При введенні мишам у дозі 250 млн. Мікробних клітин і морським свинкам в дозі 2 * 10Е він не викликає у них патологічних змін, характерних для бруцельозу.
Залишкова вірулентність штаму нижче, ніж у вихідного штаму, ІД50 для мишей лінії С57Блек / 6 становить 5500 мікробних клітин.
Вакцина з штаму KB 17/100 є емульсією типу "вода в маслі". При введенні вакцини в дозі 2 * 109 мікробних клітин морським свинкам і в дозі 7 * 109 мікробних клітин кроликам у тварин виробляються тільки R-антитіла в титрах від 1: 160 до 1 3200.
Під час експерименту по визначенню імуногенності використовували
35 телиць у віці 14-17 місяців з господарства, благополучного щодо бруцельозу великої рогатої худоби за даними серологічного дослідження тварин перед вакцинацією і з урахуванням епізоотичної ситуації.
Кожній вакциною імунізували по 10 телиць. Ад'ю-вант-вакцину вводили тваринам підшкірно в область подгрудка в обсязі 3 мл (4,5 * 10 "м. К.), Вакцину з штаму В. abortus 19 - підшкірно в область задньої третини шиї в дозі 80 млрд. М. До . в обсязі 4 мл, вакцину з штаму В. abortus 75/79-АВ підшкірно в область задньої третини шиї, в дозі 100 млрд. м. к. в обсязі 5 мл. через 6 місяців всіх імунізованих і контрольних (неімунізованих) телиць заразили вирулентной культурою В. abortus 54-м-ВГНКИ кон'юнктивальна в дозі 10 млн. м. к.
Через 30 днів після зараження телиць вбили, а внутрішні органи і лімфатичні вузли (25 об'єктів) від них піддали бактеріологічному дослідженню (табл. 3).
В результаті проведеного експерименту істотних відмінностей між кількістю тварин, імунізованих випробуваними вакцинами, і захищених від зараження культурою вирулентного штаму не встановлено.
В цілому, отримані резульгати дозволяють зробити висновок, що вакцина з штаму В. abortus 75/79-АВ є імуно-генної, слабоагглютіногенной і неабортогенной і, таким чином, відповідає основним сучасним вимогам, що пред'являються до живих протівобруцеллезного вакцинам.
До однієї з найперспективніших протівобруцеллез-них вакцин слід віднести ад'ювант-вакцину з штаму KB 17/100, що не індукує синтез S - бруцельозного антитіл в діагностичних титрах у несенсибілізованих бруцеллами тварин, але індукує його у великої рогатої худоби з латентною формою бруцельозу, що дозволяє за рахунок швидкого видалення з стад таких тварин, прискорити оздоровлення неблагополучних господарств; не володіє абортогеннимі властивостями і може бути використана для імунізації тільних корів і нетелів, і, будучи інактивованої, не представляє екологічної небезпеки.