МЕТОДИ ДІАГНОСТИКИ
ВІРУСНИХ ІНФЕКЦІЙ.
ВІРУСИ ГРИПУ. ГРВІ
Сурикова Є.В. - к.м.н. доц.кафедри
мікробіології, імунології та вірусології,
методичні напрямки
Виявлення вірусу або його компонентів
безпосередньо в клінічному матеріалі,
взятому від хворого (швидка діагностика);
Виділення вірусу з клінічного матеріалу
і його ідентифікація;
Серодиагностика вірусних інфекцій;
Вибір методу лабораторної діагностики
залежить:
Від характеру захворювання;
Передбачуваного збудника;
Від періоду хвороби;
Вимоги до збирання, зберігання та доставку
досліджуваного матеріалу
Оптимальні терміни взяття матеріалу;
Вибір проби залежить від патогенезу захворювання;
Обов'язково в гострій стадії хвороби береться кров;
Вибір проби залежить від попереднього клінічного діагнозу;
Проби беруться з дотриманням правил асептики в стерильні флакони
з загвинчують пробкою;
Проби зберігають вологими і на холоду (не заморожує); можна, можливо
використовувати стабілізуючу середу (середа Хенкса і ін.);
Доставку здійснюють в максимально короткі терміни. якщо час
доставки перевищує 30-40 хвилин і не відразу буде проведено
дослідження, проби заморожують при -80 ° С в сухому льоду або
поміщають в рідкий азот при -180 ° С;
Проби маркуються і на них оформляється супровідний
документ;
Методи діагностики вірусних інфекцій
1.
2.
3.
4.
Цитологічний (швидка діагностика);
вірусологічний
серологічний
Молекулярно-генетичний
Методи швидкої діагностики
Експрес-методи;
прискорені
методи;
Експрес-методи діагностики вірусних
інфекцій
Малоспеціфіческіе
♦ Тельця
• Пашена
• Арагао
Тельця Бабеша-Негрі
♦ Внутрішньоклітинні включення
• ядерні (напр. При аденовірусної інфекції)
• цитоплазматичні (напр. Бабеша-Негрі)
♦ Виявлення віріона в пробах
• ЕМ (дає відповідь протягом 1 години);
• ЕІМ (дає відповідь протягом 2-3 годин);
Підходять для рота, адено-, гепадна, параміксо,
ортомиксовирусов і ін.
Експрес-методи діагностики вірусних
інфекцій
високоспецифічні
Виявлення вірусного АГ в пробах: РИФ,
ІФА, РНГА, РІА, реакція преципітації в
гелі (від 2 до 24 годин);
Виявлення ранніх противірусних АТ IgM:
РНГА, Ронг, ІФА, РІА та ін .;
Виявлення вірусних ферментів в тесті МГ;
Виявлення НК: ПЛР;
РИФ з патологічним
матеріалом
прискорені методи
Виявлення вірусного АГ в клітинній культурі через
24 після накопичення.
ретроспективні методи
Вірусологічні методи;
Серодиагностика;
Вірусологічні методи
етапи:
Культивування (накопичення) вірусу;
Індикація (виявлення) вірусу;
Типування (ідентифікація вірусу);
Використання для вірусологічного методу
курячого ембріона
5-7-денні, рідше - 10-11-денні
основні способи зараження:
індикація:
на хоріон-аллантоісную оболонку
в хоріон-аллантоісную порожнину
в порожнину жовткового мішка
в порожнину амніону
в тіло ембріона
загибель ембріона
морфологічні зміни ембріона / оболонок
РДА з рідиною з порожнин курячого ембріона
ідентифікація:
РН (в т.ч. РГГА)
РСК
Використання для вірусологічного методу
культур клітин
Найчастіше - перещеплюваних моношарова
індикація:
ЦПД (цитопатическое дію вірусів - будь
зміна клітин моношару, включаючи бляшкоутворення
і кольорову пробу)
гемадсорбірующая активність моношару (РГАдс)
РИФ (= ідентифікація)
ідентифікація:
РН (в т.ч. РТГАдс)
РСК
РИФ
ВІРУСИ ГРИПУ
ортоміксовіруси -
грец. orthos - правильний,
myxa - слиз
Ортоміксовіруси: класифікація
Orthomyxoviridae
Influenzavirus
вірус грипу А
вірус грипу В
вірус грипу С
Ортоміксовіруси: характеристика
сімейства
спіральний тип симетрії
цитоплазматичні включення
наявність ядерної стадії реплікації
Ортоміксовіруси: основний спосіб
культивування
курячий ембріон
амнион
аллантоіс
індикація
РДА
ідентифікація
РСК
РГГА
Ортоміксовіруси: структура віріона
серцевина (нуклеокапсид)
РНК (А і В - 8, С - 7)
структурний білок
(Нуклеокапсид) - А, В або С
ферменти
суперкапсид
М-білок
біліпідний шар
шипи (глікопротеїни - gp)
гемаглютинін (Н) - індукція
віруснейтралізуючі Ig,
адсорбція
нейрамінідаза (N) - відрив при
отпочковиванія
Серотипи вірусу грипу А
(За класифікацією ВООЗ 1980 г.)
Формула
період
циркуляції
Примітка
H1N1
1918 - 1957
до 1947 р - H0N1
H2N2
1957 - 1968
Азіатський
H3N2
з 1968
Гонконг
H1N1
з 1977
Русский
Ортоміксовіруси: антигенная мінливість
і її наслідки
антигенний
дрейф
(1 - 2 роки)
шифт
(10 - 15 років)
?
А
(І Н і N)
В
(Н)
точкові мутації в гені
З
(Немає)
накопичення
дрейфу
рекомбінація двох
повна заміна гена
накопичення
зміна gp
зміна підтипу gp
Чутливість до чинників
зовнішнього середовища вірусу грипу А
56оС
УФ-промені
дезінфектанти
детергенти
Відмінні риси вірусу
грипу С
1.
2.
3.
4.
РНК має 7 фрагментів
немає нейрамінідази (один тип шипів)
шипи розташовуються на поверхні
віріона не безладно, а з суворою
гексагональної орієнтацією
для адсорбції на клітці використовується інший
тип рецепторів
Грип: епідеміологія і характер
захворюваності
клініка
людина
бессимптомная
аерозольний
пандемії
А
епідемії
В
локальні
спалаху
З
спорадична
захворюваність
Грип: патогенез
епітелій дихальних шляхів
кров
алергія
інтоксикація
nodulus
ендотелій
капілярів
крововиливи у внутрішні
органи
лімфоцити
імунодефіцит
бактеріальні ускладнення
Грип: імунітет
напружений і тривалий, але
узкоспеціфічний
гуморальний
клітинний
ІФН
NK
Ig
макрофаги
IgAS
T
- місцевий
анти-H нейтралізація
анти-N -
поширення
k
Грип: імуно-та хіміопрофілактика
імунопрофілактика
вакцини
живі
убиті
хімічні
імуноглобулін
ІФН
хіміопрофілактика
ремантадин
грип А
початкова стадія
Вірусологічна діагностика грипу
1.
2.
3.
Експрес-діагностика
РИФ: Ag в епітелії
Вірусологічні методи (перші дні)
носоглотковий змив
курячий ембріон
РДА - індикація
РСК - тип
РГГА - підтип
серологічний метод
антитіла в «парних сироватках» (ч / з 8-14 днів) - РСК, РГГА
ВІРУСИ, ПЕРЕДАЮТЬСЯ воздушнокапельном ШЛЯХОМ (ГРВІ)
ГРВІ
с. Paramyxoviridae
п / с Paramyxovirinae
р. Respirovirus (ВПГЧ -1, -3)
р. Rubulavirus (ВПГЧ -2, -4а, -4b)
п / с Pneumovirinae
р. Pneumovirus (RS - вірус);
с. Coronaviridae
р. Coronavirus (більше 10 видів)
с. Reoviridae
р. Orthoreovirus (3 сротіпа)
с. Picornaviridae
р. Rhinovirus (2 види, 100 сероварів)
р. Enterovirus (віруси Коксакі і ЕСНО);
с. Adenoviridae
р. Mastadenovirus (80 видів)
с. Paramyxoviridae
п / с Paramyxovirinae
р. Rubulavirus (вірус
паротиту);
р. Morbillivirus (вірус кору);
с. Togaviridae
р. Rubivirus (вірус краснухи)
прояви ГРВІ
ГРВІ
верхнього відділу
респіраторного тракту
Риніт (рино і коронавіруси),
фарингіт (корона, параміксо,
аденовіруси)
нижнього відділу
респіраторного тракту
Бронхіт і бронхіоліт
(РС -віруси)
пневмонії (грипу,
парагрипу)
Морфологія
• Великі оболонкові
віруси (150-300 нм)
• Спіральний тип
симетрії
• Нуклеокапсид
закручений в спіраль
• однонітевую
несегментірованная
мінус - РНК
Параміксовіруси: характеристика
глікопротеїни (шипи суперкапсиду):
- HN - нейрамінідазной і
гемагглютинирующих активність
- F - злиття мембран (симпласти,
синцитій), гемоліз
реплікація цілком здійснюється в
цитоплазмі
можуть формувати
цитоплазматичні включення
Білки і глікопротеїни
• гемаглютиніну і
нейрамінідаза (у ВПГЧ і
вірусу паротиту, у РС -
відсутні)
• Глікопротеїн F (Fusion -
злиття)
• М-білок
• Білки полимеразного
комплексу (L, P)
Вірус парагрипу: властивості
5 серотипів (домінує
ВПГЧ-3)
гемагглютинирующих
активність
ЦПД
залежить від серотипу
Парагрип: патогенез
епітелій носоглотки
кров
пневмонії
(Діти до року)
ГРЗ
Парагрип: імунітет
типоспецифический
нетривалий
(можлива
реинфекция тим же
серотипом)
парагрип:
вірусологічна діагностика
1. Експрес-діагностика
Ag в клітинах носових ходів (РІФ, ІФА)
2. Вірусологічні методи
носоглотковий змив
▼
культура клітин
▼
РГАдс, ЦПД
▼
РСК, РГГА, РН
3. Серологічний метод
антитіла в «парних сироватках» (РГГА, РСК, РН)
Pneumovirus: властивості
характерно освіти синцития
повна відсутність:
-
-
поверхневі глікопротеїни:
-
-
гемагглютинирующей і гемадсорбірующей
активності
нейрамінідазной активності
G - адсорбція
F - злиття мембран (проникнення) і
освіту синцития
2 серотипу (РН)
Респіраторно-синцитіальних вірус:
епідеміологія
• Викликає патологію нижніх відділів
респіраторного тракту у дітей до 3 років.
• Максимум важких захворювань припадає на
вік 6 тижнів - 6 міс (бронхіоліти, пневмонії)
• При повторних заражених втрачає свою
агресивність
• Основний шлях - контактний, аерогенної
Патогенез RSV-інфекції (респіраторно-синцитіальних
вірусної інфекції)
аерозольний шлях
ГРЗ (дорослі)
епітелій слизової верхніх
дихальних шляхів
пневмонія (діти)
иммуносупрессия
імунні комплекси
бактеріальні ускладнення
иммунопатология
Коронавірус: класифікація
Coronaviridae
людини
тварин і птахів
ТОРС
(SARS)
ентеральні
респіраторні
(Висококонтагіозна)
Етимологія
ТОРС - важкий гострий
респіраторний синдром
(SARS - Severe Acute Respiratory
Syndrome)
Коронавіруси: властивості
• сложноорганізованную
розміром 100-150 нм
• Спіральний тип симетрії
• Глікопротеїни E2 - пепломер і
E1 - трансмембранний
• однонітевую
несегментірованная плюс РНК
• 4 серогрупи (РН) - немає
перехресного імунітету
• Практично не культивуються
коронавіруси:
роль в патології людини
респіраторні
б / симптомно
ГРЗ
бронхіти
пневмонії (діти до 2-х
років)
ТОРС (SARS)
ентеральні
гастроентериту (діти)
Діагностика ГРВІ, викликаних
коронавірусами
• Експрес-діагностика: (РІФ для виявлення АГ у
клітинах епітелію ВДП)
• Серологічний (РСК, РГГА, РН з метою
серодиагностики)
• Молекулярно-генетичний (ПЛР) для визначення
наявності вірусної РНК
Аденовіруси: склад сімейства
Adenoviridae
• Aviadenovirus - віруси птахів
• Mastadenovirus - віруси ссавців
• серотипи (РГГА)
аденовіруси:
Загальна характеристика
• Прості ДНК-ові віріони
• 252 капсомеров
• від 12 вершин ікосаедра - фібри
(Нитки)
• антигени:
• группоспецифических
(Нуклеокапсид) - РСК
• типоспецифічні
(Нитки = гемаглютиніни) -
РГГА, РН
Аденовірусні інфекції: патогенез
первинна репродукція
епітеліоцити слизової
• дихальних шляхів
• кишечника
кон'юнктива
лімфоїдна тканина
• мигдалин
• мезентеральних лімфовузлів
▼
кров
▼
ендотелій судин
▼
ексудативне запалення слизових оболонок
▼
фібринозні плівки, некроз
Аденовірусні інфекції: клінічні форми
• ГРЗ
• фарінгокон'юнктівальная лихоманка
• пневмонії (діти, люди похилого)
• (керато-) кон'юнктивіти
• гастроентериту
• рідкісні аденовірусні поразки
• менінгоенцефаліт
• геморагічні цистити
Аденовірусні інфекції: слідства
трансплацентарного інфікування
внутрішньоутробні захворювання
аномалії розвитку плода
смертельні пневмонії новонароджених
Аденовірусні інфекції: вірусологічна
діагностика
1.
2.
3.
Виявлення Ag в респіраторному епітелії (РІФ).
виділення вірусу
виділення носа, зіву, кон'юнктиви, faeces
▼
культура клітин
▼
РСК
▼
РН, РГГА
Виявлення наростання титру антитіл (РСК, РГГА, РН)
спасибі за
увага
