Це один з найвідповідальніших етапів дослідження спинномозкової рідини, на підставі даних якого нерідко підтверджуються або спростовуються діагнози.
Підрахунок кількості формених елементів проводиться протягом 30 хвилин після вилучення спинномозкової рідини з подальшою диференціацією клітин. Для підрахунку лейкоцитів препарат фарбують одним з реактивів:
Ø 5 мл 10% розчин крижаної оцтової кислоти + 0,1 метилового фіолетового + вода до 50 мл - час фарбування 2 хвилини;
Ø Реактив Самсона: 2,5 мл спиртового розчину фуксину 1:10 + 30 мл оцтової кислоти + 2 г карболової кислоти + дистильованої води до 100 мл, час фарбування 10-15 хвилин.
Пофарбований препарат поміщають в камеру Фукса-Розенталя об'ємом 3,2 мкл. Лейкоцити вважають на малому збільшенні у всіх 256 квадратах, при високому плеоцітозе 200-1000х10 6 / л вважають половину сітки і результат множать на 2, при плеоцітозе понад 1000х10 6 / л підраховують один ряд великих квадратів і результат множать на 4. Нормальні значення цитоза вказані в таблиці 1, при різних видах патології - в таблиці 2.
Цитоз в люмбальній лікворі
Кількість еритроцитів в лікворі підраховують в лічильної камері Горяєва. Для цього СМЖ з домішкою крові розводять у 10 разів - 9 частин ізотонічного розчину хлориду натрію і 1 частина СМЖ змішують в пробірці. Отриману рідину ретельно перемішують, заповнюють лічильну камеру Горяєва і, згідно з правилами підрахунку кількості еритроцитів крові, визначають число еритроцитів в п'яти великих квадратах. Кількість еритроцитів в 1 мкл спинномозкової рідини визначають за формулою:
де А - кількість еритроцитів в 5 великих (80 малих) квадратах, 1/400 - обсяг малого квадрата, 10 - розведення ліквору, 80 - кількість малих квадратів.
При підрахунку в камері Фукса-Розенталя в забарвлених фуксином клітинних і формених елементах проглядаються структури ядра і цитоплазми, що дозволяє проводити їх диференціювання. Оцінку їх проводять при збільшенні 7х40. Реєстрація результатів підрахунку може мати процентне або чисельне вираження (лікворограмма). З огляду на, що формені і клітинні елементи можуть піддаватися дегенеративних змін, при довгому знаходженні в спинномозковій рідині, необхідно проводити оцінку і підрахунок формених і клітинних елементів в забарвлених препаратах.
Клітини ліквору мають зовсім інше спорідненість до фарбувальних речовин, ніж клітини крові, тому і підбір барвників повинен бути іншим. Хороші результати дають наступні види забарвлення препаратів:
1. Забарвлення по Розіною. СМЖ центрифугируют 7-10 хвилин. Надосадову рідину зливають, осад поміщають на знежирене скло, легким погойдуванням розподіляють його на поверхні скла і через 1-2 хвилини рідина зливають. Скло ставлять у вертикальне положення і висушують в сушильній шафі при температурі 40-50 ° С, після чого фіксують 1-2 хвилини метанолом і фарбують за Романовським: препарати забарвлюють 6-12 хв, в залежності від товщини мазка. Препарат промивають дистильованою водою і висушують. Якщо ядра мають блідо блакитний колір, мазок дофарбовують ще 2-3 хвилини.
2. Забарвлення по метушня. Осад, отриманий при центрифугуванні, виливають на скло, злегка похитуючи його, рівномірно розподіляють на поверхні. Висушують при кімнатній температурі протягом доби, фіксують 5 хвилин метиловим спиртом. Потім фарбують розчином АЗУР еозину (таким же, як для забарвлення крові, але розведеним в 5 разів) протягом 1 год. Якщо клітини бледноокрашени, дофарбовував нерозведеної фарбою під контролем мікроскопа від 2 до 10 хвилин. Чим більше формених елементів в лікворі, особливо при наявності крові, тим тривалішим забарвлення.
3. Забарвлення по Алексєєву. На висохлий, але не фіксований препарат наносять 6-10 крапель барвника Романовського-Гимзе, тієї ж піпеткою обережно розподіляють її на весь препарат і залишають на 30 секунд. Потім додають, не зливаючи фарби, 12-20 крапель дистильованої води, попередньо нагрітій до температури 50-60 ° С, в співвідношенні 1. 2. погойдування препарату перемішують фарбу з водою і залишають на 3 хвилини. Змивають фарбу струменем дистильованої води, сушать препарат фільтрувальної папером і проводять мікроскопію. Метод придатний для проведення термінового цитологічного дослідження.
Нормальні значення вмісту клітинних елементів в лікворі представлені в таблиці 3.
Технологія цітоцентріфугірованія (цітоспін). Приготування забарвлених препаратів ліквору з осадової рідини після центрифугування не завжди дозволяє отримати тонкий шар клітин, придатний для діагностики. Для вирішення цієї проблеми була розроблена технологія цітоцентріфугірованія, яка пов'язана з апаратним виготовленні високоякісних препаратів. Для цього отриманий ліквор готують до дослідження і поміщають в цітокамеру, після чого він дозовано подається на вертикально розплоджені в роторі цітоцентріфугі слайди. Під дією відцентрової сили клітини рівномірно розподіляються по склу, в той час як більш легка рідина видаляється з поверхні препарату. Висушування, фіксація і забарвлення препарату також проводяться в цітоцентріфуге. Апарат дозволяє створити до 8-ми діагностичних зон на одному слайді.
Атипові клітини частіше є клітинами пухлин ЦНС або її оболонок. Так само можуть зустрічатися при хронічному запальному процесі (туберкульозний менінгіт, менінгоенцефаліт, розсіяний склероз, енцефаломієліт) - це клітини епендими желудочковпаутінной оболонки, а так само лімфоцити, моноцити і плазмоцити зі змінами ядра і цитоплазми.
Змінені клітини і тіні клітин виявляються при длітельноміх знаходженні в спинномозковій рідині. Найчастіше піддаються аутолізу нейтрофіли, клітини павутинної оболонки, епендими шлуночків. Діагностичного значення змінені клітини і тіні клітин не мають.
Кристали лікворі виявляються рідко. На 4-5 день після субарахноїдального крововиливу, черепно-мозкової травми виявляються кристали гемосидерина, в разі розпаду пухлини у вмісті кісти можна виявити кристали гематоидина, холестерину, білірубіну, так само кристали холестерину утворюються в осередках жирової дистрофії, некрозу тканини мозку і в кістах мозку . Для виявлення кристалів в спинномозковій рідині використовують реакції, представлені в таблиці 4.
Реакції, що використовуються для виявлення кристалів в лікворі
В азотній кислоті дають зникає синє забарвлення
Виявляються реакцією на берлінську блакить, клітини фарбуються в синій і блакитний кольори
Розчиняються в спирті, ефірі, розплавляються в концентрованої сірчаної кислоти з утворенням конедансаціонних з'єднань червоного кольору
Розчинні в хлороформі і лугах
Елементи ехінококка- гаки, сколекси і обривки хітинової оболонки міхура ехінокока можуть бути виявлені при множині ехінококозі мозкових оболонок. Знаходять їх надзвичайно рідко.