С. Федотов, М. Чернов, Е. Капітонов, Алтайський ГАУ
В останні роки спостерігається збільшення питомої ваги інфекцій, викликаних асоціаціями умовно-патогенних мікроорганізмів. Вони характеризуються вираженим клінічним поліморфізмом, пов'язаним з одночасним впливом декількох агентів, що ускладнює інтерпретацію результатів лабораторних досліджень, так як кожна зі складових мікст-культур має ряд ознак, поєднання яких може визначати патогенний потенціал збудників в цілому.
Для хорошого здоров'я птиці неоьбходіма чиста вода. Для очищення води варто застосовувати дискові фільтри. Основною перевагою такого виду очищення води є максимально високу якість фільтрації в широкому діапазоні ступенів очищення з дисковим і сітчастим фільтрують
Встановлено, що такі захворювання перешкоджають виявленню основного етіологічного агента, що викликає інфекційний процес, і ускладнюють проведення етіотропної противоинфекционной терапії. Також не повністю розшифрована структура самих мікробних асоціацій, не в достатній мірі виявлена роль деяких складових мікроорганізмів в їх прямому чи опосередкованому впливі на організм птиці.
У той же час міжбактеріальному взаємодії як один з механізмів формування асоціацій мікроорганізмів і прояву їх патогенних властивостей вивчені недостатньо в зв'язку з недосконалістю методів діагностики.
Аналізуючи біохімічні зміни в крові клінічно хворої птиці, дані патолого-анатомічного розтину та результати морфологічних досліджень, можна припустити, що характер патоморфологічних змін структури фолікулів яєчника вказує на виражене цитотоксичну дію збудника інфекції. Спостерігається посилення лімфоцитарною інфільтрації фолікулярної і текальнимі оболонок, збільшення кількості формених елементів крові і тканинних базофілів.
У курей з патолого-анатомічними ознаками фолікуліту яєчник був контаміновані стафілококами, кишковою паличкою, стрептококами і протеєм в усі терміни спостережень. Максимальне число такого птаха встановлено в період активної несучості. Мікрофлора переважно була в формі асоціацій, при цьому більшою мірою виділялися організми з високим ступенем вірулентності, такі, як золотистий стафілокок і гемолітичні штами ешерихій.
Так, з фолікулів яєчників курей у віці 150-250 днів стафілококи відзначені частіше, ніж інші мікроорганізми, - в 56 випадках (63,64%). У тому числі з кишковою паличкою - в 14 (15,92%); з кишковою паличкою і стрептококом - в 8 (9,09%); зі стрептококом - в 1 (1,14%); з протеєм - в 7 (7,95%); з протеєм і кишковою паличкою - в 4 (4,55%) і в 22 (25,0%) - у вигляді монокультур.
Високим ступенем висівання характеризувалася і кишкова паличка (42,05% випадків), особливо зі стафілококами (15,92% випадків). Число птиці, у якої з вмісту фолікулів виділяли асоціації кишкової палички зі стрептококом, склало 3 (3,41%) голови. У 2 (2,27%) випадках вона спостерігалася з протеєм, в 8 (9,09%) - зі стафілококами і стрептококами, в 10 (11,36%) - у вигляді монокультур.
У більшості випадків стрептококи і протеї з вмісту фолікулів у вигляді монокультур ізолювали тільки від трупного матеріалу дорослих курей, а стафілококи і кишкову паличку висівали як з трупів, так і вимушено забитої птиці.
При мікробіологічної діагностики репродуктивних органів у клінічно здорових курей стафілококи, ентерококи і др. З висівали. Фолікули яєчників були округлої форми різної величини. Їх вміст жовтого кольору, і консистенція середньої густини.
Захворювання яєчників у птиці мають полімікробні етіологію, провідна роль в якій належить умовно-патогенних мікроорганізмів, переважно в асоціаціях факультативно-анаеробної і анаеробної мікрофлори. Наші дані підтверджуються експериментами Batra C.L. Singh В. Crewal C.S. SodhiS.S. (1982).
Мікробіологічні дослідження показали, що на птахофабриках вдається виявити поширення штамів стафілококів наступних видів: St. aureus (72,7%), St. saprophyticus (13,6%) і St.epidermidis (13,6%). При проведенні подальшої типізації St. aureus виявили різні біологічні варіанти. Так, від курей з клінікою фолікуліту яєчника виділяли біовари hominis, gallinae і А / В. Крім них на «Павлівської» птахофабриці висіяв біовар C / D, а на «Молодіжної» - canis. Проте спостерігалася позитивна кореляційний зв'язок між біологічними варіантами стафілококів виду St. aureus, виділених на обох птахофабриках (r = 0,79).
В результаті серологічної типізації 78 ентеропатогенних культур 87% з них віднесені до сероварам: 01, 02, 078, 09, 055, OIII і OI4I. При цьому до серотипу 02 ми віднесли 65,5% культур, до 078 - I 3,3, до 01 - 11,6%, до 09, OIII, OI4I - по одній культурі E.coli, до 055 - 2 культури. Таким чином, найбільш поширеними і вірулентними для лабораторних тварин були культури ешерихій сероварів 01, 02, 078.
У процесі досліджень виділено три групи стрептококів: b-гемолітичні (Str. Hemolyticus), що викликають гемоліз еритроцитів; а-зеленящий (STR. viridans), що утворюють навколо колоній зелену зону гемометаморфоза; негемолітичні у-стрептококи (Str. anhemolyticus), що не змінюють еритроцити і не викликають гемоліз кров'яного агару. З 32 культур стрептококів, виділених в динаміці захворювання курей, патогенними для білих мишей виявилися 14, що становить 39,64 відсотка.
Вивчаючи морфологічні та культурально-біохімічні властивості бактерій з роду протея, виділених з уражених фолікулів, провели типізацію. Протея, розтлінного глюкозу (К + Г +) і сахарозу, віднесли до виду мірабільного (Proteus mirabilis), а розтлінного глюкозу (К + Г +), сахарозу і мальтозу - до вульгарного (Proteus vulgaris). Мікроби цієї групи характеризувалися високим ступенем патогенності: 14 (57,33%) з 27 культур виявилися патогенними для білих мишей.
Узагальнюючи отримані результати мікробіологічних досліджень, відзначаємо, що з ураженого яєчника виділяли стафілококи, представлені St. aureus, St. saprophyticus і St. epidermidis і Е. coli у вигляді сероварів 01, 02, 078. Рідше відзначені стрептококи і Protei vulgaris.
Отримані результати підтверджуються дослідженнями Датського інституту хвороб птахів (Bisgaard M. Dam A. 1981). Вони виявили змішану мікрофлору з уражених статевих органів курей в 16 випадках (11%), в той час як неспецифічний зростання - в 3. Виявили 19 різних О-груп кишкової палички, найбільш часто зустрічався серотип 02.
При мікробіологічному дослідженні ембріонів (1 проба - 5 ембріонів у віці 21 дня) виявлено 1 7 проб Е. coli; 1 3 - St. aureus і Е. coli; 6 - St. aureus; 6 - St. aureus, Citrobacter frendi і Е. coli; 9 - Citrobacter frendi і Е. coli.
Традиційно застосовувані таксономические методи ідентифікації патогенних мікроорганізмів на птахофабриках Алтайського краю засновані на використанні різних хемотаксономіческіх тестів, таких, як специфічна ферментативна активність, здатність метаболизировать цукор або підтримувати зростання на середовищах з селективними добавками.
Складність стандартизації умов подібних тестів, а також природна фенотипическая варіабельність, притаманна багатьом мікроорганізмам, можуть бути причиною неправильної ідентифікації.
Значною мірою бактеріологи продовжують залежати від морфологічних і біохімічних критеріїв при визначенні мікроорганізмів, що виділяються з патологічного матеріалу та об'єктів навколишнього середовища.
У деяких випадках ідентифікація та класифікація патогенних мікроорганізмів не відповідає запитам ветеринарної практики. Обумовлено це наявністю ряду обставин; основні: незадовільна експресія фенотипічних ознак, перш за все факторів патогенності у бактерій в різних умовах їх культивування; існування некультивованих бактерій; здатність більш ніж 20 видів патогенних бактерій переходити в стан спокою, що характеризується різко зниженою метаболічної активністю і тимчасовою втратою здатності до розмноження; наявність генетичного механізму, що здійснює постійна зміна антигенних детермінант в організмі-хазяїні, що, з одного боку, допомагає збудника виживати в макроорганизме, йдучи від впливу імунної відповіді організму-господаря, а з іншого - призводить до невдач лабораторної діагностики при використанні сероіммунологіческіх методів.
Слід визнати, що в лабораторній практиці також існують природні обмеження при використанні фенотипических методів оцінки лікарської стійкості збудників асоційованих інфекцій.
Діскодіффузний метод визначення чутливості до протимікробних препаратів є домінуючим в практичній діяльності ветеринарних лабораторій Алтайського краю.
Його основна перевага - простота у виконанні і економічна доступність. До теперішнього часу він залишається кращим для більшості лабораторій.
Разом з тим очевидні його недоліки: метод використовують при визначенні чутливості до антибіотиків обмеженого числа мікроорганізмів; він непридатний, якщо мікроб не утворює на поверхні агарізірованной живильного середовища або гомогенний газон певної щільності, або газон утворюється після 24-годинної інкубації бактерій, а грибів - після 48 годин.
Для реалізації методу придатний вузьке коло поживних середовищ, часто не призначених для зростання вимогливих мікроорганізмів. Зона пригнічення росту мікроба не завжди адекватна його істинної чутливості до протимікробних засобів і т.д.
Крім того, результати хемотаксономіческіх тестів можуть бути перекручені в зв'язку зі зниженням активності антимікробних препаратів в процесі тривалого культивування мікроорганізмів, тому не є підставою для оцінки їх чутливості.
З представлених прикладів видно, що в арсеналі сучасних бактеріологічних лабораторій птахофабрик повинні бути методи, що дозволяють ідентифікувати, класифікувати і диференціювати патогенні мікроорганізми незалежно від форми або стану.
Крім традиційних способів визначення видової приналежності збудників асоційованих інфекцій повинна приділятися увага їх геномних характеристикам. Це особливо важливо для тих мікроорганізмів, які зазнають адаптивні зміни під впливом несприятливих екологічних чинників, антибактеріальної терапії, при контакті з хворим птахом і продуктами птахівництва.
Методи індикації мікроорганізмів повинні поєднувати швидкість, специфічність, володіти функцією мультиплексна, відповідати сучасному рівню розвитку лабораторної справи.
До таких сьогодні відносяться ПЦР і секвенування чутливості і специфічності, які перевершують всі існуючі дотепер хемотаксономіческіе методи, оскільки виявляють гени (нуклеїнові кислоти) збудників, а не антигени і антитіла.
Застосування ПЛР-діагностики для виявлення джерела виникнення вогнища інфекції, виділення і вивчення збудників інфекційних хвороб (асоційованих інфекцій) як протягом епізоотії, так і в межепізоотіческій період дозволить стежити за зміною генетичної структури мікроорганізмів, передбачати появу нових варіантів і створювати адекватні засоби захисту і діагностичні препарати. Крім цього вона дозволяє визначати наявність збудника в період так званого «серологічного вікна», тобто в проміжку між моментом інфікування організму і появою антитіл в кількостях, достатніх для визначення.
Метод ПЛР має ряд переваг перед хемотаксономіческімі методами. До теперішнього часу матеріальна база для його успішного застосування досить розвинена. Всі її компоненти (прилади, набори для виділення ДНК, ферменти і т.д.) широко представлені на ринку і стають доступними за ціною. Впровадження його дозволить більш ефективно проводити лікування і профілактику захворювань, викликаних асоційованими інфекціями.