Геномні бібліотеки. Створення геномних бібліотек. Типи геномних бібліотек.
Рестрикція геномної ДНК на фрагменти і клонування фрагментів за допомогою різних векторів створили основу формування геномних бібліотек.
Для цього геномна ДНК розрізається або, як кажуть, перетравлюється певної рестриктазой, а утворюються фрагменти клонуються за допомогою різних векторів, для чого використовують методи рекомбінантних ДНК. Геномна бібліотека повинна містити не тільки гени, але і всю Некодуючі ДНК, розташовану між генами.
Оскільки перетравлення рестриктазой виробляють неповне так, що одні сайти, специфічні для рестріктази, розрізаються, а інші ні, то утворюються фрагменти ДНК з частково перекриваються послідовностями нуклеотидів. Це полегшує подальше відновлення картини розташування фрагментів в нативної ДНК. Крім геномних бібліотек. існують бібліотеки кДНК.
Бібліотеки кДНК містять тільки екзонів генів, оскільки виходять на основі зрілої мРНК за допомогою ферменту, званого зворотного транскриптазой. Зворотній транскриптаза на матриці мРНК створює комплементарную нитка ДНК, яка потім перетворюється в звичайну двунітевой ДНК за допомогою ДНК-полімерази.
Потім такі молекули кДНК клонуються в бактеріальних клітинах точно так же, як і геномна ДНК. Ще один тип ДНК-бібліотек - хромосомоспеціфіческіе бібліотеки.
Для їх створення хромосоми поділяють за допомогою проточної цитометрії, яка дозволяє виділити окремі хромосоми. ДНК, отримана після такого сортування, буде переважно становити певну хромосому.
Потім отримують фрагменти ДНК окремої хромосоми переварюванням з тієї чи іншої рестриктазой і клонують їх звичайним шляхом. Різні бібліотеки ДНК широко використовують при реалізації програми «Геном людини», а також для інших цілей, наприклад при пошуку поліморфних ДНК-маркерів.