АТ «Медичний університет Астана»
Кафедра: Мікробіології, вірусології ім. Ш. І. Сарбасовой
Тема: Инфектология як наука і місце в ній мікробіології. Мікроскопічні методи.
Инфектология - наука, що вивчає інфекційний процес, інфекційну хворобу, інфекційну патологію, що виникає в результаті конкурентної взаємодії організму людини з патогенними або умовно-патогенними мікроорганізмами, і розробляє методи діагностики, лікування і профілактики інфекційних хвороб.
Інфекційний процес - це комплекс взаємних пристосувальних реакцій на впровадження і розмноження патогенного мікроорганізму в макроорганизме, спрямований на відновлення порушеного гомеостазу і біологічної рівноваги з навколишнім середовищем.
Сучасне визначення інфекційного процесу включає взаємодію трьох основних факторів - збудника. макроорганізму і навколишнього середовища. кожен з яких може мати суттєвий вплив на його результат.
Патогенні мікроорганізми викликають інфекційні захворювання у здорових осіб. Патогенні мікроби активно проникають в чутливі організми, так як паразитування - важлива частина їх життєвого циклу.
Умовно-патогенні мікроорганізми. як правило, позбавлені хвороботворних властивостей і не викликають інфекційних захворювань у здорової людини. Умовно-патогенні мікроби викликають ураження після пасивного перенесення у внутрішню средуорганізма. Важливі умови їх розвитку - масивність інфікування і порушення опірності організму.
Умовно-патогенні і непатогенні (точніше, не здатні викликати ураження у здорової людини) мікроби можуть при певних умовах викликати опортуністичні (від англ.opportunity. Можливість, слушна нагода) інфекції. Підрозділ мікроорганізмів на непатогенні і умовно-патогенні види має нечіткі межі.
Деякі мікроби (наприклад, умовно-патогенні) здатні розмножуватися в організмі людини, не завдаючи йому шкоди. Це явище можна розглядати як взаємну адаптацію мікро- і макроорганізму. Така форма паразитизму називається носійство.
Основні методи виявлення мікроорганізмів
1. Мікроскопічні методи включають приготування мазків і препаратів для микроскопирования. У більшості випадків результати мікроскопічних досліджень носять орієнтовний характер. так як багато мікроорганізмів позбавлені морфологічних ітинкторіальних особливостей.
2. Мікробіологічні методи дозволяє точно встановити факт наявності збудника в досліджуваному матеріалі: включає культивування, виділення чистої культури та ідентифікацію мікроорганізмів з урахуванням морфологічних, тинкторіальних, культуральних, біохімічних, токсигенних і антигенних властивостей.
3. Біологічні методи спрямовані на визначення наявності токсинів збудника в досліджуваному матеріалі і на виявлення збудника, включають зараження лабораторних тварин з подальшим дослідженням їх.
4. Серологічні методи виявлення специфічних антитіл і антигенів збудника - важливий інструмент в діагностиці інфекційних захворювань.
5. Алергологічні методи. Антигени багатьох збудників володіють сенсибілізуючої дії, що використовують для діагностики інфекційних захворювань (шкірно-алергічні проби).
Мікроскопічні методи дослідження морфології бактерій і грибів
Приготування ПРЕПАРАТІВ
ДЛЯ мікроскопічного дослідження
Для приготування препарату досліджуваний матеріал беруть з пробірки, колби або чашки Петрі бактеріологічною петлею або стерильною піпеткою. У деяких випадках використовують для цієї мети препарувальні голки.
Приготування препарату для вивчення мікроорганізмів в нативному вигляді.
Метод «висячої краплі». Препарат готують на покривному склі, в центрі якого наносять одну краплю бактеріальної культури. Потім предметне скло з лункою, краї якої попередньо змащують вазеліном, притискають до покривному склу так, щоб крапля перебувала в центрі лунки. Швидким рухом перевертають препарат покривним склом вгору. У правильно приготованому препараті крапля повинна вільно висіти над лункою, не торкаючись її дна або краю.
Для мікроскопії спочатку використовують малий сухий об'єктив 8Х, під збільшенням якого знаходять край краплі, а потім встановлюють об'єктив 40Х і досліджують препарат.
Метод «роздавленою» краплі. На поверхню знежиреного предметного скла наносять краплю досліджуваного матеріалу або суспензію бактерій і покривають її покривним склом. Крапля повинна бути невеликою, що не виходить за край покривного скла. Мікроскопують препарат з об'єктивом 40Х.
Після мікроскопії препарати «роздавленою» краплі або «висячої» краплі опускають в дезінфікуючий розчин.
Приготування фіксованих препаратів-мазків.
Для приготування препарату на знежирене предметне скло наносять краплю води або ізотонічного розчину хлориду натрію, в яку петлею вносять досліджуваний матеріал і розподіляють його таким чином, щоб отримати тонкий і рівномірний мазок. При такому розподілі матеріалу в мазку при мікроскопії можна побачити ізольовані бактеріальні клітини. Якщо досліджуваний матеріал міститься в рідкому вигляді, то його безпосередньо наносять петлею на предметне скло і готують мазок. Мазки висушують на повітрі або в струмені теплого повітря над полум'ям пальника, не даючи краплі закипати.
Для фіксації мазка предметне скло (мазком догори) повільно проводять 3 рази через полум'я пальника. Мікроорганізми при фіксації гинуть, щільно прикріплюючись до поверхні скла, і не змиваються при подальшій обробці. Більш тривале нагрівання може викликати деформацію клітинних структур. Мазки крові, мазки-відбитки органів і тканин і в деяких випадках мазки з культур мікроорганізмів фіксують зануренням на 15-20 хв. в метиловий або етиловий спирт, суміш Нікіфорова, сулемовий спирт і інші фіксують рідини.
Рис.1. Фіксація прапарати-мазка полум'ям.
МЕТОДИ фарбуванні мазка
Простий метод. Фіксований мазок забарвити будь-яким одним барвником, наприклад фуксином водним (1-2 хв) або метиленовим синім (3-5 хв), промити водою, висушити і микроскопировать.
Складні методи. Послідовно нанести на препарат певні барвники, що розрізняються за хімічним складом і кольором, протрави, спирти, кислоти та ін. Це дозволяє виявити певні структури клітин і диференціювати одні види мікроорганізмів від інших. Забарвлення методом Грама є складним методом.
Рис.2. Забарвлення методом Грама (схема).
- На фіксований мазок нанести карболову-спиртовий розчин генціановий фіолетового через смужку фільтрувального паперу. Через 1-2 хв її зняти, а барвник злити.
- Нанести розчин Люголя на 1-2 хв.
- Знебарвити етиловим спиртом протягом 30-60 с до припинення відходження фіолетових цівок барвника.
- Промити водою.
- Докрасіть водним розчином фуксину протягом 1-2 хв, промити водою, висушити і микроскопировать.